七叶莲大孔树脂研究方案

七叶莲大孔树脂研究 1.仪器 Waters2695高效液相色谱系统，waters2696 DAD检测器，Emopwer色谱工作站，Milli-Q Synthesis超纯水纯化系统(millipore，法国)，0.45,m滤膜，Phenomenex Luna C色谱柱(250mm×4.6mm，5μ);Y21515恒流泵(保定兰格18 恒流泵有限公司);医用乙醇(北京振泰创业科技发展中心);101-1AB型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司);BUCHI Rotavapor R-200，BUCHI Heating Bath B-490(瑞士布琪公司);DLSB低温冷却循环系统(郑州长城工贸有限公司); BUCHI B-684馏分收集器(瑞士布琪公司);BS110S型Sartorius万分之一天平(德国赛多利斯科学仪器有限公司);KQ-500型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);HZQ-F全温振荡培养箱(哈尔滨市东联电子技术开发有限公司);常压大孔树脂分离柱(清华大学试剂库) 2.试剂 乙腈(Fisher公司，色谱纯);甲酸(北京化工厂，纯);Milli-Q 超纯水(millipore,法国);七叶莲药材。 3.样品前处理 取一定量七叶莲药材，加70%乙醇，加热回流3次，3h+1.5h+1.5h滤过，合并滤液，浓缩成浸膏，然后加水稀释、滤过，滤液用4%盐酸调pH=5，即得。 4.D101大孔树脂树脂动态筛选 4.1上样流速的选择 取D101大孔树脂树脂干燥树脂5g，经95%医用乙醇浸泡充分后，树脂体积约为30ml。湿法上柱(1.6×13.5cm)，水洗至无醇味，上样样品分别以2bv/h，3bv/h以及4bv/h的流速上样，进行动态吸附，流出液分段收集，每5ml收集一次样品。样品取1ml用水定容至10ml，测定流出液中双咖啡酰基奎宁酸含量。 4.2洗脱剂的选择 取D101大孔树脂树脂干燥树脂5g,三份，95%医用乙醇浸泡24h，充分溶胀，树脂体积约为30ml，分别湿法上柱(1.6×13.5cm)，水洗至无醇味。按照2bv/h 的流速上样，上样体积30ml，水洗1.3BV，分别用180ml的20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%的乙醇2bv/h流速洗脱树脂柱，收集洗脱液，60?减压干燥，称取0.5,0.6g的干燥后的双咖啡酰基奎宁酸粉末定容至10ml水中，测定双咖啡酰基奎宁酸含量。 4.3洗脱流速的确定 取D101大孔树脂树脂干燥树脂5g,三份，医用乙醇浸泡充分溶胀，树脂体积约为30ml，分别湿法上柱(1.6×13.5cm)，水洗至无醇味。以2bv/h的流速上样，上样体积30ml，水洗39ml后，70,的乙醇溶液分别以2bv/h，3bv/h，4bv/h的流速洗脱树脂，洗脱体积为180ml。收集洗脱液，60?减压干燥，称取约1g左右的双咖啡酰基奎宁酸粉末定容至10ml水中，测定双咖啡酰基奎宁酸含量。 4.4洗脱剂用量的确定 取D101大孔树脂树脂干燥树脂5g，工业乙醇浸泡充分溶胀，树脂体积约为30ml，湿法上柱(1.6×13.5cm)，水洗至无醇味。按照2bv/h的流速上样，上样体积30ml，水洗1.3BV后，以70,的乙醇溶液2bv/h流速洗脱树脂柱，分段收集样品，每10min钟收集一次样品。测定双咖啡酰基奎宁酸含量。