关于神经抑制类农药对某鱼胆碱能受体的作用

关于神经抑制类农药对某鱼胆碱能受体的作用 关于神经抑制类农药对某鱼胆碱能受体的作用 !!1 文献综述 1.1 农药及其污染农药作为一类毒性较高且不易分解的化学品，在使用后很容易通过地径流、雨水冲刷和渗透等方式进入水环境中并造成水体污染[2]。随着工农业的快速发展和农药的大量使用，农药污染问题已然成为一项突出的环境污染问题。根据联合国粮农组织的报告，全世界每年约发生 100~500 万起农药中毒事 件。在我国，农药每年的使用量达 50 万~60 万 t，而这些农药被植物体或动物体截留的不足 20%，有 80%以上的农药在使用后是直接进入环境的[3]。而根据国家统计局发布的相关数据，2017 年中国农药的产量为 190 万 t，2017 年则到达 240 万 t，产量和增幅均居世界首位。长期并大量地使用农药，不仅会直接严重污染环境，也会使残留的部分通过食物链达到生物富集，进而对动物和人类产生毒性。 1.2 受试农药20 世纪 30 年代，德国人施拉德(G Schrader)领导的研究小组在化学合成的一系列化合物中发现了一些有机磷酸酯类具有杀虫作用，此后有机磷农药(OPPs)开始生产和发展起来。1943 年生产出了第一个商品化的有机磷杀虫剂特普(TEPP，焦磷酸四乙酯)，主要用于害虫防治;1944 年有机磷杀虫剂对硫磷(Parathion)开始大量生产;同时一些低毒品种，如乐果、马拉硫磷、敌百虫和杀螟松等也开始广泛用于农业害虫、卫生害虫、家畜害虫等的防治。到 2017 年有机磷类杀虫剂已占总杀虫剂的 1/3[4]。到目前为止，许多有机磷农药品种仍在全球的动植 ，如草甘膦，物保护中发挥着重要作用，而且很多有机磷品种成为农药的骨干品种 已成为全球销售额最高的农药品种。。。2 马拉硫磷、灭多威和溴氰菊酯对斑马鱼的急性毒性作用本部分实验分别测定了在马拉硫磷、灭多威和溴氰菊酯暴露下斑马鱼的 24 h 半致死浓度(50% Lethal Concentration in 24h，24 h-LC50)，以便在后续研究中实现各种农药毒性浓度的统一。2.1 材料与方法斑马鱼(Danio rerio)，由山东师范大学生命科学学院繁育，斑马鱼成体长(3.0 0.2) cm，体重( 0.3 0.05) g，培养方式为流水培养，水温: 26 2 ?，光照周期为 16 h(明): 8 h(暗)，早晚定时投喂干饲料 2 次，并清除排泄物。本实验采用体长 3.0 0.2 cm 的健康斑马鱼，采用随机取样法取样。分别选用了有机磷类农药马拉硫磷(纯度 99%)、氨基甲酸酯类农药灭多威(纯度 99%)和拟除虫菊酯类农药溴氰菊酯(纯度 98.2%)作为试验药物，药品标准样均购于中国标准样品中心。马拉硫磷直接溶于 pH 5.0 的去离子水中，灭多威溶于 pH 7.0 的去离子水中，溴氰菊酯溶于 0.5%总水体积的二甲基亚砜(DMSO)中，pH 7.0。2.2 结果与从 3 种农药对斑马鱼的急性毒性来看，斑马鱼对不同农药有不同的耐受性。其中，马拉硫磷和溴氰菊酯对于斑马鱼属于剧毒性毒物，而灭多威对于斑马鱼属于中等毒性毒物。不同农药对斑马鱼毒性大小的不同，可能是因为不同农药的毒性机理不同。有机磷类农药马拉硫磷和氨基甲酸酯类农药灭多威的主要致毒机理都是通过与生物体内的胆碱酯酶结合形成磷酸化的胆碱酯酶，从而抑制胆碱酯酶催化胆碱的水解过程，导致乙酰胆碱等信号分子的代谢紊乱，并使得 mAChR 和 nAChR 发生自适应改变，从而产生神经中毒;区别在于马拉硫磷与胆碱酯酶结合形成的磷酸化复合物非常稳定且不可逆，马拉硫磷还可以直接抑制 mAChR 和 nAChR 的活性，而灭多威与胆碱酯酶的结合反应是可逆的[68]。拟除虫菊酯类农药溴氰菊酯作为一种高毒性的杀虫剂[69]，主要 通过干扰突触膜上的 Na+通道，使神经系统的传导失常，从而产生强烈的毒害作用[70]。在急性毒性实验期间，对照组的斑马鱼运动正常，实验组的斑马鱼由于受药物的毒性作用而出现游动幅度变大、呼吸加快、腮部变红、排泄物变多等神经兴奋行为，这可能是斑马鱼产生的一种回避行为反应[71]。3 马拉硫磷、灭多威、溴氰菊酯对斑马鱼毒蕈碱型乙酰胆碱受体的影响。。。。。193.1 实验。。。.193.2 材料与方法。。。。。。..193.2.1 药品器材。。。。。..194 马拉硫磷、灭多威、溴氰菊酯对斑马鱼烟碱型乙酰胆碱受体活性的影响。。。。..284.1 实验目的。。。。。。.284.2 材料与方法。。。。285 结论。。。。。。。。354 马拉硫磷、灭多威、溴氰菊酯对斑马鱼烟碱型乙酰胆碱受体活性的影响4.1 实验目的分别 设定 0.5 TU、1 TU、2 TU 和对照组，研究不同污染物对斑马鱼 N 型受体的影响，以分子水平研究不同农药对斑马鱼胆碱能系统的影响。4.2 材料与方法马拉硫磷、灭多威、溴氰菊酯，购于国家标准样品中心;牛血清蛋白(BSA)、考马斯亮蓝，SBH-Bio 公司;二甲基亚砜(DMSO)，Biosharp 公司;NaCl、Na2HPO 4、NaH2PO 4、乙醇，分析纯，国药集团;斑马鱼烟碱型乙酰胆碱受体酶联免疫分析(Elisa)试剂盒。超声波破碎仪，BILON-650Y，上海比朗仪器有限公司;酶标仪、高速离心机、分光光度计、恒温干燥机、电子天平、恒温水浴锅等。将斑马鱼暴露于 0 TU、0.5 TU、1 TU 和 2 TU 的不同农药中，每 1 h 取样 1 次，连续取样 12 h 或至斑马鱼全 1 h 内有斑马鱼死亡，则另外取样。样品分别装入 EP 部死亡。如果实验组中每 管，于-80 ?冰箱中保存将-80 ?冰箱中的样品，加入 9 倍体积的预冷的 PBS(0.1 M，pH 7.2)，迅速用超声波破碎仪破碎，破碎完成后装入离心管，在 4 ?、2,500 rpm/min 下离心 25 min，取上清液作为粗蛋白液。以 BSA 为参照，通过 Bradford 法[72-74]测定蛋白含量，将蛋白液浓度确定为 0.5mg/ml。具体测量方法见表 3-1。用双抗体夹心法测定斑马鱼体内nAChR 的活性。用纯化的 nAChR 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 nAChR 标准品和样品蛋白。辣根过氧化物酶(HRP)标记的 nAChR 抗体结合，并形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加HPR 底物四甲基联苯胺(TMB)显色。TMB 在 HRP 的催化下转化成蓝色，并在酸性作用下转化成黄色，颜色的深浅与样品中 nAChR 的浓度呈正相关。。..5 结论本论文选用广泛应用于工农林生产中的有机磷类农药马拉硫磷、氨基甲酸酯类农药灭多威和拟除虫菊酯类农药溴氰菊酯，这三种神经抑制类农药作为受试药物，以斑马鱼(Danio rerio)作为模式生物进行毒性效应研究。研究不同时间不同农药暴露下斑马鱼的mAChR 和 nAChR 活性变化规律，得出以下结论: 1. 24 h 急性毒性实验表明: 3 种农药对斑马鱼的毒性存在差异，毒性大小依次是，溴氰菊酯 马拉硫磷 灭多威。马拉硫磷、灭多威和溴氰菊酯对斑马鱼的 24 h-LC50 分别 9.48 g/L、2299.23 g/L、5.32 g/L。对于斑马鱼来说，马拉硫磷和溴氰菊酯属于剧毒性毒物，而灭多威属于中等毒性毒物。斑马鱼的死亡率与这三种农药的浓度均呈正相关，具有较高的相关系数，且具有明显的剂量 效应关系(Dose-effect relationship)。斑马鱼在受到不同毒物的刺激时，均会表现出明显的行为变化，这与斑马鱼在毒物条件下的适应相关。。。探讨静息态之汉字加工神经系统以下是本人精心为您编辑整理的静息态之 汉字加工神经系统，供您参考，我们会持续更新，请留意，更多详细请点击我查看。1引言 1.1脑功能研究长久以来，人们一直致力于研究人脑。1811年，贝尔根据高等动物和人的脑形态与功能不同，将大脑分为大脑、小脑、又将脊髓分为背根和腹根。这一发现成为脑机能定位理论的开始[2]。继而，人们逐渐从脑的解剖学研究深入到脑的组织学研究，1866年，布罗卡(P.Broca)发现了位于额叶的 言语运动中枢 ， 1874年，维尔尼克(K.Wernicke)发现了语言感觉区。前者受损伤出现语言产出障碍，称为运动性失语症;后者受损伤发生语言理解障碍，称为感觉性失语症。关于这两个脑区引起的语言障碍会在后面进行详细介绍。近年来，计算机断层扫描技术(Computerized tomography, CT),脑事件相关电位技术(Event-related potentials,ERP),正电子发射层扫描术(Positron emission tomograpgy, PET)，脑核磁共振技术(Nuclear magnetic resonance, NMR)和单光子(Single photon detector)等技术的出现，使脑功能研究取得了质的飞跃。关于脑功能的每一种理论都是以一定的方法学新进展为先导。随着自然科学发展速度的提高，从新方法出现到新理论形成的间隔也越来越短[2]。 1.2功能核磁共振成像研究背景现在常用的功能成像技术包括正电子成像断层成像(Positron EmissionTomography，PET)，功能核磁共振成像(Functional Magnetic Resonance Imaging，fMRI )，多通道脑电图〔Electroencephalography，EEG )，脑磁 (Near-Infrared 图(Magnetoencephalography, MEG),近红外波谱成像 Spectroscopy,NIRS),以及核磁共振波谱成像(Magnetic Resonance Spectroscopy，MRS)等。在实验过程中，可以根据具体的实验需求釆用合适的技术。EEG和MEG具有很高的时间分辨率，可以在亳秒级水平上记录大脑的活动，但是，空间分辨率较低，仅能达到厘米级的水平。fMRI和PET在空间上具有很高的分辨率，可以达到毫米级，但是，时间分辨率上只能记录几秒或者更长时间的大脑活动丨3]。fMRI机制是血氧水平依赖性(Blood oxygen level dependent，BOLD)信号的变化。fMRI可以快速地记录大脑的活动状态，它的优点在于无创伤、非侵入性、无辖射、具有比较高的空间和时间分辨率。该技术一经推出，就被广泛的应用到认知神经学以及心理学的多个领域。本文正是采用fMRI技术进行研究。一个典型的fMRI大脑功能研究应该包括三个步骤: 提出假设设计实验、釆集实验数据、对数据进行分析，如图 1.1所示。图 1.1是一个汉字任务下fMRI研究，后面会详细介绍。2静息态下成年人和儿童汉字加工神经机制的研究2.1静息态下成年人汉字加工神经机制的研究20名健康视力正常的右利手被试(年龄: 20-25岁，8名男性)，参与实验。所有被试均没有精神病史，体内也无金属植入物。所有被试都被告知了实验的和相关权利，并签著了知情同意书。该实验得到了西南大学机构审查委员会的许可。在数据预处理甜，静息态序列的前15个图像被舍弃。这是为了和儿黄序列进行匹配，因为儿章在刚进入扫描仪的时候，需要比较长的时间来适应。为了去除T1效应的影响，任务序列的前3个图像被舍弃。2.2静息态下成年人和儿童汉字加工神经机制的对比分析之前的结果表明，成年人和儿童具有相似的VWFA(成年人: X = -51, Y = -54，Z = -9;儿童: X = -48，Y = -51, Z = -12)o然后，为了比较静息态下成年人和儿童汉字加工网络是否相同，我们对FC结果(成年人和儿童)以及ALFF结果(成年人和儿童)分别进行了 conjunction分析;为了比较静息态下成年人和儿童汉字加工网络是否存在不同，我们对FC结果(成年人和儿童)以及ALFF结果(成年人和儿童)分别做双样本检验分析。 3 静息态下汉字加工脑网络的闪果分析 393.1Granger因果方法介绍 393.2实验设计和数据处理 434静息态下男女汉字加工神经机制的差异性研究 534.1语#性别差异背景知识介绍 534.2实验设计和数据处理 544.2.1 被试 544.2.2核磁扫描参数 545结束语 715.1本文回顾 714静息态下男女汉字加工神经机制的差异性研究4.1语言性别差异背景知识介绍男女差异性一直是个热点。在语言加工这个问题上，有没有性别差兒，-直存在很多争议。从行为学上来讲，从儿童时期，女孩就比男孩表现出更好的语言加工能力女孩开始说话比较早获取词汇更快而在青少年时期，女性依然比男性有更好的语言加工能力。就连在-本专门讨论男女差异的畅销书《男人来自火星女人来自金星》中，也有对男女语言能力不同和突出女性语言能力的描述: 男人重视力量，能力，效率和成就。他们的自我价值是通过所获得的成就来定义的。能否实现预定的目标或独立宪成要做的: 琪情是他们能力的表现。所以男人最不愿意让人告诉他该如何做事。他没要求你就主动去帮‎‎助他，是对他的不信任，不相信他能独立完成要做的事情，这是对他的冒犯。男人对此非常敏感。女人重视感情，交流，芙和分享。她们花很多时叫在相瓦帮助和相互安慰上。她们的自我价值是通过感觉和相处的好坏來定义的。只有分享和交流I使她们感到满足。当别人谈话时，她们从来不提供答案。耐心地倾听别人的谈话，理解别人的感觉，是她们爱和尊重别人的表示。我们可以卷出，相比于男性，女性更愿意与别人进行交流。换而言之，女性更愿意与他人交谈。4.2实验设计和数据处理27名免性(年龄: 18-25岁)和24名女性(年龄: 18-25岁)，健成视力TR常的右利手被试参与了实验。所有被试均无精神病史，体内也无金属植入物。所有被试都被告知了实验的注意事项和相关权利，并签署了知情同意书。该实验得到了西南大学机构屯查委员会的许可。实验分为两个阶段。第一阶段是长度为360秒的静息数据采集。被试被要求闭眼平躺，不进行主观思考，并尽量保持头部不动。第二阶段，被试执行了长度为362秒的视觉判别任务。考虑到磁场饱和度的影响和血液动力学函数存在的延迟，两段12秒的十字基线( + )扫描时间段分别被安排在实验开始和结束。第二阶段山两个扫描序列(session〉组成，每个扫描序列由3个24秒的汉字任务块，3个24秒的面孔任务块，和3个24秒的常见物体任务块组成。相邻的任务块之间有16秒的十字基线( + )扫描时间段。每一个任务块包括6个任务单元(trial)。任务单元幵始为一段500/W5长的十字基线( + )，然后是500;m的空白，挥接着是呈现500m的刺激图片。在1000m的十字基线( + )后，第二幅刺激图片呈现500。最后显示长的十字基线( + )，以便让被试判断出现的两幅图片是否相同。具体请见图4.1。5结束语5.1 本文回顾经过长期的文字加工，人们积累了丰富的视觉加工经验，形成了特殊的文字加工技能。成年人的文字加工过程中，视觉专家知识发挥着重要的作用。赵继政等人研究发现，静息态 下存在一个内在的自组织的汉字加工脑网络。通过功能连接度方法，揭示了汉字加工脑区之问存在功能连接关系，表明大脑在静息态下存在一个处于准备状态的汉字加工网络。那么，儿童是否在静息态下也存在这样的一个汉字加工网络呢?如果存在，和成年人的网络是否有差异呢?5.2下一步展望文字加工神经机制是认知神经科学的一个研究热点。在长期的文字加工过程中，人们形成了对文字快速加工的能力，并积累了卞《的专家知识。在本文对静息态下汉字加工神经机制的研究中，还存在一钱在将来需要进一步研究的问题。 (1)在我们的研究中，静息态下，我们要求被试闭眼休息。但事实上，静息态下挣眼也是一种研究条件。已经有研究表明，视觉皮屋在挣眼时候比闭眼时候存在更显著的低频功能波动。 关于青光眼视网膜神经厚度改变以下是本人精心为您编辑整理的青光眼视网膜神经厚度改变，供您参考，我们会持续更新，请留意，更多详细内容请点击我查看。前言目前许多医家对青光眼的高眼压治疗已有显著效果，在降眼压方面的治疗方法已很多元，但是青光眼患者的视神经的保护仍旧不容忽视。导师孙河教授在国家及省自然科学基金等支持下，经过多年多年的临床和实验研究，发现中医药对青光眼性视神经萎缩的疗效显著，而针剌对治疗青光眼性视神经萎缩的有效性尤其明显，而且还首创 穷明穴 联合传统针刺穴位治疗视神经萎缩，疗效显著。近几年许多学者发现虽然医生通过眼底镜可检查出视盘颜色苍白、生理凹陷加深、杯盘比变大以及视野检查来诊断青光眼性视神经萎缩，但是在青光眼患者视野发生缺损之前，已有至少的视网膜神经纤维层丧失，而且医生的主观判断对检查结果也有一定程度的影响，青光眼患者损伤大多表现为局部缺损伴弥漫性变薄。因此的测量对青光眼的早期诊断显得尤其重要。光学相干断层成像，能够对厚度做出准确的检测，从而根据其厚度的变化诊断青光眼，对早期青光眼的检测地位尤其重要，早期诊断，尽早治疗，可以阻止除眼压以外的其他因素对青光眼的视神经的损害，挽救视功能。具有较高的分辨率及可重复性，已被证实在检测青光眼视祌经损害方面有重要价值。现已成为检测青光眼进展的一个重要工具。但目前国内国外仅将应用于青光眼的诊断中，尚无应用于对青光眼性视神经萎缩疗效的评价。因此本研究将作为观察指标，观察针刺闭角型青光眼性视神经萎缩患者治疗前后厚度有无影响。。。.文献综述1祖国医学对青光眼视神经萎縮旳认识古代有关青光眼的眼痛及头痛的主要症状的相关记载。《素问至真要大论》中有头痛、眼红、眼胀似脱、欲呕等描述，这些症状都是现代医学中急性闭角型青光眼大发作时的症状。本病在中医属五风内障范畴，如果青光眼继续发展，则会继发青光眼性视神经萎缩，其在中医中属 青盲 。《证治准绳》中也有本病的相关描述。本病在发病时瞳仁的颜色会有不同的变化，因其颜色不同，本病的命名也不同。如:素问至真要大论》中有头痛、眼红、眼胀似脱、欲呕等描述，这些症状都是现代医学中急性闭角型青光眼大发作时的症状。本病在中医属五风内障范畴，如果青光眼继续发展，则会继发青光眼性视神经萎缩，其在中医中属 青盲 。《证治准绳》中也有本病的相关描述。本病在发病时瞳仁的颜色会有不同的变化，因其颜色不同，本病的命名也不同。如》中也有关于青光眼的发作时目珠胀痛、睛硬睑硬等症状表述;傅仁宇的《审视瑶函》有描述青光眼发作时瞳神散大的症状。2现代医学对青光眼视神经萎縮的认识有学者通过动物实验发现血管造影中正常眼的高眼压可以减低视网膜及脉络膜血管的血流速 度，而在眼‎‎底表现为视盘颜色苍白、杯盘比加大，而视野缺损的青光眼患者中，在眼底造影可见焚光素的充盈时间脉络膜在视网膜循环后出现。现原发性幵角型青光眼患者的视盘周边血管突光充盈面积减少，缺损的面积大小随病情发展而增加，并且减少的区域伴有突光素的渗漏。通过彩色多普勒发现，原发性开角型青光眼患者的视网膜动脉舒张末期血流速较正常人明显下降。混合学说: 随着研究的进一步深入，越来越多的学者发现，视神经损伤与高眼压和视盘缺血均关系密切，两者可同时作用于视网膜神经纤维和视网膜血管。提出混合学说的概念，这一概念更全面地概括青光眼所致视神经损害的发病机制。临床研究。。..181研究目的。。182研究目的和方法。。..18讨论。。..271课题设计原理。。.272针刺治疗视神经萎缩疗效分析。。32结论。。.35讨论青光眼病理基础是视网膜神经节细胞轴突的损伤，最终结果是视野缺损甚者失明。本病治疗的最终目标在于阻止视神经损害，保护现有视功能。阻断神经节细胞的继续损伤，在青光眼的治疗中将占有重要地位。而目前临床的很多治疗方法仅在实验研究中应用。本课题研究通过针刺治疗青光眼视神经萎缩，从视力、以及等多角度，观察针刺青光眼性视神经萎缩的疗效以及探讨视神经保护作用及其可能的机制。1课题设计原理丝竹空在手少阳三焦经上，位于面部，在眉梢的凹陷处，具有明目安神的功效，主要治疗目赤肿痛、眼睑目聞动等眼部病症以及头痛、齿痛、癫狂痫等头面部病证。现代常用于治疗面神经麻瘦、面肌疫挛、结膜炎等。风池穴属足少阳胆经腧穴，胆经气血在此吸热后化为阳热风气。当胸锁乳突肌与斜方肌上端之间的四陷中，平风府穴，取穴时针尖微下，向鼻尖斜刺寸，主要治疗头痛、头重脚轻、眼睛疲劳、颈部酸痛、落枕、失眠、宿醉等。百会穴为人体督脉经络上的重要穴道之一，具有升阳举陷、醒脑开穷、通督定痫、安神定志之效，位于后发际正中直上寸。简便取穴: 当头部正中线与两耳尖连线的交点处，百会穴主要治疗头痛、头重脚轻、涛疫、高血压、低血压、宿醉、目弦失眠、焦躁等。此穴是治疗多种疾病的首选穴，医学研究价值很高。2针刺治疗视神经萎缩疗效分析其作用机制可能为: 青光眼患者因高眼压等因素的作用，使视神经损伤后，致使视网膜毛细血管扩张，有散在的核染色质边聚、甚至出现空化的节细胞，胞核明显稀疏，严重时各层细胞会出现极性紊乱，排列混乱，混乱的不断的调亡，致使视网膜神经纤维层厚度变薄。而针刺能改善视网膜微循环，从而减轻视网膜超微结构损伤，阻止的调亡，从而使瀕临变性、死亡的节细胞的轴突得到最大限度的恢复，起到保护视神经的作用。通过临床观察发现针刺对视网膜和视中枢都会产生影响，表现为的改变，在视网膜与中枢之间存在着一种双向的联系。通过针刺使部分尚未造成不可逆损害的视神经功能得到恢复，同时增加节细胞及轴突的生物电发放量继而影响电活动传导速度，唤醒其对视觉信息传导的能力，改善视功能。。。.结论本文通过针刺治疗青光眼性视神经萎缩进行临床观察与研究，得出以下结论: 针刺可有效的提高青光眼性视神经萎缩患者的视力。通过针刺使部分受损视神经功能得到恢复，提高视觉信号的传导速度，增强视神经的兴奋性。针刺可以阻止的继续凋亡，有较好的视神经保护作用。虽然本研究提示针刺促进视神经再生的作用不明显，但不排除针刺时间过短可能是无促进视神经节细胞轴突再生作用的原因。。。