16.临床基因扩增检验技术

16.临床基因扩增检验技术 临床基因扩增检验技术管理 为了加强对四川省临床基因扩增检验技术的临床应用管理～保证医疗质量和医疗安全～根据•临床基因扩增检验实验室管理暂行办法?,卫医发„2002?10号,～及附件•临床基因扩增检验实验室基本设置?和•临床基因扩增检验实验室工作规范?,卫检字„2002?8号,～结合我省临床基因扩增检验技术应用的实际情况～制定本规范。 本规范所指的技术是以临床诊断、治疗为目的以及其它与临床有关的用基因扩增检测技术测定核酸及其表达产物的技术。 一、医疗机构基本要求 ,一,二级以上医疗机构～或具备二级要求的民营医院。 ,二,具备相应临床应用能力和条件的医疗机构。 ,三,具备能够出具检验报告的机构或独立实验室。 ,四,采、供血机构实验室。 ,五,法律或主管部门要求的其他实验室。 ,六,同一医疗机构不得设置多个临床基因扩增检验实验室。 二、人员基本要求 ,一,检验医学等医学相关专业、大学专科及以上学历～并须持有具有培训资质机构培训的合格的技术人员～同时要 求具有一定分子生物学知识及3年临床检验操作经历～熟练掌握相关仪器设备的使用操作。 ,二,实验室负责人应具有中级及以上专业技术职称任职资格～工作岗位固定～并能对临床基因扩增检验实验室涉及的技术、理论知识有较全面的了解和理解。 ,三,三级及以上医疗机构、独立实验室至少应有3名持有具有培训资质机构培训合格的技术人员～三级以下医疗机构的实验室及其他机构的基因扩增检验实验室至少应有2名持有具有培训资质机构培训合格的技术人员。 ,四,实验室人员须有地进行各种形式的学习和相关知识更新～积极参加卫生部临床检验中心和,或,省中心的各种学术活动及室间质量评价总结活动。 ,五,实验室工作人员应建立技术档案～做到一人一档～每年更新。 三、技术管理基本要求 ,一,、实验室设施和设备的基本要求 1.临床基因扩增检验实验室应具有四个独立的工作区域～即试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区～每个区域都应设立缓冲区～最好有专用通道。总面积不小于35平方米～应有足够的空间满足检测工作的正常进行。如使用全自动扩增检测仪～扩增区和产物分析区可合并。工作区的气流、人流要单一流向。 2.各工作区应有明确标识～进入和使用实验室各区应有明确的限制。进入各个区域必须严格遵循单一流向～避免发生污染。 3.各工作区均须配置专用的实验所需仪器设备。按照卫生部•临床基因扩增检验实验室基本设置标准?进行配置～标本制备区需配置生物安全柜。 4.实验室的各个工作区域的设施、能源、照明、消毒,固定装置的紫外灯,、温控,不适合中央空调,、通风等应适用于检测工作的正常进行。 ,二,、实验室检测的基本要求 1.严格按照卫生部•临床基因扩增检验实验室管理暂行办法?和•临床基因扩增检验实验室工作规范?,卫检字„2002?8号,的要求开展各项工作。 2.临床基因扩增检验实验室属于II级生物安全,BSL-2,实验室～应按照•二级病原微生物实验室生物安全管理规范?进行生物安全管理。 3.以科研为目的的基因扩增检验项目～不得向临床出具检验报告～不得向病人收取费用。 4.临床基因扩增检验实验室必须通过技术验收～才能从事相关的检测工作。否则卫生行政部门予以处罚和公告处理。出现下列情况之一的临床基因扩增检验实验室～由省级卫生行政部门责令其停止开展临床基因扩增检验。 ,1,开展超出卫生部临检中心或者省临检中心组织的技术验收合格并报省级卫生行政部门或者相关部门备案范围的临床基因扩增检验项目。 ,2,使用未经国家药品监督管理局批准的试剂开展临床基因扩增检验的。 ,3,使用未经培训及培训不合格的专业技术人员出具临床基因扩增检验报告的。 ,4,在临床基因扩增检验中未开展室内质量控制的。 ,5,在临床基因扩增检验中未参加室间质量评价的。 ,三,质量体系文件及检测的基本要求 1(临床基因扩增检验实验室应编写的质量手册、程序性文件、标准操作程序及其相关记录表格～其内容至少应包括以下方面。 ,1,质量方针、目标、承诺。 ,2,实验室内务管理程序。 ,3,实验室人员配置及培训程序。 ,4,实验室质量控制管理程序。 ,5,仪器设备管理程序。 ,6,临床标本管理程序。 ,7,实验室生物防护与安全管理程序。 ,8,实验室文件、记录管理程序。 ,9,文件修改程序。 ,10,实验室的工作程序。 ,11,实验耗材购买、验收、储放程序。 ,12,各种试剂质检操作程序。 ,13,实验耗材质检操作程序。 ,14,实验室清洁消毒程序。 ,15,实验室废弃物处理程序 ,16,实验室生物安全操作程序。 ,17,实验室检测结果保密程序。 ,18,实验室检测结果及报告审核程序 ,19,实验结果复检操作程序 ,20,检验过程中仪器故障时应急处理程序。 ,21,抱怨处理程序。 ,22,主要仪器使用、维护、校准操作程序。 ,23,主要仪器设备期间核查操作程序。 ,24,主要检测仪器的性能评价操作程序。 ,25,标本唯一标识编号操作程序。 ,26,标本采集、验收、拒收、保存操作程序。 ,27,各检测项目的操作程序。。 ,28,实验人员能力比对操作程序。 ,29,室内质量控制操作程序。 ,30,室间质量评价操作程序。 ,31,各区冰箱温度记录表。 ,32,各区环境温、湿度记录表。 ,33,各区主要仪器使用、维护记录表。 ,34,各区主要仪器维修记录表。 ,35,各区主要仪器校准记录。 ,36,标本接收、拒收记录表。 ,37,标本保存记录表。 ,38,试剂质检、使用记录表。 ,39,实验耗材验收、质检记录表。 ,40,室内质控记录及质控图。 ,41,室内质控失控分析、处理记录表。 ,42,室间质量评价质控物接收记录表。 ,43,室间质量评价结果回报分析、总结记录表。 ,44,实验室清洁消毒记录表。 ,45,废弃物处理记录表。 ,46,仪器应急处理记录。 ,47,生物安全应急处理记录。 ,48,复检结果记录。 ,49,抱怨登记、处理记录。 ,50,保存标本处理记录表。 2.防止污染 ,1, 污染类型:扩增片段的污染(产物污染)、天然基 因组DNA的污染、试剂污染(贮存液或工作液)以及标本间交 叉污染(如气溶胶从一个阳性标本扩散到原本阴性的标本)。临床基因扩增检验实验室中污染的最主要来源是扩增产物的污染。如果发生了污染～实验就必须停止～直到找到污染源为止～并且实验结果必须作废。 ,2, 污染源的分析:测定前的污染源～测定前实验材料的污染主要来自非病人标本来源的核酸,测定分析阶段的污染源～测定分析阶段的每一步都可能发生对样本的污染。反应混合液的任何成分及核酸的制备和反应建立阶段所涉及到的实验设备的任何部位都是可能的污染源。如受污染的试剂、消耗品(如反应管～吸头)和实验设备(如加样器、离心机)等。 ,3,污染的避免:要避免污染～首先应是预防污染～操作人员要有防污染的意识～要有无“核酸”概念～在试验过程中做到人流、气流的“单一流向”～严格遵守操作规程。为避免以前测定中所产生的扩增产物的污染～可设法将其破坏掉。如在扩增反应中用dUTP取代部分dTTP～使得产生的特异扩增片段含有尿嘧啶～这样～扩增前在反应混合液中加入尿嘧啶糖苷酶(UNG)～可破坏来自以前测定的扩增产物～从而避免其对以后要进行的扩增测定的污染。另外一种是持续的长波紫外灯照射。 ,4, 去除污染的措施:工作完后必须定期对实验室采取有效的去污染措施～如用10%(v/v)次氯酸钠清洁表面,试 验后长时间,不低于2小时,的紫外照射实验操作台面和其他表面,实验设备如加样器的高压消毒,实验室的通风换气,稀盐酸擦拭污染的表面。 3.实验室质量控制 ,1,室内质量控制:由于PCR测定的高敏感性～所以必须对DNA和RNA分析的各步进行质量控制～以避免假阳性和假阴性～保证测定结果的准确性。试剂的选购、实验材料的准备、PCR本身等实验中的每一步都要求有质控。如对所用一次性耗材、试剂的质检验证。除此之外～每次实验时均需做室内质控～定性试验:阴性对照、试剂空白对照、弱阳性对照,定量试验:阴性对照、试剂空白对照、临界值对照、中,或高,值对照～同时～制定适宜的质控规则～绘制质控图并一个月进行一次相关分析。 ,2, 室间质量评价:临床基因扩增检验实验室还应参加卫生部临床检验中心或/和四川省临床检验中心组织的室间质量评价活动。 ,3,凡是向临床出具报告的检测项目均应开展室内质量控制～同时必须参加室间质量评价活动。其结果将作为其开展临床基因扩增检验的重要依据之一。 4.对检测仪器的要求 ,1,实验室应分册建立主要仪器设备档案～做到一台仪器一个档案～档案至少应包括以下内容:设备的名称,制造 商名称、型号、序号或其它唯一性标识,接收日期和启用日期,目前放置地点,临床基因扩增检验实验室的区域,,接收时的状态,例如全新的、经改装的,,仪器使用说明书的复印件,校准和,或检定的日期以及下次校准和,或检定的日期,迄今所进行的维护和今后维护计划的细节,损坏、故障、改装或修理的历史记录及验证的实验结果。 ,2,任一设备如有问应立即停止使用～并加上明显标识～如可能应将其移放在规定的地方直至修复。 ,3,修复的设备应经校准和,或检定～满足检测要求后方能使用。 ,4,实验室应检查由于上述缺陷对以前所进行的检测工作的影响～并记录相关分析、处理意见。 ,5,每一台设备应有明显的标识～特别应标明其校准时间及下次校准时间～以及仪器的运行状态。 ,四,技术验收的要求 1(技术验收需提供的资料 ,1,•医疗机构执业许可证?复印件。 ,2,拟,已,设置基因扩增检验实验室所在机构的医疗卫生资源状况、对临床基因扩增检验的需求情况以及实验室运行的预测分析,如为换证验收～此项不需填写,。 ,3,拟,已,设基因扩增检验实验室的设置平面图。 ,4,实验室主要负责人简历表。 ,5,实验室工作人员一览表。 ,6,主要仪器设备一览表。 ,7,拟,已,开展的临床基因扩增检验项目。 ,8,实验室相关程序文件和标准操作程序,SOP,目录。 ,9,检验报告样单2 份,一份定性～一份定量报告,。 ,10,其它有关质量文件名称或证明材料,如已经开展的实验室的室内质控和室间质评资料,。 2(验收的程序:申报—初审—技术验收—监督评审-复评审。 ,1,申报:临床基因扩增检验实验室的所在法人机构自愿提出技术验收申请于四川省临床检验中心。 ,2,初审:四川省临床检验中心组织相关专家进行现场初评。 ,3,技术验收:三甲及以上医疗机构、独立实验室由卫生部临床检验中心组织相关专业专家按照•临床基因扩增检验实验室基本设置标准?和相关要求～进行技术验收。三甲及以下医疗机构由四川省临床检验中心组织相关专业专家按照•临床基因扩增检验实验室基本设置标准?和相关要求～进行技术验收。 ,4, 监督评审～定期或不定期抽查～原则上一年一次。 ,5,复评审---换证评审:每5年一次。 4. 临床基因扩增检验实验室若更换新的场所～需经过 相关专家的认可。 5.技术验收严格按照•临床基因扩增检验实验室管理暂行办法?和•临床基因扩增检验实验室工作规范?,卫检字„2002?8号,的要求～同时还应注意如下问题。 ,1,临床基因扩增检验实验室应使用经国家药品监督管理局批准的临床检验试剂开展临床基因扩增检验项目。 ,2,实验室应编制各项工作的操作程序和规程～所有的操作程序和规程及参考数据等都应现行有效并便于工作人员使用。 ,3,实验室应有适合自身实际情况又符合现行操作程序和规程的记录#管理制度#,所有检测的原始记录、计算和导出数据均应包括足够的信息以保证其能够再现,原始记录和数据均应归档保存5年,包括电子和纸张,～并采取有效措施～防止数据的泄露、丢失和损坏。 ,4,检测结果的报告应准确、清晰、及时和客观。定性测定报告“阴性”或“阳性”,定量检测则以拷贝数,ml或IU/ml报告。如结果高于检测方法上限～则报告‡拷贝数,ml或IU/ml～或按照临床医生的要求对样本稀释后再测定～结果乘上稀释倍数,如结果低于检测方法的下限～则报告 †拷贝数,ml或IU/ml即可～不能报告为“0”或“阴性”。每份报告至少应包括的信息:姓名、性别、年龄、科室、床号、住院号、标题、报告的唯一性标识(如序号)、检测标本 的特性和状态、检测标本的接收时间和检测时间,时间要求到分钟,、检测方法、检测及审核人员的签字、签发时间,时间要求到分钟,、检测结果的生物参考区间或检测限、备注,需要补充或说明的信息,。 ,五,、临床基因扩增检验实验室的监督管理 1.卫生部临床检验中心和四川省临床检验中心负责对其行政区域内临床基因扩增检验实验室及其它实验室的质量进行监督管理。 2.卫生部临床检验中心和四川省临床检验中心组织专家负责对其行政区域内临床基因扩增检验实验室及其它实验室进行技术验收。