穴位埋线疗法对雌性去势大鼠生殖内分泌激素及体重变化的影响

穴位埋线疗法对雌性去势大鼠生殖内分泌激素及体重变化的影响 穴位埋线疗法对雌性去势大鼠生殖内分泌 激素及体重变化的影响 新中医2008年6月第40卷第6期 JOURNALOFNEWCHINESEMEDIClNEJUNE2008Vo1.40NO.6?97? 实验研究 【文章编号]0256—7415(2008)06—0097—03 穴位埋线疗法对雌性去势大鼠生殖内分泌激素 及体重变化的影响 陈贵珍’,许云祥2,张家维2 1.华南师范大学信息光电子科技学院光子中医学实验室,广东广州510631; 2.广州中医药大学针灸推拿学院,广东广州510405 【摘要】目的:观察穴位埋线疗法对雌性去势大鼠生殖内分泌激素,体重的影响.方法:摘除大鼠双侧卵巢 建立更年期综合征病理模型.经阴道脱落细胞涂片检测,将去势成功的模型大鼠32只.随机分为3组.埋线 组l1只行埋线疗法,药物组l1只给予尼尔雌醇溶液灌胃,模型组l0只给予蒸馏水灌胃.并设假手术组l0只 作对照.在末次治疗后第5天处死,观察各组大鼠雌二醇(E),睾酮(T),卵泡刺激素(FSH),黄体生成素 (LH),促性腺激素释放激素(GnRH)含量及体重变化.结果:E,T,FSH,LH,GnRH含量模型组与假手术组 比较,差异均有显着性或非常显着性意义(P<0.05,P<0.01).埋线组大鼠血清E:水平与模型组比较升高 (P>0.05),而FSH,LH,GnRH水平与模型组比较则下降 (P<0.0l,P>0.05,P>0.05);埋线组与药物 组E,T,FSH,LH,GnRH的变化基本相当.模型组在疗程结束时体重较大,与假手术组同期比较,差异有 显着性意义(P<0.05).药物组在第1次治疗后体重开始骤降(P<0.05),在疗程结束时,与假手术组同期比 较,差异无显着性意义(P>0.05).埋线组在第3次治疗后体重开始下降,且在疗程结束时,与假手术组同期 比较,差异无显着性意义(P>0.05).结论:穴位埋线疗法有类雌激素样作用,对雌性去势大鼠的下丘脑一垂 体一性腺轴有调节作用,并可有效遏制去势大鼠体重的增加,与雌激素疗法比较,效果相当,作用较平缓,整 体调节优势明显. 【关键词l埋线;生殖内分泌激素;体重;卵巢切除术;疾病模型,动物;大鼠 【中图分类号JR245.9l;Q579.1【文献标识码】A 现代医学认为,卵巢功能衰退,雌激素水平过度降低是 更年期综合征的发病机理.更年期妇女易出现体型发胖,主 要是由于成年到老年过渡时期,内分泌功能暂时紊乱,影响 脂肪代谢所致.其肥胖的特点是:内脏脂肪蓄积过多,大于 皮下脂肪的蓄积,脂肪大多堆积在腹部,臀部及上,下肢等 处…,以闭经后尤甚.因此,本研究旨在观察卵巢切除所致更 年期模型大鼠的生殖内分泌变化情况及穴位埋线疗法对该模 型生殖内分泌,体重的影响效应,以期为临床提供实验依 据,结果报道如下. 1与方法 1.1仪器,试剂与材料放免一测量仪(SN一695B,上海 Et环核仪器厂),离心机(DDL一5,上海安亭科学仪器厂),低 温冰箱(MDF—D5410,日本三洋公司).雌二醇(E:),睾酮 (T),卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)放射免疫药盒(批 号:20050425,北京科美东雅生物技术有限公司),促性腺激 素释放激素(GnRH)试剂盒(批号:20050501,第二军医大学神 经生物学教研室).埋线针套管(6号一次性无菌注射针头,浙 江欧健医用器材有限公司),针芯(华佗牌28号1.5寸毫针, 苏州医疗用品厂),将针尖剪平,使其不易与线端缠粘,稍长 于注射针头尖端约0.5cm,以保证将肠线推出针管;羊肠线 (4/0号,上海浦东金环医疗用品有限公司).速眠新?注射液 (军事医学科学院军事兽医研究所),尼尔雌醇片(批号 040101,上海华联制药有限公司),安尔碘(上海利康消毒高科 技有限公司). 1.2动物分组及处理育龄未孕雌性SD大鼠50只,体重 (250?20)g,广东省医学实验动物中心提供,合格证号: 0006318.实验前置动物于室内适应环境l周,自由摄食(饲料 由本院动物实验中心提供)和摄水,室温l8,22~C,相对湿度 【收稿日期】2007—09—2l 【基金项目】中国博士后科学基金一等资助项目(编号:20070410242);广东省中 医药局建设中医药强省科研课题(编号:2007166) 【作者简介】陈贵珍(1972一),女,在站博士后,研究方向:运用光电技术探讨经穴 效应特异性规律. ? 98? 新中医2008年6月 JOURNAL0FNEWCHINESEMEDICINE 第40卷第6期 JUNE2008VoI40No6 65%,照明昼夜明暗交替,时间12:12小时,环境合格证 号:0005021. 50只大鼠,随机选取l0只行假手术,另40只行双侧卵 巢摘除术.大鼠用速眠新?注射液0.8mL?kg肌肉注射麻醉 成功后,备皮,使大鼠侧卧于手术台上.需去势大鼠按照《医 学动物实验实用手册》『21行双侧卵巢摘除术,术后间断法缝合 皮肤,继撒消炎粉于创面.肌肉注射青霉素生理盐水溶液8万 U抗炎,每天1次,连续3天.假手术大鼠于开腹后暴露双侧 卵巢,不予切除,余同去势大鼠,双层缝合,撒消炎粉于创 面,术后青霉素抗炎3天.手术过程中假手术大鼠有1只死 亡,双侧卵巢摘除术大鼠有5只死亡.术后第5天开始进行阴 道脱落细胞涂片检测,连续5天.去势大鼠可观察到底层细胞 均在50%以上,无动情周期性变化,符合更年期特征, 去势彻底,确立为更年期实验动物模型.共32只大鼠去势成 功,随机分为3组,模型组l0只,埋线组11只,药物组11 只,符合设计要求.上述各组大鼠照明,通风,温度,湿度等 饲养环境条件同前,治疗过程中无大鼠死亡. 术后第11天开始操作或给药.?埋线组大鼠取穴:肾俞 (双),三阴交(双),关元,并参照《实验动物针灸学》”中常 用实验动物针灸穴位定穴.操作方法:先将羊肠线剪成0.5cm ,埋线穴位处常规?肖毒 装入95%酒精中浸泡备用;施治时 后,将针头快速刺入穴内,上下提插得气后,缓慢将羊肠线植 入穴位深处,检查其断端无外露,无出血后,按压针孔片刻后 消毒,结束操作.?药物组用尼尔雌醇灌胃.将尼尔雌醇研成 粉末状,加蒸馏水配成浓度为0.2g/L溶液,以5mL?kg灌 胃.尼尔雌醇溶液于每次灌胃前配制,即配即灌.?模型组和 假手术组按5mL?kg用生理盐水灌胃.每5天施行1次以上 操作或给药,连续4次. 术后第3l天,即末次治疗后第5天,快速断头采血.其 中5mL血液置于预先备好的试管中取血清;3mL于预先备好 的抗凝试管中取血浆.静置于4~C环境中2小时后离心.离心 条件:4~C,3000r/min15分钟.分离出的血清,血浆,分装 于1.5mL的塑料离心管中,于一30~C低温冰箱中保存备测. 1.3E,T,FSH,LH,GnRH测定由广州中医药大学核 医学实验室专业人员进行操作,均采用放射免疫分析法 (RIA),按试剂盒操作规程所附说明书进行. 1.4体重测定于术前1天,术后第16天(第2次治疗 前),术后第26天(第4次治疗前),术后第30天(疗程结束) 各称重1次. 1.5统计学方法实验数据采用SPSSf0rwindow11.5统计 软件进行数据分析,样品测定数据以(?s)表示.组内治疗 前后及2组间计量资料的差别以One—wayANOVA模型进行 分析,用LSDPostHocTests检验,重复测量数据采用重复测 量方差分析.所有检验结果以(P<0.05)作为评定差异有显着 性意义的. 2结果 2.14组大鼠血清E:,T含量比较见表l.模型组大鼠血 清E:,T明显降低,与假手术组比较,差异有显着性或非常显 着性意义(P<0.05,P<0.O1).埋线组E:,T虽低于假手术 组,但E与假手术组比较,差异无显着性意义(P>0.05). 埋线组E,T较高,但与模型组比较,差异无显着性意义(P >0.05).埋线组与药物组比较,E:,T差异无显着性意义(P >0.05) 表14组大鼠血清E2,T含量比较(?s) 与假手术组比较,?P<0.05,?P<0.0l,?P> 0.05;与模型组比较,?P>0.05;与药物组比较,?P> 0.05 2,24组大鼠血清FSH,LH含量比较见表2.模型组大 鼠血清FSH,LH较高.与假手术组比较,差异均有非常显着 性意义(P<0.o1).FSH,LH水平埋线组与假手术组比较, 差异无显着性意义(P>0.05).埋线组FSH下降,与模型组 比较,差异有非常显着性意义(P<0.01),LH也有下降,但 差异无显着性意义(P>0,05).FSH,LH水平埋线组与药物 组比较,差异无显着性意义(P>0.05). 24组大鼠血清FSH,LH含量比较(?s) 表 与假手术组比较,?P<0,ol,?P>0,05;与模型组 比较,?P<0.ol,?P>0.05;与药物组比较,?P> 0,05 2.34组大鼠血浆GnRH含量比较见表3.模型组大鼠血 浆GnRH水平最高,与假手术组比较,差异有显着性意义(P< 0.05).埋线组,药物组较高,与假手术组比较,差异有显着 性意义(P<0.05);但与模型组比较,差异无显着性意义(P> 0.05).埋线组与药物组比较,差异无显着性意义(P>0.05). 2.44组大鼠体重变化比较见表4.模型组在疗程结束时 体重较大,与假手术组同期比较,差异有显着性意义(P< 0.05).药物组在第1次治疗后体重开始骤降(P<0.05),在 疗程结束时,与假手术组同期比较,差异无显着性意义(P> 0.05).埋线组在第3次治疗后体重开始下降,且在疗程结束 新中医2008年6月第40卷第6期 JOURNALOFNEWCHlNESEMEDIClNEJUNE2008Vo1.40No6?99? 时,与假手术组同期比较,差异无显着性意义(P>0.05). 表34组大鼠血浆GnRH含量比较(?s) 与假手术组比较,?P<0.05;与模型组比较,?P> 0.05;与药物组比较,?P>0.05 表44组大鼠体重变化比较(i?s)g 与假手术组比较,?P<0.05,?P>0.05;与模型组 同期比较,?P<0.05 3讨论 本实验结果表明,大鼠行双侧卵巢切除后,体重增加的趋 势较假手术组明显;去势模型大鼠血清E,T水平明显下降, 且Ez降低幅度大于T,而FSH和LH水平明显升高,与人类 更年期绝经后内分泌改变及更年期妇女肥胖的临床表现相符. 埋线组大鼠血清E水平与模型组比较升高(P>0.05),而 FSH,LH,GnRH水平与模型组比较则下降(P<0.01,P> 0.05,P>0.05);埋线组与药物组E2,T,FSH,LH,GnRft 的变化基本相当,提示埋线疗法有一定调节激素水平的作用, 且与雌激素补充疗法差别不大.由于本实验中人为切除了大鼠 的卵巢,即完全切断了卵巢源性的雌激素分泌,故埋线组的雌 激素水平主要依靠卵巢外周转化维持(肾上腺皮质及周围组织 如皮肤,皮下脂肪,肝等的芳香化转化),而药物组则主要靠 外源性的雌激素直接补充.因此,多项指标均难于恢复原有水 平,故与模型组差别均不大. 雌激素补充疗法对去势大鼠体重的影响比较迅速,约5天 就能起效;而埋线疗法则作用较缓,需要约15天才能起效, 提示埋线疗法可能更有利于机体功能的整体调节.故笔者推 测,穴位埋线体现的是一种整体效应,其对去势大鼠生殖激 素,体重的影响,可能是通过调节下丘脑一垂体一肾上腺轴的 作用来实现的,从而对绝经后外周芳香化转变过程有一定的活 跃或促进作用;亦可能是通过提高雌激素受体水平及雌激素活 性而起作用的.而其确切作用机理还有待进一步的深入研究. 【参考文献] [1】任金凤,金仲品.年龄增长与肥胖症的研究进展[J】.实 用老年医学,2004,18(2):98. 【2】石岩,梅世昌.医学动物实验实用手册【M】.北京:中国 农业出版社,2002:95. [3】李忠仁.实验动物针灸学[M】.北京:中国中医药出版 社,2003:329. (编辑:骆欢欢)