卵胞浆内单精子显微注射所得胚胎冻融及移植后妊娠结局比较

卵胞浆内单精子显微注射所得胚胎冻融及移植后妊娠结局比较 卵胞浆内单精子显微注射所得胚胎冻融及 移植后妊娠结局比较 实用医院临床杂志2010年1月第7卷第1期4l 不同来源精子行体外受精/卵胞浆内单精子显微注射 所得胚胎冻融及移植后妊娠结局比较 贺贞,朱明辉,杨丹 (成都中医药大学第二临床医学院第二附属医院生殖中心,四川成都610041) 【摘要】目的分析体外受精(IVF)与不同来源精子卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)所得胚胎在冻融及移植后的 情况.选择2007年3月至2009年8月我院生殖中心进行复制的107例患者共131个冻融胚胎移植(FET)周期, 据FET胚胎来源分为IVF组,ICSI组;ICSI组又分射出精子组(A组),附睾精子组(B组),睾丸精子组(c组).结果 IVF组与ICSI组胚胎存活率,移植胚胎占解冻胚胎比例,平均移植胚胎数,临床妊娠率,胚胎种植率,流产率比较,差异均 无显着性意义(P>0.05);A,B,C组胚胎存活率,移植胚胎占解冻胚胎比例,平均移植胚胎数,胚胎种植率比较,差异均 无显着性意义(P>0.05);B,C组临床妊娠率比较,差异无显着性意义(P>0.05),但均明显高于A组(P<0.05);A 组患者62.5%存在女方不孕因素,比例明显高于B,C组(P<0.05).结论IVF和不同来源精子行ICSI所得的优质胚 ,女方同时存在不孕因素胎经受冷冻解冻的能力没有差异;ICSI所得胚胎行FET时 是影响妊娠率的因素之一. 【关键词】卵胞浆内单精子显微注射;胚胎移植;体外受精;冻融;精子 【中图分类号】R321.33;R715【文献标识码】A【文章编号】1672-6170(2010)O1-0041-03 Acomparisonofpost?thawresultsbetweenembryosarisingfromin—-vitrofertilizationor intracytoplasmicsperminjectionusingsurgicallyretrievedorejaculatedspermatozoaHE Zhen,ZHU一 hui,YANGDan(ThesecondaffiliatedhospitalofChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine, Chengdu610041,China) 【Abstract】0bjectiveTostudytheeffectoffreeze— thawonembryosderivedfromin-vitrofertilizationorintracytoplas— micsperminjection(ICSI)usingsurgicallyretrievedandejaculatedspermatozoa.MethodsAnalysiswasmadeon131FETcy— cles.Accordingtotheembryos'origin,the131FETcyclesweredividedintoIVFgroupandICSIgroup;thelatterwasdivided intoejaculatedspermgroup(Agroup),epididymalspermatozoagroup(Bgroup).testicularspermatozoagroup(Cgroup).Re- suitsNodifferencewasfoundbetweentheIVFandICSIgroupsintermsofpost— thawsurvivalrate,theproportionoftransfer embryostothawedembryos.averagenumberoftransferembryo,pregnancyrate,implantationrateandmiscarriagerate.No differencewasfoundamongA,BandCgroupsintermsofpost?thawsurvivalrate,theproportionoftransferembryostothawed embryos,averagenumberoftransferembryoandimplantationrate.ThepregnancyrateofAgroupwaslowerthanthatofBandC groups.TheproportionoffemalesterilityfactorsofAgroupwashighersignificantlythanthatofBandCgroups.Conclusions CleavageembryosarisingfromIVFcyclesandICSIcyclesusingejaculatedspermatozoa,testicularandepididymalspermatozoa canequallyendurefrozenandthawprocess.Theexistenceoffemalesterilityfactorwasoneofthefactorswhichwouldaffectthe pregnancyrateofFETwithembryosderivedfromintracytoplasmicsperminjection(ICSI)usingsurgicallyretrievedandejaeula- tedspermatozoa. 【Keywords】ICSI;FET;In—vitrofertilization;Freeze 卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmicsperm injection,ICSI)的出现,基本解决了常规体外受精一胚胎 移植(in—vitrofertilization.embryotransfer,IVF—ET)中卵 子不受精的问题,为严重少,弱,畸形精子症和无精子症 的男性不育患者带来了福音.研究表明,手术从附睾或 睾丸获得的精子行ICSI可得到与射出精子ICSI相同的 受精率和妊娠率?J.将新鲜周期剩余的优质胚胎冷 冻保存,在新鲜周期未获得活产胎儿的情况下行冻融胚 胎移植(FET),可以提高单次超促排卵的妊娠机率,为 患者提供更多的妊娠机会,避免再次超促排卵带来的身 体创伤,精神压力和经济负担_3J.多余的胚胎分管冷 冻保存,在FET时可有选择地解冻一定数量的胚胎,避 免了胚胎浪费,减少了多胎妊娠.对于卵巢过度刺激综 合征(ovarianhyperstimulationsyndrome,OHSS)高危患 者,可以将胚胎全部冷冻保存,减少OHSS的发生. 胚胎冷冻和解冻过程对胚胎可能有损伤,本研究对 IVF和不同精子来源ICSI发育而来的胚胎,在经受冷 冻解冻能力及解冻移植后妊娠结局进行了分析. 1资料与方法 1.1一般资料选择2007年3月至2009年8月在我 42 院生殖中心进行FET的107例患者,共131个FET周 期.患者年龄22,44岁,平均年龄(30.264-3.84)岁. 根据胚胎的来源,131个FET周期分为体外受精IVF组 65个周期,ICSI组66个周期.ICSI组又分为射出精子 组(A组)40个周期,附睾精子组(B组)9个周期和睾 丸精子组(C组)l7个周期. 1.2研究方法及观察指标107例患者均长方案超促 排卵后取卵,实验室按常规行IVF和ICSI操作.?附 睾或睾丸手术取精:采取精索神经阻滞麻醉.对非梗阻 性无精子症,选择睾丸活检取精(testicularspermaspira— tion,TESA),即直接取出睾丸组织找精子;对梗阻性无 精子症,首选经皮附睾精子抽吸术(percutaneousepi— didymalspermaspiration,PESA),即用1O一20ml注射器 ,7号头皮输液针,经皮刺入附睾负压抽吸,抽吸 连接5 液中无精子或无活动精子则重复穿刺或行对侧附睾穿 刺.如仍无精子,则行睾丸活检取精.取出标本放入装 有HTF缓冲液的培养皿中,在倒置显微镜下寻找精子, 选择活动的精子行ICSI.?取卵后第3天用于移植或 冷冻的胚胎要求:卵裂球?6—8细胞,评分I>2.5分;如 胚胎达不到上述,选择卵裂球4—5细胞,?3分的 胚胎.胚胎评分方法为:正常形态大小的裂殖细胞,胞 质无颗粒现象,碎片<5%(4分);轻微的大小形态不均 的卵裂球,胞质可有颗粒现象,碎片6%一20%(3分); 大小不均一的卵裂球,胞质可有颗粒现象,碎片21%, 50%(2分);大小严重不均的卵裂球,碎片>50%(1 分);退化,完全是碎片(0分).冷冻方法为慢速冷冻 法.距新鲜取卵周期至少3个月经周期后行FET.解 冻方法采用快速解冻法.实验室和临床的操作者相同, 操作步骤一致,采用相同的试剂和移植管.复苏胚胎中 有半数及以上卵裂球存活(即形态完整,胞质清晰)可 判断为存活胚胎.?FET前子宫内膜的准备:月经周期 规则,B超监测有排卵且内膜厚度?8mm(A型)的患 者用自然周期(naturalycle,NC)准备内膜,共61个周 期;自然周期无优势卵泡发育,内膜发育差(厚度<8 ram)或发生卵泡黄素化不破裂综合征的患者用激素替 代治疗(hormonereplacementtherapy,HRT)准备内膜, 共70个周期.FET后2周查血B.HCG,阳性者在移植 后3—5周阴道超声检查,出现宫内妊娠囊或流产,宫外 孕组织经病理检查证实妊娠者确定为临床妊娠. 实用医院临床杂志2010年1月第卫卷筮 1.3统计学方法数据采用SPSS13.0软件处理,计 量资料以均数?标准差表示,组问比较采用t检验;计 数资料比较采用.检验.P<0.05为差异有显着性 意义.. 2结果 2.1IVF组与ICSI组胚胎解冻及妊娠情况比较IVF 组患者平均年龄(30.31?3.66)岁,胚胎存活率 89.09%,移植胚胎占解冻胚胎比例74.09%,平均移植 胚胎数(2.514-0.59)个,临床妊娠率41.54%,胚胎种 植率23.93%,流产率7.41%.ICSI组患者平均年龄 (3O.21?4.04)岁,胚胎存活率88.24%,移植胚胎占解 冻胚胎比例75.98%,平均移植胚胎数(2.38?0.78) 个,临床妊娠率39.39%,胚胎种植率23.87%,流产率 3.85%.两组比较,差异均无显着性意义(P>0.05). 2.2A,B,C组胚胎解冻及妊娠情况比较A,B,C组 比较,患者平均年龄,胚胎存活率,移植胚胎占解冻胚胎 比例,平均移植胚胎数,胚胎种植率差异均无显着性意 义(P>0.05);B组和C组的临床妊娠率比较,差异无 显着性意义,但均明显高于A组(P<0.05).由于流 产周期数少,未行比较,见表1. 表1不同来源精子ICSI所得胚胎解冻和妊娠情况比较 观察指标A组B组c组 周期数(n)40917 平均年龄(岁)30.85?4.0430.44?4.1928.59?3.76 解冻胚胎总数(n)ll93550 存活胚胎总数(n)1053045 胚胎存活率(%)88.2485.7190 移植胚胎总数(n)912539 移植胚胎占解冻胚胎比例(%)76.4771.4378 平均移植胚胎数(n)2.33?0.772.78?0.442.29?0.92 临床妊娠周期数(n)1169 临床妊娠率(%)27.566.6752.94 胚胎种植率(%)23.082425.64 流产周期数(n)100 流产率(%)9.0900 与A组比较:=4.97,P<0.05;=3.93,P<0.05 2.3A,B,C组患者中存在女方不孕因素的情况IC? sI组66个周期(56例患者)中,A组有66.67%存在女 方不孕因素,比例明显高于B组(12.5%)和C组 (20%)(P<0.05).B组和C组中女方不孕因素的比 例差异无显着性意义(P>0.05),见表2. 实用医院临床杂志2010年1月第7卷第1期 表2不同来源精子ICSI患者中存在女方不孕因素情况比较 与A组比较:※X=9.54,P<0.05;A=6.51,P<0.05 3讨论 GvakhariaA等研究表明,ICSI胚胎冻融后的存 活率高于IVF胚胎,但两种胚胎冻融移植后的种植率, 临床妊娠率和流产率差异无显着性意义.本研究IVF 组与ICSI组比较,胚胎存活率,移植胚胎占解冻胚胎比 例,平均移植胚胎数,临床妊娠率,胚胎种植率,流产率 差异均无显着性意义,与该报道基本一致.RitaDC 等研究认为:不同来源精子ICSI所得胚胎冷冻解冻 后胚胎存活率和FET的临床妊娠率无明显差异.本研 究中A,B,c组的胚胎存活率,移植胚胎占解冻胚胎比 例,平均移植胚胎数,胚胎种植率组间差异无显着意义, 但A组的临床妊娠率明显低于B,C组.A组66.67% 的患者存在女方不孕因素,比例明显高于B组和C组 (P<0.05).A组临床妊娠率的降低可能与A组中存 在女方不孕因素的比例高有关. BuffatC,DozortsevD等报道睾丸或附睾手术 取出精子ICSI比射出精子ICSI获得的可移植胚胎比例 数要稍低,可被选择冷冻的优质胚胎较少,但这些胚 胎在冷冻解冻后可能有好的结局.不管IVF或ICSI, 选择多余的优质胚胎进行冷冻时,标准是相同的,即 使睾丸或附睾手术取精ICSI可能获得的可移植或冷冻 胚胎的比例稍低,但仍有优质胚胎可被选择进行冷冻. 其他影响冻融胚胎移植的因素,如患者年龄,胚胎冷 冻和解冻过程,低温保存标准,冷冻时胚胎的分裂状 态等'm在本研究各组问是无差异的.故IVF与不同 来源精子ICSI所得胚胎在冷冻解冻后的情况无显着差 异 43 不育男性睾丸内环境的改变对细胞分裂中染色体 分离产生消极影响,导致精子的细胞遗传学异常.与射 出精子的精液相比,从附睾或睾丸取出的精子出现减数 分裂染色体异常和非整倍体的概率明显增加-13].本 研究中流产周期数偏少,故需进一步扩大样本量对流产 情况进行观察.本研究表明:IVF,不同来源精子ICSI 所得的优质胚胎经受冷冻解冻的能力没有差异.ICSI 所得胚胎行FET时,女方同时存在不孕因素是影响妊 娠率的因素之一. 【参考文献】 [1]PasqualottoFF,RossiLM,GuilhermeP,eta1.Etiology—specificoutcomes ofintracytoplasmicsperminjec-tioninazoospermiepatients[J].Fertil Stl,2005,83(5):606-611. [2]黄荷凤.现代辅助生育技术[M].北京:人民军医出版社,2003. [3]UbMdiCF,RienziL,BaroniE,eta1.Cumulativepregnancyratesafter transferoffreshandthawedemb~os[J].EuropeanJournalofObstetrics &GynecologyandReproductiveBiology,2004,115(7):106—109. 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