HPLC测定通络痹痛丸中天麻素的含量

HPLC测定通络痹痛丸中天麻素的含量 HPLC测定通络痹痛丸中天麻素的含量 2011年3月第13卷第3期中国现代中药ModemChineseMedicineMar.201lv01.13No.3 HPLC测定通络痹痛丸中天麻素的含量 杨荣艳,秦玉侠 (1.四平市食品药品检验所,吉林四平136000; 2.吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部研究中心,吉林长春130118) [摘要]目的:建立HPLC测定通络痹痛丸中天麻素的含量.方法:色谱柱:DiamonsilC..(4.6mm× 250mm,5m),流动相:乙腈.3%磷酸溶液(1:99),流速:0.8mL?min,,检测波长:221nm,柱温:35?, 进样量:1O.结果:天麻素在5.0-251.6I.zg?mL内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.o2% (n=6),RSD=1.4%.结论:本方法简便,准确,重现性好,可用于通络痹痛丸的质量控制. [关键词]通络痹痛丸;天麻素;高效液相色;含量测定 通络痹痛丸是由威灵仙,杜仲,天麻等6味药 组成的中药复方制剂,具有祛风除湿,舒筋通络, 活血止痛之功效.用于治疗寒湿久痹引起的关节疼 痛,四肢麻木,屈伸不利,筋脉拘紧,疼痛等症. 该制剂为吉林省食品药品监督管理局批准的一类医 院制剂(批准文号:JLZL.ZB-0005.2006),原质量标 准未对其中的有效成分进行含量测定l】J.天麻为该 处方中主要成成分之一,为了控制该制剂的质量, 采用HPLC测定该制剂中天麻素的含量,该方法简 便,准确,专属性强,重现性好,能有效地控制该 制剂的质量. 1仪器与试剂 2010AHT高效液相色谱仪(岛津);紫外检测 器;CLASS—VP色谱工作站;UV-260可见一紫外分 光光度计(岛津).天麻素对照品(中国药品生物制 品检定所,批号:1108072200205,供含量测定用), 通络痹痛丸(吉林省公主岭国文医院制剂室,批号: 20100501),阴性对照为本室自制.所用试剂甲醇, 乙腈为色谱纯,磷酸为纯,水为超纯水. 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:DiamonsilC18(4.6mm×250mm, 5m),流动相:乙腈-0.3%磷酸(1:99),流速:0.8 mL?min,,检测波长:221nm,进样量:10L,柱 温:35?. 2.2对照品溶液的制备 精密称取在80?减压干燥1h的天麻素对照品 适量,加流动相制成5Otxg?mL的溶液,即得. 2.3供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品,剪碎,取6g,精密称 定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇25mL, 称定重量,超声提取45min,放冷,再称定重量, 用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤 液10mL,浓缩至近干,残渣加流动相溶解,转移 至10mL量瓶中,并用流动相稀释至刻度,摇匀, 滤过,取续滤液,即得. 2.4阴性对照溶液的制备 按处方组成比例制备缺天麻阴性制剂,再按供 试品溶液的制备方法,制备天麻阴性对照溶液. 2.5系统适用性试验 取对照品溶液,供试品溶液及阴性对照溶液各 1OL进行测定,记录色谱图,天麻素的保留时间 为15.058min,理论板数为13067;天麻素峰与相 邻峰的分离度大于1.5,峰形对称.阴性对照溶液无 干扰,见图1. 1 t/mint/min?min A.对照品溶液B.供试品溶液C.阴性对照液1.天麻素 图1通络痹痛丸及对照品HPLC图 2.6线性关系的考察 精密吸取对照品储备液(503.2Ixg?mL)各 [通讯作者]秦玉侠,E—mail:yuxiaemail@126.eom ? 36? 2011年3月第13卷第3期中国现代中药 ModemChineseMedicineMar.2011Vo1.13No.3 0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,5.0mL,分别置10mL 摇匀,按上述色谱 量瓶中,加流动相稀释至刻度, 条件进行测定,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐 标,进行线性回归,得回归方程Y=2.3490× 1O一5.3663×10.r=0.9999(n=6).结果表 明天麻素在5.0,251.6g?mL具有良好的线性 关系. 2.7精密度试验 取同一对照品溶液,在上述色谱条件下,连续 进样6次,记录峰面积,计算RSD=0.6%,表明 仪器精密度良好. 2.8稳定性试验 取供试品溶液(批号:20100501),按上述色谱 条件测定,分别于0,4,6,8,10,16h进样6次, 记录峰面积,计算RSD:1.7%,表明样品溶液在 16h内基本稳定. 2.9重复性试验 精密称取同一批号样品(批号:20100501)6 份,照"2.3"项下方法制备供试品溶液,按上述色 谱条件测定,计算含量,其平均含量为0.52mg/丸, RSD:1.5%. 2.10回收率试验 精密称取已知天麻素含量的样品(批号: 20100501)6份,每份约3g,平均丸重为 9.0016g,分别准确加人天麻素对照品储备液 (0.1986mg?mL)1mL,照供试品溶液的制备方 法制备,在上述色谱条件下进样分析,计算回收率, 见表1. 表1天麻素加样回收率试验结果 注:天麻素对照品加入量均为0.1986mg 2.11样品的含量测定 取20100501,20100508,201005113批样品,按供 试品溶液制备方法,每批样品制备两份,依法测定天麻 素的含量,结果分别为0.52,0.47,0.48mg/丸. 3讨论 3.1检测波长的选择 取天麻素对照品溶液,用uV260可见一紫外分 光光度计在200—300nm扫描,在221nm和270nm 处有最大吸收峰.色谱考察在221nm处天麻素吸收 系数大,灵敏度高,杂质干扰小,色谱峰形分离较 好.且天麻素在221nm处测定,其峰面积的灵敏度 约为270Flm的20倍,故选用221nm为测定波长. 3.2溶剂的选择 分别采用了50%,7O%甲醇和50%,70%的 乙醇作为提取溶剂进行比较,结果发现50%乙醇作 为提取溶剂提取相同的样品所得的天麻素含量较高 且峰形较好.故采用50%乙醇作为提取溶剂. 3.3提取方法的选择 比较了超声提取45rain和回流提取45min两种 方法,结果表明,超声提取45min和回流提取 45min所得天麻素含量相差不大,从方便,节能的 角度考虑,采用超声提取45min方法. 3.4流动相的选择 本文选用乙腈一0.3%磷酸溶液(1:99),甲醇一 磷酸盐溶液(0.1mol?L磷酸氢二钠溶液与 0.1mol?L磷酸氢二钾溶液等量混合)一水(10:3: 87)j,水【5和甲醇一水(7:93)J4种流动相分别进 行实验考察,结果选用乙腈一0.3%磷酸溶液(1: 99)为流动相时,天麻素对照品峰形对称,保留时 间适宜,理论板数为13067,供试品中天麻素与其相 邻峰的分离度大于1.5.并且流动相配制简单方便, 对色谱柱伤害性小,而且该方法简便,准确,专属眭 强,重现性好,能有效地控制该制剂的质量.磁l 参考文献 [1]吉林省食品药品监督管理局.医疗机构制剂(JI2J— ZB-0005—2006)[s]. [2]国家药典委员会.中国药典(一部)[s].北京:中国医药 科技出版社,2010:55. [3]白岩,杜丽爽,杜建.HPLC法测定天麻胶囊中天麻素的含 量[J].中国药事,2008,22(1):56-58. [4]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:化学工业 出版社.2005:444. [5]罗燕燕,逯梅.HPLC测定脑血舒通丸中天麻素的含量 [J].中国药学杂志,1994,29(11):684-685. [6]李德勋,陈桂,肖顺经,等.高效液相色谱法测定天麻中 天麻素的含量[J].中国药业,2006,15(17):31-32. (收稿日期2010—11—10) (下转第42页) ? 37? 2011年3月第13卷第3期中国现代中药ModernChineseMedicineMar.2011Vo1.13No.3 对H肉瘤细胞的生长均具有抑制作用,并且随给药 剂量的增加其抑制作用增强.虽然其对瘤重和抑瘤 率的影响不及环磷酰胺明显,但结合小鼠的一般状 况可以看出,阿魏菇多糖各给药组小鼠生长状况良 好,无明显不良反应,而环磷酰胺组小鼠一般情况 差,出现毛发稀疏,食欲下降,精神萎靡,消瘦等 现象,提示阿魏菇多糖在改善荷瘤小鼠体质状况, 减少不良反应方面,比环磷酰胺更具优势. 脾脏指数和胸腺指数是反映动物机体免疫功能 的最基本和最常规的指标,已被广泛用于评价机体 的整体免疫状态.本实验发现,阿魏菇多糖可增加 正常小鼠和荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数,从而增 强机体的体液免疫和细胞免疫功能,提高了机体的 整体免疫抗病能力.进一步的小鼠迟发型变态反应 (DTH)试验结果表明,阿魏菇多糖能显着增强 DNFB诱导的小鼠DTH的作用,提示可能通过激活 T细胞提高细胞免疫功能. 综上所述,阿魏菇多糖能一定程度地增强荷瘤 小鼠和正常小鼠的细胞免疫和体液免疫功能,提示 阿魏菇多糖的抗癌机制可能与其免疫激活作用有 关.匮 参考文献 [1]宋东伟,赵文军,吴雪萍,等.阿魏属植物化学成分及药 理活性研究进展[J].中成药,2005,27(3):329. [2]宋旭红,张月明,邓红.新疆阿魏蘑菇提取物体外抗肿瘤 实验研究[J].癌变?畸变?突变,2002,14(2):107-1】0. 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(收稿日期2010-09.21) StudyOiltheAnti-tumorandImmunityEffectofPleurotusFerulaePolysaccharide WANGJin—hui!,',WEIXiu—yan,LIGuo— yu,LIYan,HUANGJian,LUJin,LUXiao.qing,WANGYing (1.SchoolofPharmacy,ShiheziUniversity,Shihezi832002,China; 2.SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China; 3.KeyLaboratoryofPhytomedicineResources&ModernizationofTCM,Shihezi832002,China) [Abstract]Objective:Totestantitumoureffectsandimmunefunctionofpleurotassapiduspolysaccharidein mice.Methods:H22tumormodelsinmicewerebuihtostudyantitumoreffectofpleurotassapiduspolysaccharide.By delayedtypehypersensitivity(DTH)inducedbydinitrofluorobenzene(DNFB),theeffectofthecelluarimmunitywas evaluated.Results:PleurotassapiduspolysaccharidecouldinhibitthegrowthofH22,andthetumorgrowthinhibitory ratewasover30%:Pleurotassapiduspolysaccharidecouldsignificantlyincreasetheweightsofmouse'Sthymusand spleen,promotedelayedhypersensitivity(DTH).Conclusion:Pleurotassapiduspolysaccharideshowsobvious antitumoractivity.Alsoitcanimproveimmunologicalfunction. [Keywords]Pleurotassapiduspolysaccharide;Antitumor;Immunity (上接第37页) DeterminationofGastrodininTongluoBitongPillsbyHPLC rANGRong—yan.QINYu?xia (1.SipingCityInstitutefouFoodandDrugControl,Siping136000,China; 2.EngineeringResearchCenterofBioreactorandPharmaceuticalDevelopment,Ministry ofEducationJilin,AgriculturalUniversity,Changchun130118,China) [Abstract]Objective:ToestablishaHPLCmethodfordeterminationofGastrodininTongluobitongpills. Methods:TheDiamonsilC18column(4.6mnl× 250mlTl,5Ixm)wasused.Themobilephasewasacetonitrile一0.3% phosphoricacid(1:99).Theflowratewas0.8mL?min,.Thedetectionwavelengthwasat22 1nmandcolumn temperaturewas35?.Results:Thelinearrangeofgastrodinwas5.0, 251.6g?mL(r=0.9999).Theaverage recoveryratewas99.02%andRSD=1.3%(n=6).Conclusion:Thismethodissimple,accurateand reproductive. [Keywords]Tongluobitongpills;Gastrodin;HPLC;Determination ?42?