【doc】 HPLC法测定加味七厘散中血竭素的含量

【doc】 HPLC法测定加味七厘散中血竭素的含量 HPLC法测定加味七厘散中血竭素的含量 中医研究2005年1O月第18卷第1O期TCMRes.October2005Vo1.18No.10?19? 个点,依法测定.结果:RSD=1.72%(n=6). 3.7.2异板精密度试验 取同一供试品溶液1O,分别点于5块硅胶G薄层板 上,依法测定.结果,百秋李醇薄层定量精密度较好.RSD= 1.20%(n=5). 3.8重现性试验 取同批样品,按供试品溶液制备方法制备5份,分别测 定其含量.结果重现较好,RSD=1.6o%(n=5). 3.9加样回收试验 精密量取已知含量的样品,精密加入一定量的百秋李醇 对照品溶液,按供试品溶液制备方法操作,进行测定.结果: 平均回收率为97.74%,RSD=2.83%(n=5). 3.1O样品含量测定 吸取供试品溶液1OL,对照品溶液2btL,4btL.阴性溶 液1O,分别点于同一硅胶G薄层板上,按上述色谱条件展 开,显色,扫描测定.3批样品测定结果分别为9.70US/mL, 1O.02g/mL,9.66g/mL.阴性对照无干扰,层析图谱见 图1. 4讨论 关于供试品溶液制备方法的选择:由于百秋李醇属于挥 发性成分,故选用水蒸气蒸馏法提取,我们曾对提取时间做 过比较,分别提取1h,2h,3h,4h,结果提取3h与4h含量 无明显差异,故选择提取时间为3h. 我们曾选用:?石油醚(60—90~C).醋酸乙酯.甲酸(85: 15:2);?石油醚(3O6o?).醋酸乙酯.冰醋酸(95:5:O.2);? 环己烷.醋酸乙酯.冰醋酸(90:10:O.2);?环己烷.石油醚(3O O.O1.0 【Rf] 图1阴性对照TLCS色谱图 1供试品溶液2百秋李醇对照品溶液3阴性对照液 6o?).醋酸乙酯.冰醋酸(90:3:10:O.2)等系统展开,结果? 中斑点Rf值适中.且斑点圆整.故选用系统?. 该制剂为中药复方制剂.其中广藿香为方中君药,其主要 化学成分为百秋李醇,故选择其指标成分进行含量测定.结 果准确,可作为其质量控制的方法. 参考文献: [1]中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标 准.中药成方制剂(第七册)[S].1993.206. 收稿日期:2004.04.29;修回日期:2005.02.25 (编辑陶珠) 文章编号:1001—6910(2005)10—0019—02 HPLC法测定加味七厘散中血竭素的含量 张健萍 (郑州市骨科医院,河南郑州450052) 摘要目的:建立HPLC法测定加味七厘散中血竭素的含 量.方法:采用HPLC法,反相HypersilCl8柱,以乙腈-0.1%磷 酸二氢钠溶液(60:40)为流动相,检测波长:440nm,柱温为 40?.结果:血竭素在0.165—0.825btg的范围内(7= 0.9993)线性关系良好,加样回收率平均为95.65%,RsD为 2.O1%.结论:该方法结果准确,重现性好,可用于测定复方 制剂中血竭素的含量. 关键词:加味七厘散/药效学血竭素HPLC法含量 中图分类号:fI284.1文献标志码:B 加味七厘散是部颁标准-lj收载品种,由血竭,红花,儿 茶,乳香,没药,三七,土鳖虫,朱砂,麝香,冰片等十味药材加 工制成,具有化瘀消肿,止血止痛的功效,用于跌打损伤,血 瘀疼痛,外伤出血的治疗.原标准中未收载含量测定项,本 ? 药学研究? 文采用高效液相色谱法对该制剂中的主要药物血竭进行了 含量钡0定,为更好的控制本品的内在质量提供了科学依据. 1仪器与试药 岛津IOAVP系列高效液相色谱仪,产地为日本;紫外检 测器;CLASS.LCIOA色谱工作站.血竭索对照品,由中国药 品生物制品检定所提供;甲醇为色谱纯;水为重蒸水;其余试 剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱法:HyersilODSCls柱(250mm×4mm,5m);流动 相:甲醇.0.1%磷酸二氢钠溶液(60:40),流速1.0mL/mim柱 温40~C;检测波长440lnln.理论板数按血竭索计算应不低 于3000. ? 20?中医研究2005年10月第l8卷第10期TCMRes.October2005Vo1.18No.10 2.2样品溶液的制备 取本品0.2g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加入3% 磷酸甲醇25mL,密塞,称定重量,超声处理30min,取出,放 冷,再称定重量,用3%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取 续滤液作为样品溶液. 2.3对照品溶液的黼备 精密称取血竭素高氯酸盐对照品5.68mg,置25mL棕 色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀释至刻度,摇匀, 精密量取1mL,置5mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,制成每 毫升含0.033mg的溶液,即得.血竭素重量=血竭素高氯酸 盐重量/1.377. 2.4空白试验 取缺血竭的阴性对照药,按供试品溶液制备方法制备成 空白对照液,进样,测定.结果:空白对照液在相同位置处无 与血竭素相对应的色谱峰.明空白对照无干扰.见图1. 【raAU] 10 5 【mAU】 20 0 2.5线性范围的考察 分别精密吸取对照品溶液5,10,15,20,25btL,按上述色 谱条件进样测定,以峰面积积分值X为横坐标,对照品量A (g)为纵坐标,作线性回归,得回归方程A=3.59317×106X 一 26.53,7=0.9993.结果表明血竭素在0.165,0.825btg范 围线性关系良好. 2.6精密度试验 精密吸取对照品溶液10,重复进样5次,按上述色谱 条件测定,血竭素峰面积的RSD为1.62%. 2.7稳定性试验 精密吸取样品溶液10止,每间隔2h进样1次,共测定 5次.结果,血竭素峰面积积分值的RSD为2,01%(n=5), 表明供试品溶液在8h内基本稳定. 2.8重现性试验 取同一批样品,按2.3项下方法分别制备5份样品溶 液,按上述色谱条件测定.结果:血竭素平均含量为0.51%, RSD=2.66%. 2.9加样回收率试验 取已知含量的本品(含量按0.51%计),取0.1g,精密称 定,精密加入血竭素对照品溶液(0.525mg/mL)1mL,挥去溶 剂按2.3项下方法处理,依法测定其血竭素含量,计算回收 率.结果:平均回收率为95.65%,RSD为2.01%. 2.10样品测定 分别精密吸取对照品溶液和样品溶液各1O止,注入液 相色谱仪,测定,结果见表1. 表1三批样品测定结果(n:5) 批号血竭素(%) 020312 020315 020318 0.51 0.49 0.53 3讨论 血竭为方中君药,具有散瘀定痛,止血生肌的功效J. 血竭中含有的血竭素是较为理想的指标性成分.文献中采 用薄层扫描法对血竭素含量进行测定的报道较多,也有采用 液相色谱法对其进行测定的报道_3-5_.试验中曾根据文献报 道的乙腈.0.05%磷酸二氢钠溶液(50:50),乙腈.水(40”70)调 pH2—3,甲醇.0.33moL/L磷酸二氢钾溶液(30:70)磷酸调 pH23,乙腈.0.1%磷酸二氢钠(25:75)等多种流动相进行 试验,均未能使血竭素得到理想的分离.采用本文中流动 相,样品液中血竭素与其他成分的吸收峰可得到较好的分 离,且峰形对称.经试验,采用柱温40~C进行测定,色谱分 离效果更为稳定,理想. 本方法简单易行,经方法学考察表明该方法重现性良 好,其为加味七厘散的质量控制提供了较好的方法. 参考文献: [1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫 生部药品标准?中药成方制剂(11册)[S],1997.57. [2]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出 版社,1985.926. [3]韩云霞,侯艳玲,李平,等.薄层扫描法测定复方接骨胶 囊中血竭素的含量[J].贵阳中医学院,2002,24(3): 60-62. [4]张斌,王丽娜,麻风华,等.高效液相色谱法测定骨复康 胶囊中血竭素的含量[J].中国实验方剂学杂志,2003,9 (3):16.17. [5]邹桂欣,尤献民,王树实,等.HPLC法测定胃溃疡胶囊中 血竭素含量[J].辽宁中医杂志,2003,30(4):310.311. 收稿日期:2005.01.23;修回日期~2005.07.20 (编辑陶珠) 《中医研究》杂志社E.mail:zgzyyj@yahoo.corn.cn或zgzyyj@tom.corn 0加0