延迟时间太短起始荧光增加的速度太快用洗脱

延迟时间太短起始荧光增加的速度太快用洗脱 本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有关专家撰写，由中国疾病预防控制中心批准执行。 编写主持人:蒋岩 编写人员: 潘品良 蒋岩 李敬云 钟平 尚红 李太生 审核咨询专家及技术人员:邵一鸣 康来仪 朱效科 王佑春 汪宁 朱红 郭志宏 季阳 刘海林 肖瑶 邱茂锋 马春涛 编写单位:中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 参编单位:中国人民解放军军事医学科学院 上海市疾病预防控制中心 中国医科大学 北京协和医院 技术顾问:Mike Ussery, Hao Zhang 美国国立卫生研究院 过敏及传染病研究所 James W. Bremer 美国Rush 大学医学中心VQA实验室 Trever Peter 克林顿基金中国艾滋病防治项目实验室专家 延迟时间太短 起始荧光增加的速度太快 用洗脱液重新检测。确信加入酶和开始此轮运行之间的时间少于8分钟。 扩增弱 内参照值和WT值都没有达到一个平台值 用洗脱液重新检测 没有测到内参照。 没加内参照或者样品的加入水平太高 没有测到内参照的信号，可能是因为在核酸的分离物中没有加内参照或者WT的加入太高 用(稀释过的)样品重新检测 (四)bDNA 问 原因 处理方法 注射器含有气泡 洗液瓶, 水瓶, 漂白液瓶是空的或管道连接松弛。 加适量的溶液在空瓶里;管路都在各自的瓶内液面下。 仪底部的加热托盘上有液体 管路连接松弛或一洗头的分液或吸液针管堵塞。 检查管路连接。 管路有堵塞或细菌滋生 管路和试剂瓶没有正确保养。 每次实验后清洗并晾干洗液瓶和水瓶，倒空废液瓶;每周清洗洗液瓶, 水瓶和废液瓶，管路系统。 分析仪不能从孔内吸取足够的液体 洗头中有堵塞, 洗头针头弯曲, 废液管连接松弛, 吸液泵损坏。 检查废液管连接头 RLU值低 试剂漏掉, 用错试剂, 某种试剂配制错误, 漂白液污染, 孵育时间或温度不正确, 或检测板冷却不足。 在实验前确定盛水试剂瓶已满。 确定按产品储存、配制试剂;环境温度在18-30?;试剂盒没有过期;实验中所使用的试剂来自同一批次;每周清洗过程中在管道和试剂瓶中没有残留。 RLU值高 实验被污染, 清洗不充分, 或有光泄露。 确定全使用干净的一次性无菌实验材 料;使用防气溶胶的加样枪头;残留的底物没有倒回原瓶;用70%乙醇定期擦洗微量加样器;盛洗液的试剂瓶内有足够量的洗液;检查分液、吸液操作;每周进行保养;分析仓门关闭严实;检查背景RLU值。 变异系数(CV)高 移液操作错误,样品质量差, 孔有污染, 清洗不充分, 试剂没有预热充分, 试剂没有充分混匀, 孔内样液蒸发, 孔内样液溅洒, 有光漏。 确定微量加样器经校准;使用防气溶胶的枪头;枪头紧密套在加样器上;加试剂时枪头位置在孔的中部;样品凝块或残渣没有被吸取;样品加的位置与样品ID和DMS规定的位置一致;样品按产品收集,处理和储存;只使用干净的一次性无菌实验材料;检查分液吸液操作;盛洗液的试剂瓶内已装有足够量的洗液;每种试剂在实验开始前被轻轻混匀;每种试剂预热充分,以防有沉淀;封闭垫组装正确;孔内样液没有溅洒;分析仓门关闭严实;检查RLU背景。 曲线平坦或不正常 加标准时板的缺口在右边,或标准加入顺序有误。 加标准时板的缺口在左边 强或弱对照定量高 强阳性对照受污染, 吸取误差, 或标准曲线有问题。 确定各孔仔细加样, 未触及邻孔;使用无菌枪头;封闭垫组装无误;加样器定期校准;使用防气溶胶的枪头;标准和对照加样位置正确;按产品说明要求储存, 配制。 强或弱对照定量低 对照降解, 对照溅洒, 对照孔液蒸发, 对照加样有误, 或对照没有充分混匀。 确定试剂盒在运输和到货后储存在正确的温度;使用无菌枪头;没有吸取气泡;封闭垫组装无误;加样器经校准;小心处理测试板,防止溅洒;标准和对照加样位置正确;按产品说明要求储存, 配制;样品,标准,对照在吸取前至少震荡5秒。