贮藏条件和时间对灰毡毛忍冬药材质量的影响.doc

贮藏条件和时间对灰毡毛忍冬药材质量的影响.doc 贮藏条件和时间对灰毡毛忍冬药材质量的影响 [摘要]研究不同贮藏条件和时间对灰毡毛忍冬质量的影响。采用不同贮藏包装:塑料袋抽真空包装、塑料包装、编织袋包装、编织袋具内膜密封包装、纸袋包装、麻袋包装;不同贮藏方法:常温、5 ?冰箱、低温-20 ?冰箱 、常温干燥器等进行组合共24批样品。于不同时间测定其中有效成分的变化。实验结果明各贮藏组药材中成分含量变化与贮藏时间、贮藏条件(贮藏环境、包装方式)有关。在相同的贮藏时间下，贮藏环境(温度、湿度)对药材质量稳定性影响其关系依次为:低温-20 ?左右冰箱>5 ?左右冰箱>常温干燥器组>常温组;包装方式对药材质量稳定性影响其关系依次为:塑料袋抽真空包装>编织袋具内膜密封包装>塑料袋包装>编织袋包装>麻袋包装>纸袋包装。在相同的贮藏条件下，随着贮藏时间的延长，各贮藏条件组药材的成分除咖啡酸含量会逐渐增高外，其余5个有效成分的含量逐渐减少。贮藏时间对山银花的内在质量 (化学成分含量)和外观色泽 (生霉 、生虫、变黄、变黑等 )均有显著影响。从药材有效成分稳定性、药材外观色泽变化、节约贮藏成本及提高药材等级和售价等方面综合考虑，灰毡毛忍冬药材以低温(5 ?)、避光(具黑色内膜)、密封贮藏不超过24个月为宜。 [关键词]灰毡毛忍冬;贮藏时间;贮藏方式;HPLC;药材质量 灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand. -Mazz.是忍冬科忍冬属植物，其干燥花蕾和初开花具有清热解毒，凉散风热的功效，《中国药典》 将其收载为山银花药材源植物之一[1]。灰毡毛忍冬在我国西南、中南地区大量种植，与金银花商品药材源植物忍冬L. japonica Thunb相比，具有资源丰富，产量高等特点，在金银花类药材中占有较高的市场份额[2]。 近年来，对灰毡毛忍冬的扦插、加工方法、采收时间等对灰毡毛忍冬化学成分影响研究报道较多[3-9]，但储藏条件和储藏时间对灰毡毛忍冬药材质量影响的研究未见报道。本研究系统探讨了储藏条件和储藏时间对灰毡毛忍冬药材质量的影响，为制定灰毡毛忍冬药材合理的储藏措施提供理论依据。 1 材料 1.1 样品 样品采摘自重庆秀山县灰毡毛忍冬GAP种植基地，经重庆市中药研究院李隆云研究员鉴定为忍冬科忍冬属植物灰毡毛忍冬L. macranthoides 的花蕾或初开的花，蒸汽杀青后经高温烘干机干燥备用。 1.2 仪器 岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-M20A二极管阵列检测器，Lcsolution色谱工作站，HP LaserJet 1020激光打印机，昆山市超声仪器有限公司KQ-250B型超声波清洗机，水浴锅(北京市长风仪器仪表公司(CF长风))，1/1万电子天平(德国赛多利斯BT-224s)，1/10万电子天平(日本岛津LIBROR AEG-45S)。冰箱，超低温冰箱，普通干燥器。安捷伦1200高效液相色谱仪， Alltech ELSD 2000ES蒸发光散射检测器。 1.3 试剂与试药 绿原酸、咖啡酸、木犀草苷对照品购自中国食品药品检定研究院，批 号分别为110753-200413，110885-200102，111720-200602。3，5二咖啡酰奎宁酸购自成都曼思特生物科技有限公司，纯度>98%(HPLC)。灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷由中国药科大学李萍教授提供，纯度>95%(HPLC)。流动相为色谱纯，其余试剂为分析纯。 2 方法 2.1 储藏 取供试样品50 g，精密称定。设置6种包装:塑料袋抽真空、塑料、编织袋、编织袋具内膜密封、纸袋、麻袋;每种包装平行称取4份。其中真空包装的每袋10 g装量，共装20袋。每种包装的样品分别置于4种储藏方法:常温、5 ?左右冰箱、低温-20 ?左右冰箱、常温干燥器，共24个处理，在贮藏前对样品中有效成分的含量按本文方法进行初始测定，样品中绿原酸质量分数10.011%，咖啡酸0.032 8%，木犀草苷 0.046 9%，3，5二咖啡酰奎宁酸 15.593%。灰毡毛忍冬皂苷乙 7.263%、川续断皂苷乙 1.589%。并照《中国药典》2010年版附录? H第一法测定供试药材的初始含水量为11.73%。24个处理分别于贮藏3，6，12，18，24个月后的测定样品中有效成分的含量。 2.2 绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、3，5二咖啡酰奎宁酸含量测定 2.2.1 色谱条件 Phenomenex Synergi Hydro-RP 80A C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，4 μm);流动相乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，0,10 min，14% A;10,20 min，14%,20% A;20,30 min，20% A;30,40 min，20%,70% A;40,45 min，70%,90% A;45,60 min，90%,14% A;流速 1 mL?min-1;检测波长 327，322，437，327 nm，进样量 10 μ L。 2.2.2 线性关系考察 精密称取绿原酸、咖啡酸、木犀草苷和3，5二咖啡酰奎宁酸对照品适量，分别加甲醇制成含绿原酸0.004 9 g?L-1、咖啡酸0.002 1 g?L-1、木犀草苷0.002 4 g?L-1、3，5二咖啡酰奎宁酸0.001 6 g?L-1对照品溶液。分别吸取以上4种对照品溶液各0.5，1，5，10，20 μL进样分析。以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，绿原酸回归方程Y= 2.275 079E-007X+2.765 879 7E-003，r=0.999 9，线性范围为0.024 5,0.98 g?L-1;咖啡酸回归方程Y=2.591 248E-007X+6.364 204E-003，r=0.999 8，线性范围为0.010 5,0.42 g?L-1;木犀草苷回归方程Y=1.793 146E-007X-9.420 646E-004，r=0.999 9，线性范围为0.012,0.48 g?L-1;3，5二咖啡酰奎宁酸回归方程Y=3.189 356 2E-007X+2.734 681 5E-003，r=0.999 9线性范围为0.008,0.32 g?L-1。 2.2.3 灰毡毛忍冬皂苷、川续断皂苷含量测定 参照《中国药典》2010年版第一部山银花项下含量检测方法[1]。精密称取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品、川续断皂苷乙对照品适量，加50%甲醇溶解制成灰毡毛忍冬皂苷乙0.000 7 g?L-1、川续断皂苷乙0.000 2 g?L-1的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2，10 μL，供试品溶液5,10 μL，注入液相色谱仪，测定。以外标两点法计算绿原酸的含量，以外标两点法对数方程计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量。 3 结果与分析 3.1 包装方法和贮藏时间对有机酸类的影响 3.1.1 绿原酸 采用不同包装，储藏在不同的温度下，其绿原酸含量， 随着储藏时间的延长，绿原酸含量逐渐下降。用塑料袋和抽真空的塑料袋储藏1年，其绿原酸含量变化不大，以5,-20 ?下变化更小;在5,-20 ?下，用抽真空的塑料袋储藏药材2年，其绿原酸含量变化幅度不大，温度越低，其含量下降越少。采用具内膜密封编织袋在5,-20 ?下储藏1年，其绿原酸含量变化基本没有变化;在-20 ?下藏药材2年，其绿原酸含量变化幅度不大。采用编织袋在常温下储藏半年，其绿原酸含量显著下降;采用纸袋和麻袋包装储藏，在常温下储藏半年，其绿原酸含量变化较少。采用纸袋、编织袋和麻袋包装储藏，在-20 ?下储藏18个月，其绿原酸含量变化不大。不同包装储藏试验结果表明，置于真空、密闭和干燥条件下，能明显减缓绿原酸含量的下降趋势。在相同的包装条件下，温度越高，绿原酸越不稳定，温度越低，如-20 ?，在24个月里，绿原酸的含量几乎无变化，说明，温度越低，越有利于药材的保存。储藏24个月后，不同材料包装中绿原酸含量衰减率分别为:塑料袋抽真空包装 14.3%、塑料包装 16.1%、编织袋包装 46.5%、编织袋具内膜密封包装 22.3%、纸袋包装 31.2%、麻袋包装 32.9%(表1)。 3.1.2 咖啡酸 采用不同的包装，药材中咖啡酸含量则是随储藏时间的延长含量呈上升趋势，在12个月后含量上升显著。用塑料袋和抽真空的塑料袋储藏1年，其咖啡酸含量变化不大，以5,-20 ?下变化更小;在5,-20 ?下，用抽真空的塑料袋储藏药材2年，其咖啡酸含量变化幅度不大，温度越低，其含量上降越少。采用具内膜密封编织袋在5,-20 ?下储藏2年，其咖啡酸含量变化基本没有变化;在-20 ?下藏药材2年，其咖啡酸含量变化幅度更小。 采用编织袋在常温下储藏半年，其咖啡酸含量显著上升;采用纸袋和麻袋包装储藏，在常温下储藏1年，其咖啡酸含量变化不大。6种包装方法在-20 ?下藏药材2年，其咖啡酸含量基本没有变化。不同包装储藏试验结果表明，置于真空和干燥条件下，能明显减咖啡酸含量的上升趋势(表2)。 3.1.3 3，5二咖啡酰奎宁酸 采用不同包装，储藏在不同的温度下，其3，5二咖啡酰奎宁酸含量，随着储藏时间的延长，3，5二咖啡酰奎宁酸含量逐渐下降。用塑料袋和抽真空的塑料袋储藏6个月，其绿原酸含量变化不大，以5,-20 ?下变化更小;在-20 ?下，用抽真空的塑料袋储藏药材1年，其3，5二咖啡酰奎宁酸含量变化幅度不大。采用不同包装，温度越低，其含量下降越少。在本试验条件，储藏半年，3，5二咖啡酰奎宁酸含量变化基本没有变化;除纸袋外，在-20 ?下储藏1年， 3，5二咖啡酰奎宁酸含量变化基本没有变化。 不同包装储藏试验结果表明，置于真空和密闭条件下，能明显减缓3，5二咖啡酰奎宁酸含量的下降趋势(表3)。 以上述有机酸类为灰毡毛忍冬质量评价指标，真空包装的药材的质量稳定性好，编织袋包装的药材的质量稳定性最差，其稳定性能为塑料袋抽真空包装>塑料包装>编织袋具内膜密封包装>麻袋、纸袋和编织袋包装。 3.2 包装方法和贮藏时间对木犀草苷含量的影响 采用不同包装，在不同的储藏温度下，随着储藏时间的延长，木犀草苷含量逐渐下降。常温下，除纸袋外，不同包装下木犀草苷在12个月后开始快速下降，其中真空包装下降最慢，麻袋和编织袋等自12个月后下 降比较迅速。用塑料袋和抽真空的塑料袋储藏1年，其木犀草苷含量变化不大，以真空包装的药材木犀草苷含量下降更慢。在5 ?下，6种包装储藏1年，其木犀草苷含量较稳定。在-20 ?下，6种包装储藏2年，其木犀草苷含量较稳定(表4)。 不同包装储藏试验结果表明，置于真空和干燥条件下，能明显减缓木犀草苷含量的下降趋势。在相同的包装条件下，温度越高，木犀草苷越不稳定，温度越低，如-20 ?，在24个月里，木犀草苷的含量几乎无变化，说明，温度越低，越有利于药材的保存。木犀草苷作为山银花中主要的黄酮类物质，在常温环境下波动较大，总体随时间的延长呈下降趋势，在干燥而低温的环境里，其含量变化不大。说明低温，干燥有利于黄酮类物质的保存。 以黄酮类成分木犀草苷为评价指标，可以看出，真空包装的药材质量稳定性好，编织袋的药材质量稳定性最差，其稳定性能为塑料袋抽真空包装>编织袋具内膜密封包装>塑料包装 >纸袋包装>编织袋包装>麻袋包装。 3.3 包装方法和贮藏时间对皂苷类成分的影响 采用不同包装，储藏在不同的温度下，药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量，随着储藏时间的延长，灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量缓慢下降。用纸袋包装在常温下，半年之内，药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量基本稳定;其余包装药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量在1年内基本稳定。在5,-20 ?下，药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量在2年内基本稳定。干燥和密封与否对药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量影响较小。在相同的包装条件 下，温度越高，药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙越不稳定，温度越低，如-20 ?，在24个月里，药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量影响较小，表明随着温度的降低，有利于药材的质量稳定和药材保存。 在常温状态下，灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙在不同包装材料中，在12个月其含量下降较慢，皂苷成分基本稳定;在18个月后灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量下降较快。 以皂苷类成分灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量为评价指标，真空包装的药材质量具有稳定性强，编织袋的药材质量稳定性最差，其药材质量稳定性能为:塑料袋抽真空包装>塑料包装>编织袋具内膜密封包装>编织袋包装>纸袋包装>麻袋包装，见表5，6。 3.4 方差分析与多重比较 利用SPSS软件进行方差分析发现，不同包装方法、储藏温度及保存时间进行保存的灰毡毛忍冬中，各有效成分存在极显著差异(表7)。利用SPSS软件进一步对不同包装方法、不同储藏温度和不同保存时间进行LSD多重比较发现，在灰毡毛忍冬的所有有效成分中，除咖啡酸外其余几个指标均为“抽真空塑料袋”组为最高，并且与其余包装方法组相比均存在明显统计学差异，说明该包装方法对灰毡毛忍冬保存最好;不同储藏温度下LSD多重比较灰分析发现，除咖啡酸外其余各有效成分均为-20 ?保存时含量最高，并且与其他各组相比具有明显统计学差异;不同保存时间LSD多重比较分析发现，除咖啡酸外其余各有效成分均随保存时间增加而减少，并且各成分在不同保存时间之间具有明显统计学差异(表8,10)。 4 讨论与结论 4.1 药材包装 通过24个月的储藏实验研究结果表明，包装材料的性能与合理的包装结构在一定的贮存条件下，对药材商品质量影响很大。如果包装材料性能不好或结构不合理，在恶劣的贮存条件下易造成药材商品变质，带来经济损失。综合不同材料包装中药材中的有机酸类、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙、木犀草苷等成分为灰毡毛忍冬质量评价指标，真空包装的药材的质量稳定性好，编织袋包装的药材的质量稳定性最差，其药材质量稳定性为塑料袋抽真空包装>塑料包装>编织袋具内膜密封包装>麻袋、纸袋和编织袋包装。从不同包装材料出储藏药材的化学成分的稳定性知，采用纸袋和麻袋包装储藏，不利绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的稳定。真空包装、塑料袋，编织袋具内膜这样的复合包装等包装材料的防潮、密封等性能好，其包装内的药材有效成分与水分、外观质量均好于其它包装材料。用这些包装药材商品，可保证药材商品在流通中的安全和降低对其质量的影响，因而有一定的推广实用价值。考虑到包装成本，可选用编织袋具内膜包装，因此药材商品的生产者、经营者和使用者对药材商品的包装问题应予以高度重视。 4.2 储藏时间 本研究显示，药材储藏时间随包装、储藏温度而异，其储藏时间稳定性为:塑料袋抽真空包装>塑料包装>编织袋具内膜密封包装。随储藏温度的降低，对药材质量的影响减少，其药材储藏时间延长。在常温下，药材储藏半年，其绿原酸含量变化较少。如用纸袋包装在常温下，半年之内，药材质量基本稳定;储藏在在低温下、干燥和密闭环境中，可延长至1年; 在-20?储藏药材，储藏期可达2年。 4.3 储藏温度 中药材的有效成分在常温条件下比较稳定，容易保存，随着温度的升高，药材中的物理，化学和生物的变化加快，温度越高，越容易使药材本身所含的性质不稳定的物质发生变化分解。空气中湿度变化是引起中药材质量变化的又一重要因素，药材吸湿或解湿，会增加或减少药材含水量，引起药材物理性质或化学性质的变化，如含水量、化学成分、外形和体态的变化，而且还能招致微生物的繁殖和害虫的生长，从而使药材质量发生改变。本试验表明，随着温度降低，贮藏环境越干燥，对灰毡毛忍冬药材质量影响越少，药材的有效成分的含量越稳定，有利于延长药材储藏时间。如纸袋包装在常温下，药材储藏半年，其绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量基本稳定;在5 ?下储藏，绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量在1年内基本稳定;在-20 ?下储藏，绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量在2年内基本稳定。灰毡毛忍冬药材在储藏18个月后，其有效成分含量下降显著，加之温度和湿度的影响，部分包装材料和贮藏方式下的药材外观形态上出现生霉、生虫的情况，储藏18月左右5 ?冰箱麻袋、编织袋轻微长霉现象，24个月后长霉较多，有霉败味，手粘之湿度较大。建议灰毡毛忍冬药材置于低温，干燥、通风的环境，有利于药材质量的稳定。 4.4 储藏中化学成分的变化 据报道，忍冬L. japonica花蕾采收后室温下摊平，晾干后贮藏，1个月后，绿原酸和总黄酮显著下降，3个月后，仅为采收时的50%,60%[10]。 采用纸袋和麻袋包装储藏，在常温下储藏半年，其绿原酸含量变化较少。用纸袋包装在常温下，半年之内，药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量基本稳定;不同包装中，咖啡酸、3，5二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷，其含量在1年内基本稳定，说明咖啡酸、3，5二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷的稳定性优于绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的稳定性，不易受环境变化的影响。随着储藏时间的延长，咖啡酸含量的升逐渐升高，本研究其余成分则下降。绿原酸、3，5二咖啡酰奎宁酸分别都含有一个咖啡酸的基团，推测可能是由于绿原酸、3，5二咖啡酰奎宁酸的分解引起的。 [参考文献] [1] 中国药典.一部[S].2010:29. 灰毡毛忍冬应作为正品金银花的植物来 [2] 汪冶，文惠玲，梅树模. 源[ J ] . 中国中药杂志， 2008， 33 (3) :341. 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Impact of storage conditions and time on herb of Lonicera macranthoides MA Peng， LI Long-yun*， ZHANG Ying (Institute of Material Medical Planting， Chongqing Academy of Chinese Materia Medica， Chongqing Key Laboratory of Chinese Medicine Resources， Chongqing 400065， China) [Abstract] To study the effect of different storage conditions and storage time on herb quality of Lonicera macranthoides， different packaging materials including vacuum plastic bags， plastic bags， woven bags， sealed with endometrial bags， paper bags， sack bags were selected for the study under different storage conditions including room temperature， 5 ? refrigerator， low temperature of -20 ? refrigerator and desiccator. Twenty-four batches of samples were used for the study， and active ingredients were determined. The experimental results showed that the ingredients in each storage group changed with the storage time， storage conditions (storage environment， packaging). Under the same storage time， the storage environment (temperature， humidity) had effect on the stability of herb quality. Low temperature had less effect on herb quality. The effect of packaging on herb quality was as following: plastic vacuum packaging> woven with endometrial sealed packaging> plastic bag> woven bag> sack bags > paper bags. Under the same storage conditions， with the increase of storage time， caffeic acid content increased slowly， and other five ingredients content decreased gradually. Storage time affected significantly on the intrinsic quality (chemical composition) and appearance of herb.It is suggested that low temperature (5 ?)， dark and sealed storage are suitable for storage of L. macranthoides herb， the storage time should be not more than 24 months. [Key words] Lonicera; storage means; storage time; HPLC; quality of medicinal matieral doi:10.4268/cjcmm20140606