影响酶促反应的因素

影响酶促反应的因素 生物医药工程系《生物化学实验》预习报告 姓名 学号 专业 生物科学 班级 日期 实验名称 影响酶促反应的因素 1(了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。 实验目的 2(学习检定温度、pH、激活剂、抑制剂影响酶促反应速度 的方法。 在酶促反应中，酶的催化活性与环境温度、 pH有密切关系， 通常各种酶只有在一定的温度、pH范围内才现它的活性，一 种酶表现其活性最高时的温度、 pH值称为该酶的最适温度、最 适pH。 在酶促反应中， 酶的激活剂和抑制剂可加速或抑制酶的活 性，如氯化钠在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂，而硫酸铜则 是它的抑制剂。 本实验利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的实验原理 颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中各种因素对其活 性的影响。 淀粉(遇碘呈蓝色)?紫色糊精(遇碘呈紫色)?红色糊精 (遇碘呈红色)?无色糊精 (遇碘不呈色)?麦芽糖(遇碘不呈色)?葡萄糖(遇碘不呈 色)。 所以淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘 呈现的颜色来判断，以此反映淀粉酶的活性，由此检定温度、 pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。 仪器及(型1、唾液(吃食前的) 号、规格、数量2、试管1.5cm×15cm(×13) 等) 3、吸量管1.0 mL(×12)、2.0 mL(×5)、白瓷板6孔。 1、0.1%的淀粉液:称取可溶性淀粉0.1g，先用少量水加热调成糊状，再 加热水稀释至100ml。 2、0.1%的蔗糖溶液:0.1g蔗糖溶于100ml蒸馏水。 3、本尼迪特试剂:称取85g柠檬酸钠及50g无水碳酸钠，溶解于400ml 蒸馏水中。另溶解边搅，如有沉淀可过滤。此混合液可长期使用。 4、1%的淀粉溶液:将1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合成薄浆状物， 然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至100ml。 实验试剂(配制5、0.2mol/L NaHPO4溶液:称取35.6gNa2HPO4?2H2O溶解，最后定方法、数量多少、容至1000mL。 用途) 6、0.2mol/LNaH2PO4溶液:称取27.6gNaH2PO4?H2O溶解，最后定 容至1000mL。 7、1%氯化钠溶液:1gNaCl溶于100ml蒸馏水。 8、1%硫酸铜溶液:1gCuSO4溶于100ml蒸馏水。 9、1%硫酸钠溶液:1gNa2SO4溶于100ml蒸馏水。 10、碘化钾—碘溶液:于2%碘化钾溶液中加入碘至淡黄色2%的KL溶 液配制:称取KI 2g溶于100ml蒸馏水中 (一) 酶的专一性 取干净试管4只，按P166表35加入试剂并操作。 (二) 温度对酶活力的影响。 取干净试管5支，按P167表36加入试剂并操作。 再向各试管加碘化钾--碘试剂2滴，摇匀后观察各管颜色。 (三) pH对酶活力的影响 取干净试管5支，按P167表37加入试剂并操作。 实验步骤 加酶后，迅速混匀，置37?水浴保温，每隔1min从3号试管中取溶液2 滴加到已有碘化钾—碘试剂的白瓷板中，观察颜色变化，直至与碘不呈 色时，再向各试管加碘化钾-碘试剂2滴，摇匀后观察。找出最适pH. (四)激活剂和抑制剂对酶活力的影响 取干净试管4支，按P168表38编号并加入试剂。 加酶后，迅速摇匀，置37?水浴保温，每隔30s分别取2滴反应液在白 瓷板中，滴加1滴碘化钾-碘试剂，观察颜色变化。 结果计算公式无 (要求计算的) 1(加入酶液后，要充分摇匀，保证酶液与全部淀粉液接触 反应，得到理想的颜色梯度变化。 实验注意事项 2(用玻棒取液前，应将试管内溶液充分混匀，取出试液后， 立即放回 试管中一起保温。 1(什么是酶的最适温度、最适pH, 它们是酶的特征物理 常数吗, 疑难问题 2(激活剂分几类? 氯化钠属哪种类型, 硫酸钠对淀粉酶 的活性有无影响, 注:此若地方不够可自行调整。