骨髓幼红细胞转铁蛋白结合铁摄入与年龄的关系

骨髓幼红细胞转铁蛋白结合铁摄入与年龄的关系 Ξ 骨髓幼红细胞转铁蛋白结合铁摄入与年龄的关系 ()肖德生生理学教研室 212001 () () 摘 要 为观察骨髓幼红细胞转铁蛋白 T f受体 T fR 介导铁摄入途径的功能与年龄的关系, 将雌性 SD 大鼠随 机分为 5、8 和 14 个月共三个年龄组, 分离骨髓单个核细胞, 观察细胞膜 的达和细胞 结合铁摄入的动力学变 T fR T f 化。14 月龄时幼红细胞表面 受体的表达显著低于 5 月龄和 8 月龄。受体的解离常数没有显著差异。14 月龄时幼红细 T f 胞 的内吞平台和细胞铁聚积速度显著降低。 结果表明, 在到达一定年龄后骨髓幼红细胞 介导铁摄入的功能降T f T fR 低, 这种变化的机制尚未清楚。 关键词 年龄 骨髓细胞 转铁蛋白 - Tran sf err in boun d Iron Up ta ke of Bon e M a rrow Ery throbla st w ith A ge (), , 212001X iao D esh eng D ep a r tm en t of P hy s iology Z h enj iang M ed ica l C ol leg e () () 2A b s t ra c t T h is stu dy w a s de sign ed to in ve st iga te th e ch an ge s o f t ran sfe r r in T frecep to r T fR m e2 2 142, 82, . 5d ia ted iro n up tak e in ra t e ry th ro b la st s w ith ageF em a le SD ra t s w e re d iv ided in to an d 2. , m o n th o ld g ro up sA t th e en d o f th e de sired p e r io d sbo n e m a r row m o no n u c lea ted ce lls w e re f re sh ly59 125 22iso la ted an d in cu b a ted w ith F eIT f fo r de te rm in a t io n o f th e n um b e r o f su rface T fR o n each e ry2 22. th ro b la st an d fo r de te rm in a t io n o f th e k in e t ic s o f T fR m ed ia ted T f an d T fbo u n d iro n up tak eT h e 14222 2258n um b e r s o f T fR w e re sign if ican t ly low e r in m o n th o ld g ro up th an in an d m o n th o ld g ro up s ()< 0105. , bo th P A m o n g st th ree g ro up sno sign if ican t d iffe ren ce s w e re fo u n d in th e app a ren t d isso c ia2 22 . 14t io n co n stan t s o f T fRT h e T fR m ed ia ted T f in te rn a liza t io n an d iro n up tak e w e re dec rea sed in 2. , , m o n th o ld g ro up a s com p a red w ith o th e r tw o g ro up sT h e re su lt s show th a tw ith th e in c rea se o f age 22, T fR m ed ia ted T f en do cy to sis fu n c t io n o f bo n e m a r row e ry th ro id ce lls dow n regu la te san d T fR m ed ia t2 2, .ed T fbo u n d iro n up tak e dec rea se sw h ich m ech an ism s a re u n c lea r ; ; Ke y w o rd s A geBo n e m a r row ce llT ran sfe r r in 在个体发育成熟后, 随着年龄的增加, 骨髓细胞血红素合 中。 在 4?下 HB SS 透析。 59 ( () 5ƒ 成 减 弱, 分 解 增 加, 但 仍 可 维 持 红 细 胞 正 常 浓 度 的 血 红 素 含 114 同位素标记与 受体 结合试验F eC l3 ΛC T f T f T fR 1 125 ()) 量。 在女性, 铁状态的血液学指标如血清铁浓度、转铁蛋白 和为公司产品 , 英国。大鼠无 ΛgN a IA m e r sh am A m e r sh am 5959 () 铁饱和度、铁蛋白浓度和红细胞血红蛋白浓度明显低于男 铁 与饱和后通过层析柱分离, 得到 2再通过氯胺, T fT f F eT fF e125 性, 这被认为与月经和性激素有关, 而且在年龄增长过程中, 骨 法与反应, 反应混合物在 4?下再通过层析柱分离、透析, T I 2 125 59 5 得到双标记的22。 2×10个单个核细胞与不同浓度的 髓造血储备功能减弱, 对应激反应不足, 容易发生贫血, 其贫IT fF e3 () 血症状的程度具有年龄依赖性。 这种变化的机制是由于慢性 标记 112, 70ƒ在 4?下孵育 60。为了测定 的 0T f nm o lL m inT f 铁缺乏限制了骨髓细胞的造血功能, 还是由于造血能力减弱限 非特异性结合, 预先加入 100 倍于标记 的铁饱和非标记的 T f 制了骨髓造血的代偿能力, 至今仍未清楚。 。孵育结束后, 置细胞悬液于 离心管内的二丁基邻T fEpp endo rf 4 近十年来, 细胞铁代谢的研究取得了较大的进展。 已经 苯二甲酸的顶部, 离心后切下管尖作同位素放射性计数。 59 125 115 细胞 和铁摄入 单个核细胞悬液中加入22, 清楚, 对细胞铁摄入的实验性描述, 可以反映骨髓红细胞的造 T f F eT fI ( 血功能变化的机制。本文观察了成年大鼠三个年龄段骨髓幼红 终浓度为 015ƒ以不同的时间间隔, 分别吸出 100, 2T f Λm o lL Λl 6 ) 细胞铁摄入的变化。 ×10细胞的细胞悬液, 用 40 倍容积的冰冷磷酸盐缓冲液终 止 细 胞 铁 摄 入。 2冰 冷 磷 酸 盐 缓 冲 液 洗 细 胞 三 次 后, 加 入m l 1 材料与 ) ( 20011% , 公 司, 美 国 , 孵 育 300Λl P ro na se C a lb io ch em m in111 研究对象 雌性 2大鼠, 体重 80, 120, Sp ragueD aw ley g () 4?, 再洗去细胞膜表面结合的 和铁。离心, 切下管尖作同 T f 饲养于不锈钢底栅的大鼠笼内, 自由饮食。 动物分为 5 个月、8 位素放射性计数。 个月和 14 个月三个年龄组。 () 116 其它方法和数据处理 使用试剂盒 公司, 美国测 S igm a 112 骨髓单个核细胞的分离 禁食 24, 断头取血, 快速游离 h θ( 定血浆铁浓度和 的铁饱和度。 数据用均数?误表示 T f x并折断胫骨和腓骨, 在断端用冰冷生理盐水洗出骨髓细胞, 通 θ ?s, 统计学处理采用组间比较的 t 检验, P ?0105 被认为具有 x 过密 度 梯 度 离 心 获 得 骨 髓 单 个 核 细 胞。 细 胞 涂 片, 2M ay 显著性差异。2染色用于幼红细胞百分计数。 G rünw a ldG iem sa 113 铁饱和 T f 大鼠无铁 T f 溶于 011m o lL N aH CO 的溶液ƒ 3 2 结果 ( ) ( 211 铁状态血液学指标 如表 1 所示, 在三个年龄组间血红 22X , = 5 822?, = 14m o n th o ld ra t s n w ith m o n th o ld ra t s n 3 + 蛋白、红细胞压积、血浆铁、总铁结合力和 铁饱和度没有显 ) () T f 8, < 0105; 522= 9, < 0105., P and w ith m o n th o ld ra t s o n P 著差异。 表 1 不同年龄的大鼠血液学指标的测量 1 T ab le D e te rm ina t io n o f th e h em a to lo g ica l ind ice s θ θ ()?in ra t w ith th e d iffe ren t age xsx 5222814m o n th m o n th m o n th () () () = 9= 8= 6 n n n ()?1214 152?812 145?1110 159ƒ H em o g lo b in gL () % 3917?019 4014?019 4211?017H em a to c r it () ƒ P la sm a iro n Λm o lL 3810?219 3219?418 3416?4163() ƒ T IBC Λm o lL 7515?217 7418?614 7111?3157 ()% T f sa tu ra t io n 4917?413 4318?419 4717?414 3 2: T IBCT o ta l iro nb ind ing cap ac ity () 3 不同年龄大鼠骨髓幼红细胞 介导的细胞铁摄入 图 212 T fR 结合 如图 1 所示, 8 个月龄组每个幼红细胞E b lT f 数与 5 月龄组相比没有显著差异, 然而, 与上述两组相比,23 T fR F igu re T h e t ran sfe r r inm ed ia ted iro n up tak e o f e ry2 θ θ() 14 月龄组 数显著下降。三组的 与 的解离常数分别 ?. . T fR T fR T f th ro b la st E b lin ra t w ith th e d iffe ren t agexsxCom p a r iso n ( ) ( 为 1215?018, 1217?212和 914?216, 三者间没1422X , = 5822?, =nm o lnm o l nm o l o f m o n th o ld ra t s n w ith m o n th o ld ra t s n 3 3 3 3 3 3 ) 有显著差异, 表明 与其受体的亲和力没有发生变化。8 , < 0105, < 0101; < 01001, 522T f P P P and w ith m o n th + () = 9, < 0105., o ld ra t s o n P 图 3 显示了 介导的细胞铁摄入。三组间相比, 14 月龄 T fR 组的细胞铁摄入显著低于 5 月龄和 8 月龄组。 3 讨论 本文的研究结果表明, 大约在生后 10 月龄到 15 月龄之间 骨髓红细胞膜 受体表达开始减少, 而 内吞、细胞 结合 T f T f T f 铁摄入的减少与受体表达的变化有关。 有研究认为 大鼠在 14 个月龄已进入老年期, 而有的研 SD 1 究中把 14 月龄列入中年期, 后者是可能的, 因为大鼠的月经 一般在 450, 540 天龄时停止, 因此, 本文观察的结果反映了进 () 图 1 不同年龄大鼠骨髓幼红细胞 表面 的表达 入停经期前的 0 骨髓红细胞铁摄入的生理性变化。促红细胞生 E b lT fR 1 F igu re T h e exp re ssio n o f su rface t ran sfe r r in recep to r 成素可以通过转录后调节, 促进幼红细胞表达 增加细胞 , T fR 5 θ θ() . ?. 铁摄入。 研究表明, 随着年龄的增加, 血浆促红细胞生成素浓 o f e ry th ro b la st E b lin ra t w ith th e d iffe ren t agexsxCom 2 ()(22= 5822=14 p a r iso n o f m o n th o ld ra t s n w ith m o n th o ld ra t s n 度升高, 但其分解代谢也明显增大, 又由于本文观察到的细胞 + ) () 8, # < 0105; 522= 9, < 0105. P and w ith m o n th o ld ra t s n P 表面的 表达的减少可能反映了幼红细胞分化程度的降低,T fR 因此, 不能排除幼红细胞铁摄入降低是由于促红细胞生成素功 213 的内吞和 介导的细胞铁摄入 如图 2, 与 5 月龄时 T f T f 能发生改变的可能性。另外, 随着年龄的增长, 细胞内铁聚积呈 相比, 8 月龄时 内吞平台有增大趋势, 但没有发现显著差异,T f 6 年龄依赖性增加, 这可能会引起类似于铁过负荷时细胞铁代 14 月龄时显著低于 8 月龄组。谢 的 改 变, 即 铁 与 铁 调 节 蛋 白 结 合, 阻 止 后 者 与 铁 结 合 蛋 白 中铁反应元件的结合, 引起 表达减少以及铁蛋白 m RN A T fR 和血红素合成的限制酶 2氨基乙酰丙酸合成酶表达增加。这种 ? 推测可以得到本文中 表达和其介导的铁摄入减少的证据 T fR 支持, 但确切机制还不清楚。 此外, 尽管细胞铁摄入和利用降低, 但外周红细胞血红蛋 白浓度和红细胞压积没有发生显著变化, 实验中也未观察到红 细胞大小和形态的异常, 表明在饮食铁供 应 不 受 限 制 的 情 况 下, 在年龄增大到一定阶段, 铁摄入和血红素合成速率降低, 尽 管骨髓细胞仍有能力维持红细胞正常的血红蛋白浓度和氧的 运输能力, 但骨髓造血的代偿能力可能受到影响。 参考文献 () 图 2 不同年龄大鼠骨髓幼红细胞 内吞 E b lT f 1 . . F reedm an M LH em e and iro n m e tabo lism in ag ingB loo d 2 F igu re T h e in te rna liza t io n o f t ran sfe r r in o f e ry th ro b2 θ θ( ) ?. . la st E b lin ra t w ith th e d iffe ren t agexsxCom p a r iso n o f () 4 . , 1987; 13 1: 227 2 Q ian ZM and T ang PLM ech an ism o f iro n up tak e by m am C e lls () 2 . 2m a lian ce lls. B io ch im B iop h y s A c ta, 1995; 1269 3: 205 to induc t io n o f B e rge r JA gere la ted sen sit iv ity o f ra t s . 5 anaem iaFo lia H aem a to l In t M ag K lin M o rp ho l B lu t2 W ang R Y e t a l. E ffec t s o f ag ing o n e ry th ropo ie t in sec re t io n () . 1998; 103: 181, 1987; 114 3: 408in fem a le ra t sM ech A ge ing D ev fo r sch . : Coo k C I and Yu B PIro n accum u la t io n in ag ingm o du la2 3 6 new Ga r ry PJ. e t a l Iro n sta tu s and anem ia in th e e lde r ly: . 1998; 102: 11 t io n by d ie ta ry re st r ic t io nM ech A g ing D ev f ind ing s and a rev iew o f p rev io u s stud ie s. J A m Ge r ia t r So c, (() )1983; 31 7: 389 收稿日期: 1999209216 Ξ 的影响针刺对脑缺血再灌注大鼠脑组织 及 N O S N O ()许 燕 陆任云镇江医学院 212001 () 南京中医药大学针灸研究室 210029徐 斌 倪光夏 摘 要 为探讨针刺对脑缺血再灌注损伤的治疗作用, 我们采用闭塞大鼠四动脉的全脑缺血模型, 观察脑缺血再 )) ((灌注大鼠 一氧化氮、一氧化氮合成酶的变化, 以及针刺对其产生的影响。 实验结果表明: 在脑缺血及再灌注 N O N O S 造成的脑损伤中, 活性和 含量显著升高, 如缺血后再灌注 3 小时后电针针刺百会穴、曲池穴 30 分钟, 则 活 N O S N O N O S ()性和 含量显著降低 < 0105。 说明在缺血再灌注适当的时间段, 针刺可抑制 活性, 减少 的产生, 从而降低N O P N O S N O 缺血再灌注所造成的迟发性神经元损伤。 关键词 针刺 脑缺血 再灌注 迟发性神经元损伤 N O S N O In f luen ce of A cupun c ture on NO S an d NO in Bra in T issue of Ra ts w ith Cerebra l Ischem ia an d Reperf us ion In jury (). , X u Y an D ep tof P a th op hy s iology Z h enj iang M ed ica l col leg e (). , L u R eny u n D ep tof B ioch em is t ry Z h enj iang M ed ica l col leg e (, , X u B ing N i G u ang x ia R esea rch L abora tory of A cup u nc tu re and M ox ibu s t ion N anj in T ra2 )d it iona l C h inese M ed ica l U n iv e rs ity , A b s t ra c t T o exp lo re th e th e rap eu t ic effec t s o f acup unc tu re o n ce reb ra l isch em ia and rep e rfu sio n in ju ryW e e stab2 . lish ed ra t b ra in isch em ia m o de ls w ith fo u r ve sse ls o cc ludedT h e C h ange s o f th e co n ten t o f N O and th e ac t iv ity o f N O S in . b ra in t issue o f ra t s and th e inf luence o f acup unc tu re o n th em w e re o b se rvedT h e exp e r im en ta l re su lt s revea led th a t ce re2 b ra l isch em ia and rep e rfu sio n can cau se th e dam age o f b ra in t issue and th e ac t iv ity o f N O S and th e co n ten t o f N O w e re in2 . , c rea sed sign if ican t lyW h en rep e rfu sio n fo r th ree ho u r s af te r th ir ty m inu te s o f b ra in isch em iaW e acup unc tu red B en t Po nd () () . Q uch i A cupo in tand H und red Co nve rgence s B a ih u i A cupo in to f th e ra t sT h e re su lt s show ed a sign if ican t d rop in th e . ac t iv ity o f N O S and th e co n ten t o f N OT h e se C h ange s show ed th a t du r ing th e p rop e r stage o f ce reb ra l isch em ia and rep e r2 , fu sio nacup un tu re can inh ib it th e ac t iv ity o f N O S and th e fo rm a t io n o f N O and th u s reduced th e in ju ry o f de layed neu ro n .f rom ce reb ra l isch em ia and rep e rfu sio n ; ; ; ; ; Ke y w o rd s A cup unc tu reC e reb ra l Isch em iaR ep e rfu sio nD e layed N eu ro n In ju ryN O SN O 自由基引起缺血再灌注损伤是目前医学研究中的一个十; 牛血清白蛋白, 中科院上海生化所产品。其余试剂均究所提供 分活跃的领域, 在保证脑组织有效灌注下抑制自由基对神经细 为国产分析纯。 112 仪器 2治疗仪, 南通医用仪器厂; 218 型台 6805 胞的损伤反应, 促进神经细胞功能恢复成为国内外医学界研究 GE T GL L 的焦点。 自从 等人发现 介导谷氨酸神经毒作用以 式高速冷冻离心机, 江苏太仓医疗器械厂; 721 型分光光度计, D aw so n N O 1 来, 有关神经损伤作用的研究一直倍受关注。有人报道自 上海第三分析仪器厂。N O 由基与 反应, 可以生成活性更强的自由基损伤组织, 这在SD 大 鼠 24 只, 体 重 在 200, 健 康 113 实 验 动 物 与 分 组 N O 2 缺血再灌注损伤中起重要作用。 醒脑开窍针法是治疗缺血性 250g, 随机分成 4 组: ? 假手术组。? 缺血再灌注组。? 缺血 中风十分有效的方法, 为此我们采用电针 针 刺 百 会 穴 和 曲 池 再灌注即刻针刺组。 ? 缺血再灌注 3针刺组。h 穴, 观察缺血再灌注大鼠针刺前后脑组织 活性和 含114 动物模型制作 实验采用 等提出闭塞大鼠四动 N O S N O P u lisislli ( 量的变化, 探讨针刺治疗缺血性中风的机理。 脉的全脑缺血模型, 315戊巴比妥钠腹腔麻醉 10ƒƒ, m gm l m lk g ) 〃烧灼闭塞双侧锥动脉, 夹闭双侧颈总动脉造成急性全脑, im 1 材料与方法 缺血, 缺血时间为 30 分钟, 松开夹闭达到缺血后再灌注, 在再 111 试剂 测试盒、测试盒由南京建成生物研N O S N O