宁夏回族人群CYP2D6-10等位基因及基因型分布频率.doc

宁夏回族人群CYP2D6-10等位基因及基因型分布频率.doc宁夏回族人群CYP2D6*10等位基因及基因型分布频率作者:李宗吉，王健，王惠成，葛立军【摘要】目的了解宁夏回族人群CYP2D6*10等位基因及基因型分布频率,为临床使用CYP2D6底物药物提供依据。方法采用等位基因特异扩增(ASA-PCR)技术，分析了180例回族体检者的CYP2D6基因型。结果CYP2D6*10基因点突变结果中野生型纯合子频率为32.3%，杂合子频率为38.3%，突变型纯合子频率为29.4%，突变型等位基因频率为48.6%。结论宁夏回族人群CYP2D6*10突变基因频率与国内外其他民族有一定差异，在临床应用经CYP2D6代谢的药物时应考虑个体间的代谢速率差异，确保用药安全有效。【关键词】CYP2D6*10;基因;多态性;回族Abstract:ObjectiveToinvestigatethealleleandgenotypefrequencesofCYP2D6*10inNingxiaHuipopulation.Methods180NingxiaHuibloodsampleswerecollected.TheASAPCRwasperformedandthePCRproductsweregenotyped.ResultsThemutantallelefrequenceswere48.6%.ConclusionCYP2D6*10allelefrequencesbetweenNingxiahuiethnicityandotherpopulationswassignificantlydifferent.Keywords:CYP2D6*10;gene;polymorphism;Huiethnicity细胞色素P4502D6(CYP2D6)又称硫酸异喹胍羟化酶,是近年来被广泛研究的一种肝微粒体药物氧化代谢多态性酶，该酶参与临床常用的30多种药物羟化反应,例如抗精神抑郁药、抗心律失常药、β2阻滞剂等,1-3,。由于CYP2D6至少有50多处突变和73种等位基因，因此酶的活性具有高度多态性,4-5,。CYP2D6基因有明显的种族差异。我们于2007年1,7月间以宁夏回族人群为研究对象，采用等位基因特异扩增法(ASA-PCR)，对东方人群中最常见的基因突变型第10外显子(CYP2D6*10)进行研究，以期为患者使用CYP2D6底物药物提供依据。1材料和方法1.1材料全血总DNA提取试剂盒、DNATag酶ET-500、DNAMarkerB均购自北京赛百盛生物公司;引物由大连宝生物工程有限公司合成，引物序列见表1。表1引物序列(略)1.2方法1.2.1DNA样品制备利用2007年1,7月间收集的宁夏回族自治区人民医院体检的180例回族受试者的外周血，采用北京赛百盛生物公司的硅胶膜基因组提取试剂盒提取基因组DNA，定量后稀释成100ng/μL,储存于-20?备用。1.2.2PCR扩增及产物的鉴定用表1所述的3对引物(P1、P2)、(P1、P3)、(P1、P4)在PCR的反应条件下(表2)分别扩增出CYP2D6全长基因片段及包括第10外显子多态位点的DNA片段。PCR反应体系为50μL，含有0(2mmol/LdNTP、1(0mol/L引物、1(25mmol/LMgCl2、0(5UTaqDNA聚合酶、10×PCR反应缓冲液。表2PCR反应条件(略)1.2.3电泳及结果的统计分析取PCR扩增产物用1,琼脂糖凝胶进行电泳，在BioRad的QuantityOne凝胶成像分析系统仪上进行观察和分析。确定CYP2D6*10基因型，进行基因频率的计算分析。2结果2.1DNA提取质量经紫外分光光度计检测，180名受试者外周血白细胞中提得的DNAA260/A280均在1.8,2.0之间，纯度均符合要求。2.2PCR及电泳结果见图1。用引物P1、P2扩增得到790bp全长CYP2D6基因，以P1、P3为引物可扩增出137bpCYP2D6*10野生型纯合子(wt)，以P1、P4为引物可扩增出137bpCYP2D6*10突变型纯合子(mt)，若以P1、P3和P1、P4为引物均可扩增出137bpCYP2D6*10片段表示CYP2D6*10为杂合子(Wt/mt)。2.3基因型及基因频率见表3，由表中数据可计算出180例受试者中CYP2D6突变等位基因频率为48.6%。表3180例受试者等位基因与基因型频率(略)3讨论药物代谢的主要场所是肝脏,肝脏进行生物转化依赖于微粒体中的多种酶系,其中最重要的是细胞色素P450混合功能氧化酶系统。细胞色素氧化酶P450(CYP450)是一类参与内源性和外源性化合物代谢的酶,这类酶有许多同工酶,根据氨基酸序列符合程度,P450分为多个基因P亚基因家族,同一家族的酶具有相似的功能。目前已知在人体内有35种P450基因,主要有CYP123三个家族酶系参与体内外源性物质的转化,重要的有7种,CYP2D6即为其中的1种。CYP2D6位于第22号染色体长臂上，与相关基因CYP2D7和一假基因CYP2D8P共同组成CYP2D基因群。现已发现CYP2D6对药物的代谢呈现出明显的个体差异和种族差异及地域差异,6-7,。目前已报道多种CYP450酶活性受基因多态性的控制,包括CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4和CYP2E1等,有关CYP2A6基因多态性及其与表型关系的研究也有陆续报道。Heim,8,等首先报道了CYP2D6等位基因，CYP2D6基因缺陷导致CYP2D6弱代谢性。随后，新的等位基因不断被发现。经研究发现中国人多携带有CYP2D6*10突变性等位基因，其外显子1第188为碱基C为T取代，造成表达的CYP2D6酶第34位脯氨酸变为丝氨酸，导致酶活性的下降。本研究采用ASA-PCR法第一步扩增出790bpCYP2D6基因片段，第二步扩增中引物P3、P4的3’端为G的与野生型等位基因配对，3’端为A与突变性等位基因配对，通过扩增得到野生型和突变型基因片段。由于Taq酶缺乏3′?5′外切酶活性,当3′形成错配时,磷酸酯键难于形成,导致扩增终止。反之,引物3′端与配对成功,则通过扩增,得到野生型及突变型等位基因的特异片段。本研究发现CYP2D6*10突变基因频率为48.6%，比中国汉族人(58.4%)、韩国人(51%)较低;比中国苗族人(47.5%)、日本人(38.6%)、欧洲白种人(1.5%)较高,9,。由于突变基因导致酶活性降低，减弱了对药物的代谢作用，在服用同一剂量药物时更易发生药物毒副作用。因此，测定中国各民族CYP2D6基因型，有利于降低CYP2D6底物药发生不良反应的风险，对于指导临床个体化合理用药具有重要指导作用。【