【doc】 根除幽门螺杆菌对胃窦黏膜萎缩的逆转作用

【doc】 根除幽门螺杆菌对胃窦黏膜萎缩的逆转作用 根除幽门螺杆菌对胃窦黏膜萎缩的逆转作 用 第11卷第7期 2005年7月 中国内镜杂志 ChinaJournalofEndoscopy V0l|llNo.7 Ju1.2oo5 文章编号:1007-1989(2005)07—0686—04 根除幽门螺杆菌对胃窦黏膜萎缩的逆转作用 刘海峰,团因,汪兴伟,陈刚,姜利国 (1.武警总医院消化科,北京100039;2.第三军医大学西南医院 全军消化内科中心,重庆400038) :}: ? 论着? 摘要:目的评价5a随访根除幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染对胃窦黏膜萎缩的逆转作用并 探讨其机制.方法采用前瞻性队列研究方法,选择110例慢性萎缩性胃窦炎患者作为观察对象.Hp阳性患者 根据自愿原则采用根除Hp治疗或采用对照治疗.全部病例跟踪随访 5a.采用TUNEL技术及免疫组化染色检 测胃黏膜上皮细胞凋亡和增殖情况.结果Hp阳性观察组患者胃黏膜 萎缩程度在5a中加重的比例高达 43%,显着高于Hp根除观察组及Hp阴性对照组(13%和 20%,P<0.05).Hp根除观察组胃窦黏膜萎缩程度减 轻的病人比率为29%,显着高于Hp阳性观察组(9%,P<0.01).Hp阳 性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数及 PCNA指数(12.7%,14.6%)均显着高于Hp阴性患者 (2.9%,8.0%,P<0.O1),Hp根除后胃黏膜上皮细胞PC— NA指数和凋亡指数(14.3%,12.9均显着下降(9_2%,3.6%,P<0.01),而Hp未根除者上述指标则无显着性变 化.结论Hp感染可能通过刺激胃黏膜上皮细胞凋亡与增殖的调节紊 乱,促进胃窦黏膜萎缩的形成与发展.根 除Hp治疗可以使胃寞黏膜萎缩程度减轻和逆转. 关键词:幽门螺杆菌;萎缩性胃炎;前瞻性IrA~,l研究;TUNEL技术;免 疫组织化学染色 中图分类号:R573.32文献标示码:A Follow-upstudyonreversalofantrummucosal atrophyaftereradicationofHelicobacterpylori LIUHai,feng,匣圃,WANGXing—wei,CHENGang2,JIANGLi—guo (.DepartmentofGastroenterology,GeneralHospitalofChinesePeoplesArm edPoliceForces, BeO’ing100039,P.R.China;2.DepartmentofGastroenterology,SouthwestHaspital, theThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,P.R.China) Abstract:【Objective】 ToobservethelongtermeffectsofHelicobacterpylori(H.pylori)infectionongastricmu— cosa,toexploretheeffectofH.pylorieradicationinpatientswithantrumatrophicgastritis.【Methods】110re— cruitedpatientswerethosediagnosedaschronicatrophicgastritisendoscopicaHyandpathologically.H.pylori—posi— tivepatientsweregivenH.pylorieradicationtherapyaccordingtotheirwillingness.Allpatientswere~nowed—up for5years.Meanwhile,usingterminaldeoxynucIeotidyItransferase—medi atednickendlabeling(TUNEL)technique andimmunohistochemicalstaining,weobservedtheapoptoticcellsandproliferativecells.【Results】After5years follow—u43%ofpatientstheantrummucosalatrophywasaggravatedintheinfectiongroup,whichwassignificant— lyhigherthanthatintheH.pylorinegativegroupandintheH.pylorieradicationgroup(20%,13%,P<0.05).29% ofpatientstheantrummucosalatrophywasreducedintheH.pylorieradicatio ngroup,whichwassignificantlyhigh— erthanthatintheinfectiongroup(9%,P<0.01).TheapoptoticindexandPCNAindexofgastricepithelialinthe patientsinfectedwithH.pylori(12.7%,14.6%)weresignificantlyhigherthanthoseofH.pylorinegativegastricep— ithelial(2.9%,8.0%,P<0.01).AftereradicationofH.pyloriwithtripletherapy,thePCNAindexandapoptoticin— dexfellfrom14.3%and12.9%to9.2%and3.6%(P<0.01).InthepersistingH.pyloriinfectedpatients,theapop— toticindexandPCNAindexwerenotstatisticallydecreased.【Conclusions】 H.pyloriinfectionmayplayapmmo— tionalroleintheformationanddevelopmentofantrumatrophicgastritis,possiblybyinducinggastreepithelialapop一 收稿13期:2004—09—14 军队医药卫生”九五”重点课题资助项目(No.96Z047)及重庆市应用 基础研究基金资助项目 ? R? 第7期刘海峰,等:根除幽门螺杆菌对胃窦黏膜萎缩的逆转作用 tosisandproliferationinparalle.Theantrummucosala~ophycanbereducedorevenreVersedbytheeradicationof H.pylori. Keywords:Helicobacterpylori;a~ophicgastritis;prospectivecohortstudy; TUNELtechnique;innumohisto— chemicalstain 自1983年发现幽门螺杆菌(Helicobacterpylori, Hp)以来,众多的临床和实验室资料已经证实Hp 是慢性胃炎最常见和重要的病因【l】,Hp数量,毒力与 慢性胃炎炎症程度,胃黏膜肠上皮化生,腺体萎缩等 病变有关.短期的临床试验证实,根除Hp可使内镜 下所见胃炎及组织学胃炎消退,活动性胃炎消失,胃 黏膜中性粒细胞和淋巴细胞的浸润程度均见减轻或 消失.但根除Hp之后长期随访的结果和对胃黏膜 萎缩能否阻止或逆转的问题却报道很少『2_.是否有 必要进行根除Hp感染的治疗以预防胃癌的发生, 根除Hp感染治疗能否逆转胃黏膜萎缩或者阻止肠 上皮化生和异型增生的发生一直是临床上有争议的 问题.我们通过对Hp相关性萎缩性胃窦炎的随访 观察和细胞动力学研究,探讨Hp感染在胃癌前病 变演化过程中的作用和机制. 1对象和方法 1.1研究对象 采用前瞻性队列研究方法,随访对象均为1996 年3月,1997年6月以上消化道症状在我院行胃 镜检查并经病理证实为慢性萎缩性胃窦炎而不伴肠 上皮化生和异型增生的患者,病理活检及Hp检测 均于胃窦部取材.胃镜检查中发现胃溃疡,十二指 肠溃疡,胃癌等的病例均不列为观察对象.共有I10 例符合条件的患者进入本研究接受随访,其中男73 例,女37例;年龄(46?II)岁. 1I2研究和方法 Hp检测采用快速尿素酶试验和Warthy—starry 银染色,两项均阳性者为Hp阳性,两项均阴性者为 Hp阴性,单项阳性者为可疑阳性退出试验.Hp阳性 患者根据自愿原则采用根除Hp治疗或采用对照治 疗.Hp根除治疗选用有机铋剂,羟氨苄青霉素,灭滴 灵三联药物进行,疗程为2周.治疗结束后复查胃 镜,停药4周后Hp仍保持阴性者为Hp根除.全部 对象跟踪随访5a,根据自愿原则中间随访胃镜检查 一 次,5a随访结束时复查胃镜,重复组织学检查和 Hp检查.胃镜活检均在胃窦部取材,尽量做到与首 次检查取材部位一致.胃黏膜萎缩有无及程度均根 据组织病理学检查判定,分为无,轻,轻一中,中,中 一 重,重6个等级评价,人选病例轻,轻一中,中,中 一 重,重度胃黏膜萎缩患者分别为20,36,34,15和 5例.疗效判定:减轻为胃窦黏膜萎缩程度减轻2个 或2个以上等级,增加为胃窦黏膜萎缩程度增加2 个或2个以上等级,不变为胃窦黏膜萎缩无变化或 变化在1个等级范围内.按Hp持续感染,Hp根除 和从未Hp感染分组比较研究对象胃黏膜萎缩程度 变化的差别. 1.3凋亡细胞的原位检测 采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端 标记(TUNEL)技术.细胞凋亡原位检测试剂盒(In situcelldeathdetectionkit.POD)为德国Boehringer Mannheim公司产品,染色步骤:切片经二甲苯脱蜡, 梯度乙醇水化;3m肌H202封闭30min;20mg,L蛋 白酶K消化液作用20min;TUNEL反应液,37?孵 育60min;过氧化物酶连接的抗荧光素抗体,37?孵 育30min;?,?步后均以10mmol/LPBS(pH 7.4)振洗3次,每次5min;DAB显色,苏木素复染, 脱水透明,封片.以PBS替代TUNEL反应液作阴性 对照,阳性对照切片经DNaseI预处理10rain,再接 TUNEL染色步骤.以百分数表示TUNEL阳性细胞 (凋亡细胞)指数. 1.4增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色 采用sP法.PCNA单克隆抗体(PC10)为北京 中山公司产品,免疫组化试剂盒(ImmunostainSPKit) 为美国SantaCruz公司产品.染色程序按sP法操 作常规进行.以PBS代替一抗为阴性对照.以百分 数表示PCNA指数(增殖细胞指数). 1.5统计学处理 所得数据分别采用t检验或x:检验进行统计 学分析. 2结果 2.1Hp感染对胃黏膜上皮细胞增殖和凋亡的影响 TUNEL染色阳性物质呈棕黄色,位于细胞核 内,浓缩的核质紧贴于核膜,或核质呈现均匀的染 色.PCNA阳性物质呈棕黄色颗粒状,亦主要位于核 内,少许细胞质内有淡着色.Hp阳性患者胃黏膜上 皮细胞凋亡指数及PCNA指数均显着高于Hp阴性 ? 687? 中国内镜杂志第11卷 患者,两组差异均有非常显着性(P<0.01),见表1. 表1Hp感染与胃黏膜上皮细胞凋亡和增殖的关系 注:tP<O.01,VsHp阴性组 2.2Hp根除前后胃黏膜上皮细胞增殖和凋亡的变 化 经三联药物治疗后,Hp根除者胃黏膜上皮细胞 PCNA指数和凋亡指数均显着下降(P<0.01),而 Hp未根除者胃黏膜上皮细胞PCNA指数和凋亡指 数亦有降低,但与治疗前比较相差无统计学意义,见 表2. 表2I-II3根除前后胃黏膜上皮细胞凋亡和增殖的变化 注:’P<0.01,vs治疗前 表3胃黏膜萎缩程度变化与Hp感染状态变化的关系 注:1)P<O.05,VsHp阳性观察组 2)P<0.01,vsHp根除观察组和Hp阴性对照组 2.3随访结果 人选时Hp阴性组30例,Hp阳性组80例.到 2000年随访时,30例Hp阴性患者中,2例失访,1 例Hp转变成阳性,2例在最后随访时Hp检测为可 疑阳性,其余25例阴性无变化,将其作为Hp阴性 对照组.80例Hp阳性患者中,45例患者接受Hp根 除治疗,其中31例在治疗结束4周后转阴,且在最 后复查中证实,作为Hp根除观察组.35例未接受 Hp根除治疗的患者与l4例Hp未根除的患者共49 例,其中2例失访,1例在最后随访时Hp检测为可 疑阳性,其余46例作为Hp阳性观察组.表3比较 了胃窦黏膜萎缩程度的变化与Hp感染状态之问的 关系,Hp阳性观察组患者胃黏膜萎缩程度在5a中 加重的比例高达43%,显着高于Hp根除观察组及 Hp阴性对照组(13%和20%,P<0.05),提示Hp持 续感染能促进胃窦黏膜的萎缩程度;而Hp根除之 后,胃窦黏膜萎缩程度加重的过程能得到控制,轻一 重度的慢性萎缩性胃窦炎患者中均有胃窦黏膜萎缩 程度减轻的病例.Hp根除观察组胃窦黏膜萎缩程度 减轻的病人比率为29%,显着高于Hp阳性观察组 (9%,P<0.01),提示根除Hp治疗可以使胃窦黏膜 萎缩程度减轻和逆转. 3讨论 多年的研究已经表明,从慢性活动性胃炎经慢 性萎缩性胃炎,肠上皮化生和异型增生,最终发展为 胃癌是一个漫长的过程,一般约需十几甚至几十年 的时间.因此,这一过程中任何一个病变发生的早 晚及发展的速度都将影响着整个癌变的进程.Hp是 胃癌的第一类致病因子[3’41,其在胃癌发生中的作用 已被广泛关注,进一步明确Hp感染与胃黏膜萎缩 发生,发展的关系,对揭示Hp的致癌机制及正确评 价Hp根除治疗的临床价值无疑具有重要意义.已 有研究发现,根除Hp感染能改善慢性胃炎病人胃 黏膜炎症的程度.但根除Hp感染之后长期随访的 结果和能否逆转胃黏膜萎缩的问题研究报道较少. 为证实Hp感染在胃黏膜萎缩发生发展中的作用, 笔者选择在初次就诊时无肠上皮化生和异型增生的 慢性萎缩性胃炎患者作为随访对象,经过5a的随 访,结果发现在Hp持续阳性患者中胃黏膜萎缩程 度在5a中加重的比例显着高于Hp根除观察组及 Hp阴性对照组,而经三联治疗根除了Hp的患者胃 窦黏膜萎缩程度减轻的比率显着高于Hp阳性观察 组.表明Hp感染在胃黏膜萎缩的发生或发展过程 中起促进作用,可能是加速胃癌形成的一个重要的 危险因子,根除Hp感染能使胃窦黏膜萎缩程度减 轻和逆转. 在肿瘤发生,发展过程中,细胞增殖和细胞死亡 之间的平衡失调是最早的生物学改变.作者以往 的研究工作已经证实,胃癌发生发展过程中不仅存 在细胞的过度增殖,而且存在细胞凋亡的异常,细胞 凋亡与细胞增殖平衡失调是胃癌发生的病理学基 础1.为了探讨Hp感染与胃黏膜上皮细胞凋亡和 增殖的关系及其在胃黏膜萎缩发生发展中的作用, 从细胞动力学的角度探讨Hp感染与胃癌的关系, 作者采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端 标记(TUNEL)技术及免疫组织化学染色等方法研 究了Hp感染后胃黏膜上皮细胞凋亡和增殖的变 化.研究发现,Hp阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指 ? 688? 第7期刘海峰,等:根除幽门螺杆菌对胃窦黏膜萎缩的逆转作用 数及PCNA指数均显着高于Hp阴性患者,经三联 药物治疗后,Hp根除者胃黏膜上皮细胞PCNA指数 和凋亡指数均显着下降,结果表明,Hp感染不仅可 以刺激胃黏膜上皮细胞过度增殖,也可以诱导胃黏 膜上皮细胞凋亡,Hp感染是引起胃黏膜上皮细胞增 殖和凋亡异常的重要机制之一.Hp感染后使胃黏膜 上皮细胞增殖和凋亡均明显增加,必然会导致胃黏 膜上皮细胞增殖与凋亡的调节紊乱,使胃黏膜上皮 不稳定性增加,促进胃黏膜萎缩的发生或发展,从而 增加患胃癌的危险性. 本研究结果为临床根除Hp感染及预防胃癌提 供了一定的理论基础.对有Hp感染的慢性胃炎患 者,应积极给予抗Hp治疗,既可能纠正细胞凋亡, 细胞增殖的异常,又可阻止或逆转胃黏膜萎缩的发 生,从而降低患胃癌的危险性,具有预防或减缓胃癌 发生的重要作用. 参考文献: 【lJMATSUKURAN.RelationbetweenHelicobacterpylofianddis— eases:knowledgeforclinician[J].JNipponMedSch,2002,69 (2):200-204. 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