激动素对萝卜子叶增大和叶绿素合成的作用

激动素对萝卜子叶增大和叶绿素合成的作用 【实验目的】 1. 掌握激动素对子叶增大和叶绿素合成的原理。 2. 进一步掌握叶绿素含量的测定方法 【实验原理】 细胞分裂素具有促细胞分裂、控制培养组织的形态建成、延迟衰老和促营养物质移动、促细胞扩大、促侧芽发育、参与叶绿体生物发生等重要的作用。本实验使用具有细胞分裂素类作用的植物生长调节剂激动素来研究细胞分裂素对萝卜子叶增大和叶绿素合成的作用。在一定的浓度范围内，萝卜子叶的增大和激动素浓度的对数成正比。 计算公式:Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ca+b=8.02OD663+20.20OD645 Cx+c=(1000OD470-1.82Ca-85.02Cb)/198 【实验材料】 1.材料:萌发的萝卜种子。 2.仪器:光照培养箱，电子天平 3.试剂:激动素 【实验步骤】 1.配置10mg/L的激动素母液(已经配好)。 2.将激动素母液进行倍比稀释成1µg/L、10µg/L、100µg/L、1000µg/L四个梯度，另外设置不加激动素的对照一个。每个浓度为20mL(下述实验光下、暗处各10ml)。 3.在干净培养皿中铺上一张滤纸，将稀释好的激动素溶液加入滤纸并使其完全湿润。 4.取萝卜子叶(大小子叶分开)每个培养皿中放入15片(子叶放到培养皿前称重，记为W1)。 5.将培养皿盖上盖子后光下或者暗处培养。48小时后再次称量每个培养皿中萝卜子叶的重量(W2)。并按叶绿素提取方法提取萝卜子叶中的叶绿素和类胡萝卜素，并测定其含量。 80%丙酮测定萝卜子叶叶绿体色素的含量测定 a ( 取出后的萝卜子叶每种处理用吸水纸将表面的水分擦拭干净，称重; b( 用2mL的80%丙酮研磨提取，要迅速，尽量避光，连同残渣转入离心管中; c( 5000rpm离心10min，切记一定要调平; d( 将上清液取出，并用80%丙酮定容至4mL，转入试管中，用保鲜膜封口(以防丙酮挥发); e(用分光光度计测定OD470，OD645，和OD663.按照公式计算叶绿素a，b及类胡萝卜素的含量。 6.以激动素浓度为横坐标，萝卜子叶增重(?W)和叶绿体色素含量为纵坐标作 图。 【实验结果】 光照 空白 1µg/L 10µg/L 100µg/L 1000µg/L W1 0.1252 0.1504 0.1502 0.1317 0.1381 大子叶 W2 0.1614 0.1652 0.2011 0.1714 0.2845 ?W 0.0364 0.0148 0.0509 0.0397 0.1464 W1 0.0780 0.0599 0.0685 0.0585 0.0758 小子叶 W2 0.1373 0.0926 0.1035 0.1384 0.2250 ?W 0.0593 0.0327 0.0350 0.0799 0.1492 黑暗 空白 1µg/L 10µg/L 100µg/L 1000µg/L W1 0.0975 0.1105 0.1151 0.0971 0.1152 大子叶 W2 0.1325 0.1503 0.1354 0.1496 0.1527 ?W 0.0350 0.0398 0.0203 0.0525 0.0375 W1 0.0558 0.0637 0.0638 0.0761 0.0585 小子叶 W2 0.0747 0.0856 0.0844 0.1020 0.0850 ?W 0.0189 0.0219 0.0206 0.0259 0.0265 光照 空白 1µg/L 10µg/L 100µg/L 1000µg/L 470 1.627 1.231 1.395 1.459 1.378 大子叶 645 0.512 0.318 0.433 0.374 0.284 663 1.154 0.596 0.748 0.807 0.617 470 1.153 0.935 1.025 1.210 0.301 小子叶 645 0.256 0.280 0.338 0.497 0.135 663 0.473 0.596 0.827 0.790 0.197 黑暗 空白 1µg/L 10µg/L 100µg/L 1000µg/L 470 0.552 0.644 0.613 0.697 0.896 大子叶 645 0.141 0.101 0.128 0.108 0.293 663 0.157 0.115 0.140 0.117 0.305 470 0.453 0.423 0.401 0.460 0.426 小子叶 645 0.108 0.096 0.048 0.092 0.083 663 0.137 0.108 0.057 0.103 0.088 通过计算，下表为叶绿体色素的含量:μg(叶绿体色素)/g F.W.(鲜重) Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ca+b=8.02OD663+20.20OD645 Cx+c=(1000OD470-1.82Ca-85.02Cb)/198 光照 空白 1µg/L 10µg/L 100µg/L 1000µg/L Ca 329.084 162.561 165.785 215.702 99.429 Cb 156.731 108.787 152.547 111.735 50.841 大子叶 Ca+b 485.687 271.272 293.298 327.350 150.230 Cx+c 133.323 102.330 73.112 122.004 75.106 Ca 154.944 294.428 370.770 251.332 38.022 Cb 106.300 156.489 149.559 222.084 38.570 小子叶 Ca+b 261.170 450.796 520.199 473.272 76.568 Cx+c 122.581 134.082 132.440 78.950 10.115 黑暗 空白 1µg/L 10µg/L 100µg/L 1000µg/L Ca 18.554 31.638 42.354 31.962 80.821 Cb 75.285 47.231 67.238 51.488 138.371 大子叶 Ca+b 123.995 71.657 109.554 83.421 219.115 Cx+c 51.383 65.963 62.200 71.721 58.381 Ca 77.611 52.026 28.189 41.593 42.086 Cb 88.101 79.110 39.452 63.716 70.064 小子叶 Ca+b 175.654 131.092 67.618 105.273 112.111 Cx+c 79.673 65.382 93.139 63.366 70.776 以激动素浓度为横坐标，萝卜子叶增重为纵坐标，作如下图示: 萝卜子叶增重图 大子叶光照0.16 0.14 0.12小子叶光照0.1 0.08 大子叶黑暗0.03500.06 0.0398 0.0203 0.05250.04 0.03750.02 小子叶黑暗0 空白1µg/L10µg/L100µg/L1000µg/L 以已上图可知:随激动素浓度增加，萝卜子叶增重增加。小子叶增加的幅度要比大子叶大很多。光照下的比黑暗中的增加幅度要大，原因可能是光合作用也使得萝卜子叶增重。 以黑暗下叶绿素含量为对比，以激动素浓度为横坐标，分别以大小子叶叶绿体色素含量为纵坐标作图: 大子叶叶绿体色素含量变化 600 500 Ca400 Cb300Ca+b200Cx+c100 0 空白1µg/L10µg/L100µg/L1000µg/L 由图可知:随激动素浓度增加，大子叶叶绿体色素先增大后减小。现象不是很明显。比黑暗下的叶绿体色素增加很多。 小子叶叶绿体色素含量变化 600 500 Ca400 Cb300Ca+b200Cx+c100 0 空白1µg/L10µg/L100µg/L1000µg/L 由图可知;随激动素浓度增加，小子叶的叶绿体色素先增大后减小。现象非常明显。比黑暗下叶绿体色素增加很多。 【讨论】 1. 细胞分裂素具有促细胞分裂、控制培养组织的形态建成、延迟衰老和促营养物质移动、促细胞扩大、促侧芽发育、参与叶绿体生物发生等重要的作用。本实验使用具有细胞分裂素类作用的植物生长调节剂激动素来研究细胞分裂素对萝卜子叶增大和叶绿素合成的作用。在一定的浓度范围内，萝卜子叶的增大和激动素浓度的对数成正比。 2.叶绿体色素的含量随激动素的浓度增加，成先增大后减小趋势。 3.大小子叶对激动素的反应明显不同，小子叶要敏感一点，实验现象较明显。 4.实验任务较繁杂，需要分别称量，分别研磨提取叶绿素，测吸光值。所以需要组员之间的配合。