氯仿-甲醇提取法

氯仿-甲醇提取法 索氏抽提法只能提取游离态的脂肪,而对脂蛋白、磷脂等结合态的脂类则不能被完全提 取出来,酸水解法又会使磷脂水解而损失.而在一定水分存在下,极性的甲醇与非极性的氯仿 混合液(简称CM混合液)却能有效地提取结合态脂类.本法适合于含结合态脂类比较高,特别是磷脂含量高的样品,如鲜鱼\贝类\肉\禽\蛋等,对于含水量高的试样更为有效. 1. 测定原理 将试样分散于氯仿-甲醇混合液中,在水浴中轻微沸腾,氯仿-甲醇及样品中一定的水分形 成提取脂类的溶剂,在使样品中组织中结合态脂类游离出来的同时与磷脂等极性脂类的亲和 性增大,从而有效地提取出全部脂类,经过滤除出非脂成分,回收溶剂,对残留脂类用石油醚提 取,蒸去石油醚后定量. 2. 仪器 (1) 具塞离心管. (2) 离心机:3000转/分. (3) 布氏漏斗:11G-3,过滤板直径40毫米,容量60~100毫升. (4) 具塞三角瓶. 3. 试剂 (1) 氯仿:97%(体积分数)以上. (2) 甲醇:96%(体积分数)以上. (3) 氯仿-甲醇混合液:按2:1体积比混合. (4) 石油醚. (5) 无水硫酸钠:特级,在120~135摄氏度,干燥1~2小时. 4. 测定方法 (1)提取:准确称取样品5克,放入200毫升具塞三角瓶中(高水分食品可加适量硅藻土使其分散)加入60毫升氯仿-甲醇混合液(对干燥食品可加入2~3毫升水).连接布氏漏斗,于60度水浴中,从微沸开始计时提取1小时. (2)回收溶剂:提取结束后,取下三角瓶,用布氏漏斗过滤,滤液用另一具塞三角瓶收集,用氯仿-甲醇混合液洗涤烧瓶\滤器及滤器中的试样残渣,洗涤液并入滤液中,置于65~70度水浴中回收溶剂,至三角瓶内物料显浓稠态,但不能使其干涸,冷却。 (3)萃取、定量：用移液管加入25ml乙醚，再加入15克无水硫酸钠，立刻加塞振荡10分钟，将醚层移入具塞 离心管中，以3000r/min离心5 min进行分离。用移液管迅速吸取离心管中澄清的醚层10ml，于以衡重的称量瓶内，蒸发去除石油醚后，于100~105摄氏度烘箱中烘至衡重（约30分钟）。 5． 结果计算 w=(m2-m1)*2.5/m*100% 式中：w----脂类质量分数，%； m----试样质量,g ; m2----称量瓶与脂类质量，g ; m1----称量瓶质量，g ; 2.5---- 从25ml乙醇中取10ml进行干燥，故乘以系数2.5。 6． 说明 （1）提取结束后，用玻璃过滤器过滤再用溶剂洗涤烧瓶，每次5ml洗3次，然后用30ml洗涤残渣及滤器，洗涤残渣时可用玻璃棒一边搅拌试样残渣，一边用溶剂洗涤。 溶剂回收至残留物尚具有一定的流动性，不能完全干涸，否则脂类难以溶解于石油醚中，从 而使测定结果偏低。所以，最好在残留有适量水分时停止蒸发。 （3）在进行萃取时，无水硫酸钠必须在石油醚之后加入以免影响石油醚对脂类的溶解，其 加入量可根据残留物中的水分含量来确定，一般为5~15g.