[doc格式] π在CagA阳性Hp感染胃黏膜组织中的表达

[doc格式] π在CagA阳性Hp感染胃黏膜组织中的达 π在CagA阳性Hp感染胃黏膜组织中的表 达 因.但也有研究表明ACE基因多态性与高血压 病或颈动脉内膜增厚无关.1992年Rigat创建的 方法Rigat法将部分DI型错定为DD型,据报道误 判率约10%4-6].故近来国内外改用三条引物法 作为ACE基因分型分析法来开展ACE基因多态性 与疾病的相关性研究.本研究中,我们设计了三条 引物,结果显示,所有被判为DD型的样本经该方法 扩增后误判率为3%,较Rigat法的准确率高.本研 究结果提示,ACE基因多态性不是海南汉族高血压 颈动脉粥样硬化的危险因素,TG,高血压,ApoA是 引起颈动脉粥样硬化的主要危险因素.虽然我们认 为ACE基因多态性不是海南汉族高血压及颈动脉 粥样硬化的危险因素,但由于高血压颈动脉粥样硬 化是多基因及多种环境因素共同作用的结果,故仍 有必要进行多中心,大样本的临床研究,为颈动脉粥 样硬化的一级预防提供新的依据. 参考文献: 『1]LahiriDK,SchnabelB.DNAisolationbyarapidmethodfromhu. 山东医药2009年第49卷第32期 manbloodsamples:EffectsofMgCl2,EDTA,storagetime,and temperatureonDNAyieldandquality[J].BiochemGenet,1993, 31(7-8):321-328. [2]姜玉,宋伟民.我国汉族人群血管紧张素转换酶基因多态性与原 发性高血压关系的Meta分析[J].环境与职业医学,2007,24 (1):25-31. [3]张春雨,赵世刚,牛广明,等.蒙古族原发性高血压人群与血管紧 张素转换酶ACEL/D基因及血管紧张素原AGTM235T基因多 态性的关系[J].中国优生与遗传杂志,2007,15(1):17—19. [4]RigatB,HubertC,CorvolP,eta1.PCRdetectionoftheinsertion/ deletionpolymorphismofthehumanangiotensinconvertingenzyme gene(DCP1)(dipeptidylcarboxypeptidase1)[J].NucleicAcids Res,1992,20(6):1433. [5]王谷亮,韩战营,朱鼎良,等.血管紧张素转化酶基因插入/缺失 多态性检测方法的研究[J].中华心血管病杂志,2001,29(4): 239.242. [6]江程澄,张楠华,王健.血管紧张素转化酶基因多态性与肺部疾 病的关系[J].国外医学:临床生物化学与检验学分册,2002,23 (1):25-27. (收稿日期:2009-03-08) GST一订在CagA阳性Hp感染胃黏膜 组织中的表达 高会斌,孙剑经,于永强,齐维娟,张晓丽,姚树坤 (1河北北方学院附属第一医院,河北张家口075000; 2河北北方学院实验中心;3北京中日友好医院) 摘要:目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染胃黏膜组织中谷胱甘肽s一转移酶叮r(GST一竹)的表达及与Hp细胞毒力 相关基因A(cagA)的关系.方法将198例慢性非萎缩性胃炎胃黏膜根据”C呼气实验及病理切片改良Giemsa 染色法分为Hp阴性组和阳性组,PCR扩增行CagA检测,免疫组化行GST一表达检测.结果Hp阳性及阴性组 中GST一耵阳性率分别为52.78%,67.78%,组间比较有显着差异(P<0.05);Hp阳性组中,Ca阳性和阴性者 GST一1T阳性率分别为38.18%,67.93%,亦有统计学差异(P<0.01),CagA阳性亚组中GST一1T阳性率与Hp阴性组 比较有显着差异(P<0.01).结论Hp感染可降低胃黏膜GST.叮r的表达,削弱GST-盯对胃黏膜损伤的保护作用, 而CagA因子可能是其因素之一. 关键词:螺杆菌,幽f-i;细胞毒力相关基因A;谷胱甘肽转移酶 中图分类号:R573.3文献标志码:B文章编号:1002-266X(2009)32-0036-03 幽门螺杆菌(Hp)是公认的慢性胃炎,消化性溃 疡的主要致病因素,其致病机制可能是通过产生多 种致病因子损伤胃黏膜.Hp细胞毒力相关基因 (CagA)蛋白是Hp导致胃黏膜上皮细胞毒性损伤的 重要因素,且Hp削弱谷胱甘肽s.转移酶耵 (GST.1T)在胃黏膜组织中的表达,致使胃黏膜损伤 基金项目:河北省卫生厅科学基金资助项目(01048). 36 和防御机制紊乱,导致胃黏膜损伤以致癌变的主要 原因J.但是,Hp对抗GST.耵表达及CagA与 GST.订的关系未见文献报道. 1资料与方法 1.1临床资料2004年3月一2005年1月我院消 化科就诊的主诉上消化道症状6个月以上,经B超 除外肝胆胰疾患,并除外1个月内服用抗生素,半个 山东医药2009年第49卷第32期 月内服用铋剂或制酸剂者.经”C呼气检测查Hp, 常规内镜检查及病理活检,Giemsa染色查Hp,将内 镜及病理确诊13C呼气检测与病理学检查Hp均阳 性或均阴性作为研究对象,共198例,男105例,女 93例,年龄17,82岁,平均49岁,按病理及”c呼 气检测结果分为Hp阳性和Hp阴性组,其中Hp阳 性组又分为CagA阳性和CagA阴性两个亚组. 1.2内镜及病理活检所有病例由有经验的内铕 医师行常规内镜检查并于病变明显处取活组织6 块,将其中5块放入100g/L甲醛中固定(24h),常 规梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,制作厚5 , 7m切片6张,裱贴在涂有蛋白甘油的载玻片 上,37?储存备用.另取一块留待检测cagA. 1.3Hp检测”C呼气检测法?J:受检者空腹6h 以上,收集0时气100ml备用,将C尿素酶试剂溶 人120ml橙汁服下,30min后准时收集待测气100 ml,将待测气与0时气分别连接BC红外线能谱仪检 测孔,自动检测,以DOB值大于2.5为阳性.改良 Giemsa法:组织切片脱蜡充分复水,入20g/LGiem- sa染液中染色30rain,洗去染液,脱水,透明,封片, 油镜观察. 1.4HE染色常规病理学检查组织切片脱蜡复 水,梯度乙醇脱水,水洗后人苏木素染液中染色20 min,10g/L盐酸分色,充分水洗后10g/L氨水蓝 化,水洗后人伊红染液中染色1min,梯度乙醇脱水, 透明封片. 1.5PCR法检测cagA取胃黏膜活检标本, 15000r/min离心15rain,吸弃上清,保留沉淀.沉 淀用生理盐水500l洗涤,离心,弃上清,共2次. 在沉淀中加入DNA提取液50l,振荡均匀后加入 1Og/L蛋白酶K21,55?水浴1h,100oC沸水浴 15rain,15000r/min离心10min.待扩样本数凡(n = 样本数+2),取PCR反应液nX15.5l,Taq酶n X1l混于离心管中,漩涡振荡器上振荡10s,按每 管16.51分装,每管加入石蜡油18l,盖上管盖 备用.先将阴性对照3.5l加入对应的反应管中, 最后取出阳性对照,5000r/min离心2S,取出置于 热循环仪上.扩增按93?45s55?45s一72? 60s,循环35次,最后72?延伸5rain.在PCR扩 增后的反应管中加入上样缓冲液41,充分混匀后 取下层蓝色液体l5l,经含EB染色剂的20g/L琼 脂凝胶电泳15—20min,至蓝色指示剂离心样孔 1.5cm时,结束电泳.将胶置于紫外检测分析仪上 观察,若在350bp处出现橙黄色条带(与阳性对照 处于同一位置),则为Hp—CagA基因阳性. 1.6免疫组化检测切片脱蜡复水,以30L过 氧化氢灭活内源性酶,1geL胰蛋白酶抗原修复,滴 加正常山羊血清封闭液,滴加一抗,4clc过夜,滴加 生物素化二抗20,37cC20min,ABC复合物20— 3720min,以上各步均以PBS充分洗涤,DAB显 色,苏木素轻度复染,脱水,透明,封片,以PBS代替 一 抗作为阴性对照,高倍镜下观察.光镜下(× 400)随机选取10个视野,以平均每个视野观察到 GST.叮T阳性胃黏膜上皮细胞数>5个为GST.1T阳 性,反之则为GST一竹阴性.GST.霄阳性表达组织中 胃黏膜上皮细胞浆内棕褐色物质沉积,胞核内也可 见棕色物质沉积. 1.7统计学方法用SPSS10.0软件包进行统计 分析,组间比较采用X检验,检验水准=0.05. 2结果 2.1阳性标准改良Giemsa染色后Hp为红色,呈 “S”状,分布在胃小凹和腺腔中,与黏液混杂存在,1 个视野(×400)>2条为Hp阳性;免疫组化染色 后,光镜下观察(X400),随机选取10个视野,以平 均每个视野观察到GST一叮r阳性胃黏膜上皮细胞数 >5个为GST一阳性.GST一阳性表达组织中胃黏 膜上皮细胞浆内棕褐色物质沉积,胞核内也可见棕 色物质沉积. 2.2GST一1T阳性率比较Hp阳性组108例,Hp阴 性组90例,GST.叮T阳性率分别为52.78%(57/108) 和67.78%(61/90),组间比较有统计学差异(P< 0.05);GST.叮r着色部位主要分布在胞浆内,少数分 布在刷状缘,胞核中未见GST一盯表达,Hp阳性及阴 性组GST.叮T表达分布部位无明显差异.Hp阳性组 又根据CagA结果分为CagA阳性组55例,CagA阴 性组53例,GST.阳性率分别为38.18%(21/55) 和67.93%(36/53),组间比较有统计学差异(P< 0.01).GST.钉阳性率在CagA阳性亚组(38.18%) 与Hp阴性组(67.78%)比较有显着差异(P< 0.01). 3讨论 GST一订在清除体内毒性产物,保护细胞稳定性 及调理细胞生长,分化中起重要作用,其在细胞内设 置两层屏障,一层位于溶酶体内作为外围屏障,另一 层位于细胞核周边,共同解除来自胞浆的细胞毒性 物质的损伤作用,保护细胞.在慢性胃炎阶段,Hp 感染可通过CagA拮抗GST.耵对致毒物质的解毒作 用,而导致胃黏膜组织长期暴露于细胞毒性产物环 境中,引起胃黏膜上皮细胞损伤.我们研究了慢性 胃炎胃黏膜组织中以GST.耵为代表的人体解毒物 37 质与Hp致毒作用问的相互关系,结果进一步表明, Hp感染可降低胃黏膜GST一百的表达,削弱GST-”IT 对胃黏膜损伤的保护作用,而Ca因子可能是Hp 降低胃黏膜GST一”iT表达的因素之一. 参考文献: [1]刘长江,李龙,高健青,等.”碳一尿素呼气试验评价尿素酶试验 诊断幽门螺杆菌的价值[J].江苏医药[J],2007,23(8):794— 795 [2]MaaroosHI,VorobjovaT,SipponenP,eta1.An18-yearfollow-up studyofchronicgastritisandHelicobacterpyloriassosiationofCagA positivewithdevelopmentofatrophyandactivityofgastritis[J]. ScandJGastroenterol,1999,34(9):864-869. 山东医药2009年第49卷第32期 [3]SuerbaumS,MichettiP.Helicobacterpyloriinfection[J].NEn JMed,2002,347(15):1175—1186. [4]VerhulstML,vanOijenAH,RoelofsHM,eta1.Antra[glutathione concentrationandglutathioneS-transferaseactivityinpatientswith andwithoutHelicobacterpylon[J].DigDisSci,2000;45(3): 629-632. [5]高会斌,齐维娟,魏阿平,等.GST-叮r在胃腺癌和癌周组织中的表 达[J].山东医药,2007,47(27):24-26. [6]高会斌,齐维娟,予永强,等.谷胱甘肽s一转移酶叮r在胃黏膜病 变组织中的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系[J].中日友好 医院,2008,22(5):273~75. (收稿日期:2009-05—15) 肝衰竭合并侵袭性肺曲霉病临床分析 徐庆年,李丹,丁贤,陈良 (复旦大学附属公共卫生临床中心,上海201508) 摘要:目的探讨肝衰竭患者合并侵袭性肺曲霉病(IPA)的临床特点及治疗对策.方法对我中心341例肝 功能衰竭合并肺部感染患者的临床资料进行回顾性分析.结果组织病理诊断明确的IPA11例,临床诊断病例3 例.肺部IPA主要诱因为长期应用广谱抗生素和糖皮质激素;临床症状和影像学变化非特异性和不典型;及时诊 断并及时使用卡泊芬净治疗,可以减少IPA患者的病死率.结论对肝衰竭患者需要提高早期诊断,治疗IPA的 意识. 关键词:肝功能衰竭;交叉感染;曲霉菌病;诱发因素;卡?白芬净 中图分类号:R575.3文献标志码:B文章编号:1002-266X(2009)32-0038-02 近年来,随着光谱抗生素,糖皮质激素,免疫抑 制剂等应用,曲霉菌引起的感染呈上升趋势.严重 肝病虽存在高度感染的危险?J,但对于严重肝病 合并侵袭性肺曲霉病(IPA)的报道不多.因此,为 了提高对本病的诊治水平,现将我中心该病患者的 临床资料进行回顾性分析,报告如下. 1资料与方法 1.1临床资料2005年11月,2007年9月我中 心住院的341例肝功能衰竭并肺部感染患者.肝衰 竭的诊断按2006年制定的《肝衰竭诊疗指南》中的 诊断标准J.IPA参考2006年《侵袭性肺部真菌感 染的诊断标准与治疗原则(草案)》』. 1.2研究方法对所有患者进行包括病史,医学检 验,影像学表现,人口学特征,住院时间,诱发因素, 临床特征,治疗方法及转归的调查记录.疗效判定 参考卫生部《抗菌药物临床研究指导原则》,医师根 据患者情况改善,临床症状消失和实验室指标好转 等综合考虑. 38 1.3统计学方法采用SPSS13.0统计分析软件 进行统计学分析.计量资料数据采用?s表示. 以P?0.05为有统计学差异. 2结果 2.1一般情况分析341住院的肝衰竭患者资料, 有20位患者被考虑有IPA可能.其中7例在人院 时怀疑有IPA.在诊断IPA之前,所有20患者均应 用广谱抗生素,10例应用皮质激素,1例因经济原因 停止治疗,2例不愿意进行侵袭性检查但愿意进行 抗真菌治疗;进行纤维支气管镜检查与肺泡灌洗 (BAL)6例,其中经支气管肺活检(TBLB)2例;肺活 检14例,其中TBLB8例,经皮穿刺肺活检(PPLB)6 例.5例BAL培养曲霉阳性,但支气管内活检无明 显异常;14例肺活检者确诊曲霉阳性11例,其他3 例无曲霉菌感染证据,分别为标本培养屎肠球菌和 铜绿假单胞菌,组织学和PCR证实为巨细胞病毒感 染.B.D.葡聚糖检测(G试验)5例,半乳甘露聚糖 实验(GM)4例(在其他检测中心进行).综上所