am-am-fs-ac-23035 加糖谷物中葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖

am-am-fs-ac-23035 加糖谷物中葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖 AMAMFSAc23035 谷物 葡萄糖 果糖 蔗糖 麦芽糖 液相色谱法 AM-AM-FS-Ac-23035 加糖谷物中葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖 1.仪器和试剂 1.1 仪器 (a)色谱仪—见5-24A(a)到(b)，但将5-24A(b)中容量因子改为1.5;包括自动注射器，410示差折射计、100×4.6(内径)mmSpheri-5氨基柱并使用5-24A(c)中10-50μgl范围专门注射器。 (b)过滤柱—100×2(内径)mm或15×3.2(内径)mm，7μm氨基保护柱。 (c)保护填充柱—任意的，C固定相，100×2(内径)mm或15×3.2(内径)mm，7μm18 氨基柱，只要整个LC系统满足5-24A(b)柱的要求。 1.2 试剂 (a)粮溶液—在真空，60?下分别将粮标样(果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖)干燥12h。溶解在乙醇-HO(1+1)，基浓度对果糖、葡萄糖和麦芽糖分别为3mg/ml，而对蔗糖2 15mg。LC注射后，比较样品和标样的峰响应，并相应调节标准溶液浓度使得标样响应在样品响应的10%以内。 (b)流动相—CHCN(LC级)和HO(80+20)。用玻璃纤维滤器或用0.45μm尼龙66滤32 器过滤。用前在超声浴中脱气。为满足柱指标，如有必要应改变CHCN-HO的比值和流速。32 2.试验过程 2.1.样品制备 (a)脂肪提取—称取2.00-10.00g磨好的谷物放入不小于100ml的离心瓶中。如果样品不一定要提取脂肪，则按(b)步骤进行。加50ml石油醚并在2000r/min下离心红10min，将石油醚吸出弃去，不要吸出因体物质。再重复提取，用轻微N蒸气将残留的石油醚蒸发并用玻璃棒打碎固体物质。 (b)糖提取—加100ml乙醇+HO(1+1)并称重，放入80-85?HOmin并不时搅拌，冷却22 到室温并加乙醇到初始重量，将提取部分通过0.45μm尼龙注射滤器过滤。如果混浊在不小于2000r/min离心10min。如果仍混浊，在不小于3500r/min下将提取部分再离心5min，并用0.45μm尼龙注射滤器过滤。如果使用保护柱，省略步骤(c)留下滤过的提取液进行LC分析。 (c)净化—用流动相充满CSep-Pak柱，并加压通过滤器，让真料上的液体流出。用样18 品提取液重复2次，收集第二次流出的洗出液用于LC分析。如有必要用0.45μm尼龙注射滤器过滤。 2.2.测定 将样品溶液(10-5Oμl)随着以流速1.5-2.5ml/min的流动相注射入柱。注入同样体积的标准溶液，该标准溶液的峰值响应为样品峰值响应的?10%。为有足够的精密度，样品和标准液必须各进行两次注射。 测量样品和标样中各糖峰的面积和峰高，但对检测限附近的组分和有相邻干扰峰的组分只测量峰高。 %组分=(R/Rˊ)×(Cˊ/W)×V×l00 式中R和Rˊ=分别为样品糖和标样糖峰面积或峰高，V=加入样品的乙醇-HO的ml=100;W=2样品g;Cˊ=糖标准液浓度g/ml。 对可能存在的NaC1干扰峰的消除—(1)在与所用糖标准溶液相同的注射溶剂中制备约含2mgNaCl/ml的空白试液，而且在糖标准之后和样品之前立即注入空白液。(2)如果NaC1干扰被分析的糖峰，用在CHCN-HO(80+20)中0.l%TEPA溶液洗柱。用HOAc调节TEPA溶液32 pH到大约7。然后以1.5ml/min洗柱2h。在继续分析前用约100m1流动相冲洗柱子。这种修补仅提供暂时处理(10次注射)。(3)另外，对每升流动相加2滴浓HOAc，消除NaC1在果糖或葡萄糖洗脱时的干扰。注意:该步骤(3)仅作为步骤 (2)一种替换法，而不是加在步骤 (2)之外。 3.来源 AOAC官方方法934.03(第17版)