【doc】 铁筷子多糖对S180细胞周期及增殖能力的影响

【doc】 铁筷子多糖对S180细胞周期及增殖能力的影响 铁筷子多糖对S180细胞周期及增殖能力的 影响 中药药理与l床2005;21(4)29 能量的产生和利用具有重要生理意义.Na,K.ATP酶活性 下降,细胞内的Na浓度升高,后者又激活细胞膜上Na一Cd 交换蛋白,使细胞内Ca2内流增加;Cd一ATP酶活性下降,胞 内Cd泵出减少.胞内Cd超载.Ca2是心肌细胞中许多重 要的信号传导通路的调节因子,胞内Cd超载则可激活心肌细 胞的信号传导通路,导致心肌肥厚的发生【9.】0J.用ISO连续皮 下注射,可引起大鼠左心室心肌组织NO水平下降,Na,K一 ATP酶和Cd一ATP酶活性降低,心肌肥厚增大.应用PNS治 疗后,可显着提高N0水平,提高Na,K一ATP酶和Ca2一ATP 酶活性.抑制心肌肥厚. 本实验提示,PNS可能通过抑制心肌局部AnglI的产生,改 善ATP酶的活力,抑制细胞内(二a2超载,提高心肌组织中NO 水平,抑制心肌胶原增生,心肌肥厚和心脏重构.从而对ISO所 致的心肌肥厚具有保护作用. 参考文献 1StantonHC,Brenner(;.MayfieldEDJr.Studiesoilisoproterenol-in— ducedcardiomegalyinrats.AmHeartJ,1969;77(1):72,80 2Borg~JC,SilvaJAJr,ComesM_Aeta1.Tonininratheartwithexperi— mentalhypertrophy.AmJPhysiolHeartCircPhysiol,2003;284(6): H2263,H2268 3莫宁.周燕.三七总皂苷抗大鼠心肌肥大的作用及其神经机制.中国 药理学通报,2o04;20(10):1131,1134 4BoluyrM0,LongX,F~_henhagenT,eta1.IsoproterenolirrkL~onin— ducesalterationsinexpressionofhypertrophy-associatedgenesinratheart. AmJPhysiolHeartCircPhysiol,1995;269(2Pt2):H638,H647 5Sad~shirnaJ.Iztm~S.Signaltran.sductionpathwaysofangiotensinII— inducedc-kx~geneexpre~sionincardiacmyocytesinvitro.Rolesofphos- pholipid抱derived.secondmessengers.CircRes,1993;73(3):424--438 6BallardC.SchafferS.StimulationoftheNa/Caexchangerby phenylephrine.angiotensinIIandendothelin1.JMolCellCardio1.1996;28 (1):11,17 7KimNN.VillegasS.SummerourSR.eta1.Regulationofcardiacfi— broblastextmcellularmatrixproductionbybradykininandnitricoxide.J MolCellCardiol,1999;31(2):457--466 8RitchieRH.SchiebingerRJ,LapointeMC.eta1.AngiotensinIIin— ducedhypertrophyofadultratcardiomyocym~isblockedbynitricoxide AmJPhIysiolHeartCircPh~iol,1998;275(4pt2):H1370,H1374 9SHENXC,QIANZY.Effectofcrocetinoncardiachypertrophyin— ducedbyoverloadingpm~ureinrats.ActaPl1armaceuticaSinica,2004:39 (3):172,175 10XIANGY.HUONGJ.Effectofvalsartanandhx4noprilon(:ate— cholamine—inducedcardiachypertrophy.ActaPharmacolSin,2000;21(9): 850,854 ProtectiveeffectsofTotalSaponinsofPanaxnotoginsengon myocardialhypertrophyinducedbyisoproterenolinrats ZhouQing.,HeWei,ZhouLi.,anQisheng2 (.I)epartmentofOrganicExperiment,21-)epartmentofPharmacology,GannanMedicalCollege.Garmhou341000) Objective:Toinvestigatetheprotectiveeffectsoftotalsaponinsofpanaxnotoginseng(PNS)onmyocardialhypertrophvinducedby isoproterenol(ISO)inrats.Methods:MyocardialhypertrophymodelofratswezeinducedbyinjectionofISO5mg/kg?dscfor7d.From day2,theratwereadministeredwithPNS25and50mg/kg?dipfor14d,thecontrolandISOmodelgroupwerereceivedsalineinjection. Then,theheart—weight(HW),leftventricularweight(LVw),theratioofHW/BWandLVw/BW(LVI)weremeasured:thecontent ofhydroxyprolineandangiotensin(Angl1),thelevelofnitricoxide(NO)andtheactivityofNa,K一An)aSeandCd一ATPaseinleft ventricleweredeterminedbyspectrophotometryandradioimmunoassayrespectively.Results:InISOmodelgroup,HW/BW,LVIandthe contentofhydroxyprolineandAnglIinleftventriclemarkedlyincreased;thel evelofNOandtheactivityofNa,K一ATPase, Ca2一AT— Paseintheleftventricleweredecreased.TreatmentwithPNSsignificantlyred ucedtheHW/BW,L,vI,decreasedtheI1gIIandthehy— droxyprolinecontent.increasedthelevelofNOandtheactivityofNa,K一ATPaseand一ATPase.Conclusion:PNSw勰sh0帅to preventremodelingofmyocardialhypertrophyinducedbyISOinrats. KeywordsTotalSaponinsofPanaxnotoginseng;isoproterenol;myocardialh ypertrophy 铁筷子多糖对S180细胞周期及增殖能力的影响 刘维英,潘兴斌.刘昕 (兰州大学第一医院;M-州大学基础医学院病理生理研究室.兰州730000) 摘要目的:观察铁筷子多糖(?,Ps)对体外培养的Sls0细胞增殖能力及对细胞周期的影响.方法:建立SI舯体外细胞培养 体系,用MTT比色法在12h,24h,36h,48h时间点观察从t--8g/L4个倍数浓度的I-IFPS对SI鲫细胞体外增殖的影响;用流式细胞 计量术检测lg/L浓度的HFPS在不同作用时间点对80细胞周期的影响.结果:HFPS对体外培养SI80肉瘤细胞的抑制率在1, 中药药理与临床2005;21(4) 8g/I内呈剂量依赖性,其抑制作用在24h最为明显,24h点 lg/L,2g/L,4g/L,8g/L的HFPS体外抑瘤率(%)分别为8.5?1.55,10. 2?1.78,58.6?3.25,75.5?3.54.HFPS作用后Sl80细胞周期GO—G1百分比增高,S期百分比下降,细胞多被阻断在GO.G1期,尤 以24h点最为明显. 关键词铁筷子多糖;SI80;细胞增殖;细胞周期 实验明铁筷子多糖(哪PS)能抑制小鼠体内移植瘤生 长【1--4】,激发细胞免疫功能,刺激淋巴细胞增殖,增加IL一2, TNF-a,IFN一等细胞因子的含量.增加淋巴组织中的巨噬细胞 数量,并提高其吞噬功能等【5?1;还能增加循环中的超氧化物岐 化酶(S0D),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)活性,降低脂质过 氧化产物丙二醛()含量. 1材料与方法 1.1试验药物HFPS同前报【】-6]. 1.2抑瘤实验体外细胞增殖能力测定:用MTT法.每孑L 103,10个细胞接种于96孔培养板中,每孔体积200ul,分别加 入不同浓度(1g/L,2g/L,4g/L,8g/L)的实验药物(对照组用同 体积的生理盐水).将培养板移入CCh孵箱中,在5%C37? 充分湿化条件下培养.分别在培养8小时,20小时,32小时,44 小时后每孔加入MTT溶液(5mg/ml,10%)20”1.37?继续孵育 4小时,1000rpm离心5分钟然后弃去孔内培养液.每孔加入 150~1DMSO,振荡10min使结晶充分溶解,在多功能酶联免疫 检测仪上测定光吸收值,测定波长为490nm,参考波长630, 690nm,测定各孔光吸收值,记录结果.共重复三批. 细胞存活率=试验组光吸收值/对照组光吸收值Xl00% 抑瘤率=1一细胞存活率 1.3细胞周期检测根据上述抑瘤实验结果,实验组HFPS采 用lg/L及对照组(用同等剂量的生理盐水)细胞在培养12h, 24h,36h及48h后分别离心收获.用70%冷乙醇固定24小时, 后用PBS清洗除去乙醇,加50ug/mlPI染液lml染色30min, 400目网过滤后上流式细胞仪检测(美国CoNter公司EPICS XL型流式细胞仪)激发光488nm,发射光585nm测定DNA含 量,计算细胞周期各时相的百分比,按下列公式计算增殖指数, 以此衡量细胞的分裂活动: PI+(S+C)/(Gll/GI+S+(/M) 2结果 2.1I-tFPS对Sl舯细胞体外增殖能力的影响HFPS对体外培 养的Sl舯细胞增殖具有一定的抑制作用,在1,8g/L范围内呈 剂量依赖性;作用时间在12,24小时抑制率上升,但此后并未 延续这种趋势,36小时百分抑制率反而较24小时下降,48小时 则更低;尤以小剂量的I-tFPS(tg/【,2L)抑瘤率在36小时后 下降明显,lg/L剂量组在48小时细胞存活率接近对照组(未用 药组),抑瘤率近零,可能与药物半衰期有关,见表1,图1.镜下 观察显示,对照组细胞的生长速度极快.在培养24小时集落形 成达高峰,镜下见细胞颗粒饱满,折光性强,表现了极大的生命 力无特定规律性,但在24小时下降明显;增殖 指数(PI)在24h及36h明显下降.I-tFPS在不同的时间点对细 胞周期构成影响也有不同,以24h改变最为明显,与组内其他时 『白J点相比,24hGO—G1期比例上升,G2+M期36h百分比例下降, 但S期比例无明显差别.还可见在24h后,发生改变的各期比 例虽然渐有恢复,但36hGO—G1期,S期及PI与对照组相比有 显着差别;48h时S期比例变化尚有统计学意义,GO—G1,G2+M 比例及PI与对照组已无明显差别.综上NA合成期 (S期),DNA合成后期(G2期)和有丝分裂期(M期),休眠期的 细胞(GO期).在真核细胞的一系列细胞周期检测点中.G1/S 期检测点至关重要,细胞在该检测点对各类生长因子,分裂原 以及DNA损伤等复杂的细胞内外信号进行整合和传递,决定 细胞是否进行分裂,发生凋亡或是进入G0期,许多抗癌药物都 是通过抑制此关键点而起作用的【7J.我们用流式细胞仪检测 HFPS作用后的sI80细胞周期发现,GO—G1百分比增高,细胞多 盘…DNACont?t 流式细胞仪下S细胞培养24h的I)NA含量(PI染色) 图3对照组(未用药组) 被阻断在GO.G1期,S期百分比下降,可见卜?,PS可引起细胞周 期在特定点发生阻滞,但其分子机制并不明确.在本实验中, 药物作用24h后,细胞周期的上述变化则不明显,甚至有恢复趋 势,其可能机理为24h后不再追加药物时,药物作用逐渐削弱, 处于GO—G1期的细胞,有机会进行损伤的DNA的修复,细胞的 分裂增殖能力再次增强;另外,损伤的细胞膜逐渐修复,暴露抗 原逐渐减少.细胞膜生化特性随之恢复,表现为24h后各周期百 分率渐接近于同期对照组;不能修复者则退出增殖周期,进入 凋亡阶段.此结果与M1vr抑瘤实验结果相符. 本研究表明,HFPS对sI80细胞多被阻断在GO.G1期,导致 细胞G1--~S期转换受阻,S期百分比下降,使得细胞DNA合成, 复制受到抑制,更多细胞的分裂循环过程被阻断,肿瘤细胞增 殖能力降低.此结果在体外MTT抑瘤实验中得到了证实.可 见,HFPS能通过影响细胞周期构成而改变肿瘤细胞特性. 图4HFPS作用组 参考文献 1潘兴斌,刘昕,杨永建,等.铁筷子多糖对三种肿瘤细胞生长抑制效 应的观察.兰州大学(自然科学版).2000;36:57,58 2刘昕.潘兴斌.铁筷子多糖抑制小鼠体内S?生长作用及机理的实验 研究.中药新药与临床药理,2000;4:213--215 3刘昕,潘兴斌,张勇,祝秉东,杨永建.铁筷子多糖抑瘤效应及对荷瘤 机体抗氧化活性的实验观察.中医药信息,2001;18(1):49,50 4张勇,王晶宇,刘昕.铁筷子多糖诱导S?细胞凋亡的实验研究.中 药药理与临床,2004;3:12,14 5王振军,刘听,王晶宇.铁筷子多糖对荷瘤小鼠脾淋巴细胞合成细胞 因子的影响机体内抑瘤作用的实验研究.中华实用中西医杂 志,2002;3 (1):56,57 6刘昕.王振军,王晶宇.铁筷子对荷瘤集体细胞因子产生的影响及抑 瘤作用的电镜观察.中药药理与临床,2003;19(6):13,15 7P_,artekJ,LukasJ.MammalianG1andSphasecheckpointsinresIx~ toDNAdamage.CurrOpinCellBi0I,2001;13(6):738,747 三七总皂苷对肝纤维化小鼠TNFa及IL一6活性的影响 余万桂,张恒文 (长江大学医学院,荆州434000) 摘要目的:观察三七总皂苷对肝纤维化小鼠血清中TNFd及IL-6活性的影响.方法:用C(复制小鼠中毒性肝纤维化 模型,ELISA法测定血清TNFa和IL-6,并行肝脏病理检测.结果:三七总皂苷能减轻肝纤维化程度,降低肝纤维化小鼠血清中 TNFa和IL-6的水平.结论:三七总皂苷具有抗肝纤维化作用,其机理可能与降低血清中TNFa和II,6的水平有关. 关键词三七总皂苷;肝纤维化;TNFa,IL-6 近年研究表明,活血化瘀中药可以逆转肝纤维化过程[.已有研究表明,三七总皂苷对四氯化碳(0)诱发小鼠血清谷 鲫?如们如mO