苯丙胺类药物的气相色谱及气质联用检测

苯丙胺类药物的气相色谱及气质联用检测 ,/(辟,) 寻一7 i4(4).L994 ? 研究论文? 苯丙胺类药物的气相色谱及气质联用检测 崔建芳李农崔凯荣’周屹一一 (中国医学科学磊西北京100050) A本文报道苯丙胺等l1种类似药物.用气相色谱及气质联用方法进行同 者尿样中母体药物及其代谢物的研究,可准确判断未知屎样中此类药物的存在. 关键词:兰里画拳堕塑塑皇堕里堕一 苯丙胺类(amphetamines)药物属于精神 运动兴奋剂,最早被国际奥委会规定为运动费 禁用药,目前发展为11种:苯丙胺(am— phetamine),甲基苯丙胺 (methylamphetamine),乙基苯丙胺(ethylam— phetamine),二甲苯丙胺(dimethylam— phetamine),氯丙苯丙胺(mefenorex),氰乙 苯丙胺(fenp~oporex),氰苄苯丙胺(am— phetaminiD,呋甲苯丙胺(furfenorex),苄甲 苯丙胺(benzphetamine),氯苄苯丙胺(cloben— zorex)和苯丙胺乙茶碱(tenethyl~ine).苯丙 胺和甲基苯丙胺的检测与体内的代谢有较多 的报道”,本文较系统地研究它们的非结合 型的母体药及代谢物在尿样中的存在状况和 它们的代谢相关性.苯丙胺类药物为挥发性的 含氮化合物,选用毛细管气相色谱配备氮磷检 测器的筛选方法(GC/NPD)可检出量为 0.5rig,气质联用(GC/MS)方法可检测量为 10ng,采用多种衍生化方法可显着提高检测 灵敏度和准确性.用本文方法和代谢研究结 果,准确检出了6个未知尿样中的苯丙胺类药 物. 实验部分 一 ,仪器与药品 GC/NPD:惠普公司HP589OA气相色谱 仪,配备氮磷检测器;HP3383A积分仪; 国家博垂运动医学研究所.北京100029 HP7673A自动进样器. C-C/MS:HP589OA气相色谱仪,联接 HPS970B质量选择检测器;HP300计算机; HP59970化学工作站;HP7673A自动进样 器. 试剂与药品:10vg/ml二苯胺内标乙醚 液.标准品苯丙胺,甲基苯丙胺为Sigma产 品,其余标准品及药品均由加拿大等兴奋剂实 验室提供.尿样来自受试者和国际奥委会 医学委员会. —标准品溶掖:精密称定苯丙胺类标准品 2mg,用甲醇定容至5ml吩嗪内标溶液及衍 生化试剂参考文献.. 二,分析条件 GC/NPD:色谱柱HP一5,长17m,内径 0.2ram,膜厚0.3Sum}载气:氦气;柱流速: 2.0ml/min(室温);分流比:1:10;柱升温 程序:初温100C,维持lmin,以1O’C/rain升 至200?,再以20C/min升至300’C,维持 4mln. 检测器气体:氢气3.0ml/min.空气 90ml/min,辅助气(氦气)27.0ml/min;进样 口温度:250LC;检测器温度:280C. GC/MS;色谱柱HP一5,长25m,内径 0.2ram,膜厚0.33.um;载气:氦气;柱流速: lml/min;进样口温度:250C{接口温度: 药物分析杂志 280C;柱升温程序:初温80C,维持lmin, 以2OC/rain升至240C,继以15C/min升至 300C,维持10rain;扫描质量范围:40,500 a.IT1.U?a 三,色谱分离与测定 1.可检出量及回收率精密取标准品溶 液适量,制备成15ttg/ml(以游离碱计)甲醇 溶液,进样1IGC/NPD,色谱分离见图1,保 留时间列于表2.取标准溶液适量,{bj备成 0.51ug/m|,进样1I,得最小可检出量为 0.5ng.取4份40.ug量的标准品溶液,分别置 于10ml具塞试管中,加入空白尿样5ml,然后 从加5mo|/L氢氧化钾溶液0.5ml起按以下 尿样提取方法进行,回收率结果见表l 图1苯丙胺类药物气相色谱分离 峰号同表1 药名和保留时间分别见表1,2 衰苯丙胺龚药结构cHs—cH:H—N\’回收率爰代谢物 CIHR llI i m|n ‘氯丙苯丙胺对腻品产生双峰,故来作回收辜计算 2.GC/MS检出量将含有各标准品 10ptg/ml和20~tg/ml甲醇溶液,分别进样lpd? 前者可检出量为10ng,后者(20ng量)可得到 满意的全谱图.保留时间与质谱特征离子,见 表2. 三氟乙酰化:取标准品溶液适量,在室温 下,用弱氮气流挥去溶剂,加三氟乙酐及乙酸 乙酯各100/~1,于7Oc反应20raint挥去试剂t 残留物加0.3ml的18/~g/ml吩嚷zl酸乙酯 液溶解,进样1l,GC/NPD与GC/MS分析 3.苯丙胺类药物的衍生化结果见表2. 裹2苯丙胺类药物有及其衍生鞠的气相色谱与质昔数据 三甲基硅烷化:标准品及吩嗪内标溶液挥 去溶剂的残留物加N一甲基一N一三甲基三 氟乙酰胺(MSTFA)100/~1于75C反应10rain. Gc/Ms分析(表2). 四,尿样分析 受试者服药量参考国际奥委会规定,服药 后尿样收集方式及累积排泄测定方法参考文 . 药物分析杂志 1.尿样提取准确取尿样5ml+置1oml 具旋盖(内有Teflon膜)试管中,加5tool/1 氢氧化钾溶液0.5ml,氯化钠3gt准确加二苯 胺乙醚渡2ml,置振荡器振荡提取lOmin,离心 后,吸取1.5ml加入样品瓶t加无水硫酸钠 0.1g干燥t直接GC/NPD分析,尿空白与标准 品平行分析 2.母体药及非结合型代谢物鉴定上述 提取液,室温下,小心用氮气吹干,加301乙 酸乙酯溶解,进样1.ul,Gc/Ms分析;如上操 作(不加内标二苯胺)得到提取液的残留物,按 标准品衍生化方法进行,用GC/NPD和C,C/ MS分析母体药及代谢物的衍生物,结果见表 1. 结果与讨论 1.本文方法可同时分离和鉴定11种苯丙 胺类药,除苄甲苯丙胺与氯苄苯丙胺回收率分 别为71.8%和75.9,其余均在88.5以上 (表1),由于以上两药在尿样中主要以代谢物 形式存在t因此不影响检测.图1中所示第5 号峰来自氯丙苯丙胺参照标准品,经质谱鉴定 及与氯丙苯丙胺质谱比较,产生相同的基峰 (m/z84),但氯丙苯丙胺产生的次强峰(m/z 120)及其同位素峰(m/z122)+在5号峰化合 物中消失,两者苄基特征离子(m/z91,65)具 相同丰度,又见m/z174(M”一1)的特征离 子?可认为该峰是氯丙苯丙胺分子内消除一分 子氯化氢的产物,两者量的比例较恒定为55: 45,究竟来自于色谱之前或之后,有待进一步 研究.尿样分析亦见这一降解产物. 2.苯丙胺类药属于易挥发的含氮化合物. 通常采用气相色谱筛选方法,疑阳性者直接气 质联用分析确认.但检测灵敏度及产生的特征 离子较少?相对丰度较弱将其含活性氢的化 合物进行三氟乙酰化后,增加了热稳定性,检 测灵敏度及质谱特征离子强度显着增加,它们 的三甲基硅烷化衍生物的质谱均可见(M一 CH.)的重要特征离子峰.比较它们衍生化前 后的质谱(表2),可以准确判断苯丙胺类药物 的存在. 3.苯丙胺类药物口服后在体内迅速吸收t 1h后尿中可检出母体药或其代谢物,48h后基 本上检测不到非结合型的母体药或代谢物.非 结合型的代谢物主要为烷基胺去烷基的产物, 苯丙胺还可检出侧链8位碳原子羟化产物(去 甲麻黄素).呋甲苯丙胺,氰苄苯丙胺,苄甲苯 丙胺和氯苄苯丙胺在服后收集的尿样中均检 测不到母体药,它们的主要代谢物为苯丙胺或 甲基苯丙胺t其中有的两者均可检测到.其余 的苯丙胺类药均可在服后15h之内检测到母 体药及代谢物苯丙胺或甲基苯丙胺.苯丙胺类 药物结构及它们的代谢物见表1.它们的结合 型代谢物需水解后检测,因此非结合型母体药 和代谢物的检测是一个快速,简便的方法.用 本文报道的数据和方法准确判断检出了6个 未知尿样中的苯丙胺类药物. 参考文棘 lNa~~Mmh*cka~.FIeIRO.SchlemmerF.etaL_ Quantitationolamphetamineinptasmaarmcerebrospinal fluidbyga.com ography_ms ionmonitoring.t~sing芦methylphenetlamineasinter— nAIstanda.JChromatogr,?omedAppI.1979.1 386 2TeradaMdYo~imuraS.R~pidarIdgy}…tIYe methodfordeterminationolmethanlohetamineand phetaminem~rlnebeleetrmacaptureghr?1.gn— phy.JChromatogr.1982,237.285 3崔建芳,周屹.崔凯荣等.苯甲吗啉类药物的代谢及代 谢产物的研究.药学,1990.25’8);632 4CulJF.LiLaadZb,ouTH.Thestudiesontheseparatlon andidentificationot”phedrinesinurinebyGC/MSD.Chi— neChe【n,ca|Lell….990,1(1)175 L奉文于l992年】0月22日收刊) IdentificationofAmphetaminesinUrinebyGCandGC—MS CuiJianfangLiNong.CuiKairong.ZhouYiandZhouTonghui (t~zltuteofMateriaMedicoChine.seAcademyofMedicalSciences.Belting 100050) Twomethodsweredevelopedforthesimultaneousseparationandidentificationofam— phetamines(amphetamine.methylamphetamine,ethylamphetaminedimethylamphetamine. mefenorexfenproporex,amphetaminilfurfenorexbenzphetamineclobenzorexand fenethylline). Thedataofgaschromatographyandmassspectrometryforamphetaminesandtheir TFA一 TMS—derivativeswerereported.Thefreedrugsandtheirfreemetabolitesinhuman urinewereidentified. Keywords:amphetamines:metabolites:GC:MS 《医学习盼与实践》杂赢.1征求l995年国内外订户 《医学理论与实践》杂志是我国第一份大综合性医学刊物,涉及 医,药,护,管,卫 诸方面,月刊,l6开本,48页.为配合继续医学教育,本刊1994年起,利用 刊物的1/3版面 刊登我国着名专家学者撰写的医学新进展方面的文章根据刊物的 办刊宗旨,将继续利用z/3 左右的版面刊登适用于临床医务人员以及基层医务人员的实用类 稿件,包括:中医,西医,中 西医结合,护理,理疗等.本刊公开发行7年来,深受广大读者欢迎,发行量逐年上升,有稳 定的作者和读者队伍,为进一步提高刊物的社会效益,现征求1995年国内外订户.国内订价 1.50元/册,垒年l8.00元/套,国外订价2.0美元/册,奎年24美元/套,邮发代号18一l04. 如在邮局订不到,可直接从《医学理论与实践》杂志社订阅,地址:河北省廊坊市第62号信 箱,电话:213206(0316),邮政编码:102800. 为了加强刊物与读者联系,本刊在全国广泛招聘通讯员,有意者,请与本刊通联部联系, 电话,地址同上. 《医学理论与实践》杂志社