硫酸皮肤素—一种新型的抗血栓药

硫酸皮肤素—一种新型的抗血栓药 硫酸皮肤素—一种新型的抗血栓药 敢反映,托妊拓 国外医学棺血及血j葭学分册1992年第【5告堡塑 0 一)一7 硫酸皮肤素——一种新型的抗血栓药 中国压学科学院血液学研究所 孙红综述李家增审校 J,..一R7j 摘要硫酸皮肤素(dermatansu】fate,DS)是近几年国外研究目盏重视的一种新的抗血桂药.它 是一爰然的糖胺聚糖,广泛分布干动物组织中,其舟子量为3O000左右,Ds的抗血挂作用特点不 同干肝素.它不依赖血浆抗凝血酶I(AT—I).而是通过肝素辅固子I(HeparinCofacEorI?HC?I) 催化抑制凝血酶动物模型已.Ds能明显阻止静脉血栓形成,而且j巾制已存在血拴上的纤维蛋 白增长,诱导血管内虚细胞释放tPA发挥纤溶作用,押制腱原谤导的血小板聚集.Ds在体内不被代 谢转化而以原形由屎排出,口服可被嗳牧.几乎无出血剧作用,因 此,Ds是一很育前途的抗桂药. 众所周知,肝素是一有效的防治静脉血栓的药 物,由于临床使用伴有明显的出血副作用而受到一 定的限制,因此寻找新的既有效又安垒的抗血栓药 是人们所关注的问.多年来,已发现了一些肝素转 化体如低分子量肝素(LMWH)和ATI高亲和性肝 紊等,除此之外,国纠-研究近几年来已延伸到糖胺聚 糖(GAG),尤其是硫酸皮肤紊(Ds)的抗血栓活性的 研究日益受到重视,目前国际上所用的Ds药物多 由意大利米兰Mediolanum药厂提供,为一种猪肠粘 膜Ds制荆(MF7fJ1),国外研究表明,外源性DS对 止血功能有影响.DS的抗凝血酶作用途径是通过肝 素辅因子I(Heparin.CofactorI.HC-I)而不是抗 凝血酶?Ds能抑制胶原诱导的血小板聚集;动物 模型表明.Ds有明显的抗血栓作用}应用犬鼠下肢 灌流显示DS可以促使内皮细胞释敲纤溶酶原激活 刺(tPA)志愿者静脉注射或口服DS表明,DS在体 内不被代谢转化而以原形由尿排出,r7服可被吸收, 几乎无出血副作用,因此硫酸皮肤素(Ds)被认为是 一 很有前途的.新型的抗血栓药. 一 ,DS的理化性质 Ds是一天然的糖胺聚糖.广泛分布于动物组织 中,它与乙酰肝素(Hs)一样,是血管壁外层蛋白多 糖的主要糖胺聚糖成分.正用于临床的DS如 MFT0l经HPLC测得其分子量范围为】5000,45 0oD,平均分子量为35700,经PAGE测得其分子量 范围为80.0,45000,平均分子量为28000. DS制剂可静脉注射.肌肉注射及皮下注射. 最近Dawes报遭.口服Ds能被吸收.在体内不被代 谢转化而以原形经肾脏排出”. DS的盐溶液比较稳定,在室温下放置至少2 年( 二,DS的生物学特性 {--)抗撬作用与未缀分的肝紊(Unfraetion Heparin,简称UF-H)相比较,DS象HS一样具有较 弱的抗凝作用川,OfosuL”j认为这是因为HS和DS与 UF-H不一样,它们不能抑制凝血酶原的激活,而是 通过催化抑制血浆中形成的凝血酶来表达它们的抗 凝作用,而且两者艟化抑帝4凝血酶作用弱于UF—H DS的抗凝作用是uF—H的I140倍.给正常凡静 脉注射DS(1.5mg/kg)后,血液凝固时间略有延长. 5分钟时达最大值,维持3小时左右5分钟时. A从32秒延长到5O秒.TT从I7秒延长到 138秒.肌肉注射和皮下注射DS(】.5mg/kg)后,并 不延长APTT和TT【. Ryn—McKenna报道”,DS几乎没有抗xa活性. UF.H和LMWH厦HS均有抗Xa活性Scu]ly等” 通过Hept~t试验观察,发现DS与不同分子量的肝 素有明显的抗xa协同作用,尤其与LMWH协同作 用更显着.同时,Walenga也报道了UF?H和DS的 抗凝活性的协同作用 Ofosn等认为,尽管HS和DS对血液凝固的影 响较弱,但它们都是凝血酶生成的强有力的抑制剂 (二)抗血栓作甩I对血栓形成的影响动物 实验表明,DS是一有效的抗血栓药?”.它ff]的 抗血栓特点表现在通过激恬肝幕辅圈子I[HC?I一 催化抑制凝血酶”,邵通过HC?I加强对血装 中凝血酶的灭活及抑制凝血酶的生成,而几乎没有 抗xa的作用. Ofosn认为,DS的抗血栓特性与它的硫酸化程 度有关J.硫酸墓被认为是GAG催化抑制凝血酶 的一个重要基固.增加硫酸基.能改善DS催化抑制 凝血酶的能力,且能改善它抑制血浆中凝血酶原激 活的能力,因此,增加硫酸基能提高DS的抗血栓作 用 ? 8? 许多资料表明,Ds对不同的实验动物血栓模型 均有不同程度的抗血栓作用,且在不延长APTT, 研时.就能阻止静脉血栓形成.”„in]ot985年 Buchanan等用WcssMr型血栓模型证实.5Q0us/kg 的Ds能有效地阻止组织因子引起的兔静脉血栓形 成,抑制率达95?Hoppenstcndt等使用凝血酶原复 合物(PCC)和蝰蛇毒混合物(Rvv)作为改栓荆造成 兔血栓模型证明500~g/kg的DS能有效地阻止兔 静脉血栓形成,抑1ljj率为50,60?Ryn—McKen- rla证明,DS能有效地抑制组织因子,凝血酶因子xa 诱导的实验性动物静脉血栓形成0,最近他的研究 进一步表明.DS在阻止由凝血酶B『起的而不是xa 和组织因子引起的血栓形成比UF—H更有效] 2.纤溶作用及纤维蛋白抑制作用朱广瑾等 1988年报道”],应用太鼠下肢血管睐灌流模型,观 察DS对纤维蛋白溶解系统的作用.结果表明.0.2 , 0.4mg/mlDS能诱导大鼠肢体血管壁释放纤溶酶 原活化煮(PA),PA释放与DS浓度呈正比关系.如 果DS浓度继续增加,PA释放效应便逐渐减小.至 0.8mg/ml时接近基础水平.经SDS一聚丙烯酰胺凝 胶电泳和呈干维蛋白自显影分析证实,DS诱导的是组 织型纤溶酶原活化紊(tPA),其分子量为67000 Paques和Andrade—Oordou曾报遭,体外实验中 用DS与tPA标准{戎或对照灌流藏(给药前.可提供 基础水平的PA活性)一起温育,DS并不加强由标 准tPA所诱导的纤溶作用a对给药前的灌流藏也不 起任何作用,因此,朱广瑾认为,DS激活纤溶作用是 通过直接激活血管壁内皮细胞释放tPA而实现 的[“. Mussoni等采用大鼠下肢灌流模型也已证实 了DS能刺激血管内皮细胞释放tPA Ryn.McKennat989年报遭.采用凝血酶造成 的实验性兔颈静脉血栓模型.在这基础上,给兔注射 209Ci?I.标记的兔纤维蛋白原(Img/m[),并连续 输注UF-H或Ds或NS.4小时后取出血栓,测血栓 中纤维蛋白原及循环血中纤维蛋白原的放射性比 例,结果发现,UF—H和DS明显抑制血栓上的”1? 纤维蛋白增长,给UF—H30抗凝血酶u/kg/h剜量 时.纤维蛋白增长抑制率约50,增加剂量设显示 更进一步的抑彻作用,给DS30抗凝血酶u/ks/h剂 量时,纤维蛋白增长抑制率约70,增加剂量也没 显示进一步的抑1ljj作用.实验表明,相同的抗凝血酶 荆量.Ds抑1ljj纤维蛋白增长比肝紊更有效因此t Ryn.McKenna认为,在治疗血栓如阻止血栓上的呈干 维蛋白增长比防止血拴形成方面,Ds显得更有效 (兰)出?馁向Fernandez等?1980年用兔比较 国外医学输血及血藏学分册1992年革l5卷弟l期 了UF.H和DS的出血情况.UF—H和DS的最大抗 血栓剂量分别是70~S/kS和560~g/kg,UF—H荆量增 加20倍.可引起8倍的出血,增加 和80倍.分别引起 l3倍和85倍的出血.而DS的剂量增加20,d0倍 并不引起出血的增加,增加80倍只引起7倍的出 血,结果表明.DS的出血/抗血栓比倒小于UF—H,也 就是说,在抗血栓作用相同的荆量时,DS的出血反 应比uF—H小. or0su等通过动物实验也证明了DS的出血反 应很小,甚至比LMWH还小J. 但是,UF—H和DS的出血反应显着不同并不是 因为ATI和HC—l的差别,而是与血小板有关 (四)对?小扳的影响HopI~nsteadt认为. UF.H治疗期间的一些主要并发症是困血小l板功能 改变所弓『起的,临床上表现为出血,血小板减步和动 脉血栓形成.1989年他比较了DS和UF—H对血小 板功能的影响.结果发现.251~g/mlDS引起很弱的 血小板聚集(<5)而UF—H可引起较强的血小板 聚集(13士11)}10~g/ml的DS对肾上腺紊,胶原, ADP和花生四烯酸引起的血小板聚集没有增强作 用,而1OVs/ml的UF.H对这些致聚荆有不同程度 的增强效应(约t8+20). Basic.Mici~通过对垒血和PRP中的血小板计 数,血小板聚集,枯附及扩展性观察DS对血小板功 能的影响果表明,1O0vg/ml的DS不引起血小 板聚集,也不影响肾上腺紊,胶原引起的血小板聚集 反应.但观察到血小板扩展作用披减弱,血小板粘附 轻度下降及血小板计数减少的现象. Fernandez等1986年报道【.J,使用新西兰白免 做动物实验,给260ovg/kg的UF-H(这个荆量出血 增加13倍),0.5,1.25峙lml胶原引起的血小板聚 集明显下降,给5200~s/kg(出血增加35倍)t完全 抑制0.5,1.25~tg/ml胶原引起的血小板聚集,给 20ooovg/kgOS(没有出血反应),不抑制胶原弓『起的 血小板聚集,给40O00pg/kg的DS(出血反应增加7 倍),轻度的抑制胶原引起的血小板聚集.当胶原蔽 度提高时(>2.5g/m1),UF?H和DS均无血小板抑 制作用.Fernandez认为,UF-H和DS的出血反应 与血小板抑制作用有关,而与ATI和HC-I无关t 因为l30g/kg的UF—H和40OOO~g/kg的DS有 类似的出血反应他推测可能通过抑制Va或非特 异性怍用于血小板抑制血小板表面凝血酶的产生 (五)对?管壁的保护惟用Blaychman把实验 兔分为三组.第一组仅给UF-H,第二组仅给DS,第 三组给UF?H和DS.可见,第一组动物加速.l?白 蛋白的清除.并延长微血管出血时间I一白蛋白 国外医学输血盈血藏学分册1999年第l5眷第l期 清除率从373.9分缩短到204.6分,微血蕾出血时 阗从83.4秒延长到226.0秒}第二组动牺-l-白 蛋白清除率延长到433分I第三组动物-”„I一白蛋 白清除率芷常,徽血蕾出血时间正常.由此可见,Ds 具有保护血管壁的作用-并能使血浆白蛋白通透性 下降. 三,结语 综上.DS通过HC-l催化抑翻凝血酶,阻止静 参考 E1]Do=F.Bloodi989I74ji577 [2]mwJ.ThrombHaemcsti989I62{945 :3]0f?uFAAnnNYAcadSei1999?556|123 [|]F~nand电F.BTitishJHaematoJ1996;64:909 [5]R一McKenn~JV.AnnNYAcadSci1989;556,304 [6]uLIyMF.ThrombHaemost1989;62{511 [7]wal~.IMThrornblqaern~t1989;62{517 ]0f?uFAsema”thumbHaemm6ti988I14{9 [9]McK~naVR.Tt~ombHaemost1987I5817 ? 9? 脉血栓形成,抑制已存在血栓上的奸维蛋白增长,诱 导血警内皮细胞释放$-PA-增加钎涪作用,与uF?H 厦LMWH之间具有抗凝活性的协同作用-出血副 作用小.因此,Ds棱认为是一种新型的,不同干uF— H的,有效的抗血栓药,有可能会成为临床上有效的 抗血栓药.但Ds的抗血挂机理尚束阐明-例如在 体内作用的主要部位还不清,是内皮细胞表面还是 在血液中+或两者兼有还知道,有待进一步探索和 研究. 文献 口1]MertonRE.ThrombHaern,~l”i987I58:839 [10]M嚣jA.Haemostasis1997I17:329 [19]HoplgenstcadlD.ThrobHaerT瞄l1989~62l905 [i4]朱广瑾.中国医学科学院1989:l0:9 [15]PaquEP,ThtombResL996{42l79 [16]Andfads-GordonP.Bd-cm1996{254033 [17]MussoniLAnnNYACadseli989:556t465 [18]Hoppenst~adlD.ThrombHae~tj989I62|407 [19]B丑sk_MickM.”~hrombHaemcst1999;62j521 , 凝血酶一抗凝血酶?复合物 ,/的研究及临床意义 皖南医学院盟垦堡综述文尚武唐甘超审校R,ff 摘要在血寝凝固与杭凝过程申.凝血酶与抗凝血酶l(ATI)毗一定雌尔 浓度结台:生成酰 基若侪键结合的凝血醇?抗凝血酶l复合物(Thrembin-antithrombin,下AT复台物).设复合物的生成 量与生成率可能是体内抗凝,凝血物质活化的标志.目前常啦EL1SA法检测血浆TAT复合物音 量+其敏感性爱特异性均较好.请项指标有益干检测血栓形成,对抗 凝爰溶桂疗数观察具甫重要作 用,对DIC的诊断较准确-且恶性肿瘤苷患者血浆TAT复告物含量均 显着增高. TAT复合物系血液凝固与抗凝的矛盾产物.体 内TAT复合物的演变过程与出凝血机制密切相关- 渡项指标可望成为某些出凝血疾病的敏感参数.本 文就近年该方面的研究简述如下. 一 ,TAT复合物的形成机理 在生理或病理状态下-凝血酶原分子中的肽链 嵌次棱切断-或多或少产生由二硫键连接的A链及 B链,即凝血酶.其中A链的N端发生水解,变成 B_凝血酶和Y一凝血酵,最终失去凝血活性.而ATI 却另辟途径以1t1摩尔与凝血蘸结合,生成酰基若 价健结合的TAT复合物,使凝血酶失活. Olson辱提出肝衰可隧通过,系列的反应而加 速A下I与凝血酶结台.该过程主要分二步,先形成 一 种ATI一肝索复合物,后形成ATI-肝索-凝血酶 三元复合物,紧接着由于肝素解离而形成不可逆的 TAT复合物.Timothy等进一步发现+肝素与ATI 表面的结合残基结台,弓【起AT1分子异构化-一旦 反应完毕,AT1分子内部凝血酶结台基团充分显 露州-当与凝血酶结时,其分子内精氪酸(393)丝 氮酸(394)结合基先棱凝血酶水解.然后精氨酸残基 与凝血酶的活性丝宴【酸残基发生酰化反应+生成酰 基共价键TAT复合物 TAT复合钳的形成受ATI,凝血酶的摩尔浓 度影响,而不依赣其绝对浓度J,在一定范围内凝血 酶活性与NaC1浓度成正比+当pH值变化时,凝血