6小鼠PS2和c-myc的影响

6小鼠PS2和c-myc的影响 ? 462?HeraldofMedicineVo1.30No.4April2011 [12] [13] afterloadingintracavitaryradiationtherapyforcancerofthe uterinecervix[J].Cancer,2003,69(1):175. MIGLIETTAI,FRANZONEP, CENTURION1MG.eta1. AphaseIItrialwithcisplatin—paclitaxelcyt()toxictreatment andconcurrentexternalandendocavitaryradiationtherapyl4] inlocallyadvanced()rrecurrentcmwicalcancer『J]. Oncology,2006,70(1):1924. 许彩芹,崔金全.紫杉醇在宫颈痛新辅助化疗中的应用 [J].国外医学:妇幼保健分册,2005,16(6):413—415. CERROTTAA,GARDANG.CAVINAR.eta1.Conc. urrentradiotherapyan(tweeklypaclitmxelforlocally advancedorrecurrentsquamouscellcarcinonlaofthe uterinecervix.apilotstudywithintensificationofdose [J].IEurJnaecolOncol,2002,23(2):115一J19. LINGYH.DONAT()NJ.PEREZSR.Sensitivitytoto— poisomeraseinhihitorsan(jcisplatinjSassOCiate(】with epidermalgrowthfactorreceptorexpressioninhuman cervicalsquanlouscarcinomaME180suhlines『J].Cancer Chemothel-PbarmacoZ,2001.47(6):473—480. 老鹳草提取物对Lewis结肠癌瘤株转染的 C57BL/6小鼠PS2和c—myc的影响 龙惠,余淑娇,黄国栋,黄媛华,陈文华,黄敏 (1.广州市皮肤病防治所,510095;2.南昌大学第一附属医院中西医结合科,330006;3.湖南中医药大学附属衡阳 医院肛肠科,421001) [摘要]目的研究老鹳草提取物对Lewis结肠癌瘤株转染的C57BL/6小鼠黏附分子PS2和c—mye表达的影 响,探讨其抗转移.方法将36只荷瘤模型小鼠随机分成空白对照组,老鹳草提取物组和羟喜树碱组各12只..空 白对照组:腹腔内注射0.9%氯化钠溶液10mL?kg,;老鹳草提取物组:腹腔内注老鹤草提取物12mg?kg,;羟喜树碱 组:腹腔内注羟基喜树碱2.5mg?kg,,各组均每周腹腔注射1次,连续3周,观察移植瘤体生长情况,免疫荧光法检测瘤 体内PS2和c—mye表达结果与空白对照组比较,老鹤草提取物和羟喜树碱组都可使移植瘤体的体积缩小,差异有统 计学意义(P<0.O1),但老鹳草提取物组比羟喜树碱组效果更明显,差异有统计学意义(P<0.01).与空白对照组比较, 老鹤草提取物组和羟基喜树碱组移植瘤体的PS2,c—myc表达均降低,但老鹳草提取物组效果更明显,差异有统计学意义 (P<O.01).结论老鹳草提取物抗Lewis结肠癌转移机制可能与降低PS2和c—myc的表达有关. [关键词]老鹳草提取物;Lewis结肠癌;c—myc;PS2 [中图分类号]R285;R965[文献标识码]A 老鹳草为常用传统中药,是姜科植物老鹳草的干 燥根茎,研究表明,老鹳草素具有较明显的抗肿瘤活 性,体外实验显示其对多种癌细胞的生长有抑制作 用?,并能诱导细胞凋亡.笔者在本实验观察老鹳 草提取物对结肠癌瘤株转染的C57BL/6小鼠PS2和 c—myc的影响,并与羟喜树碱比较,为临床肿瘤的药物 治疗提供理论依据. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1瘤株与动物瘤株:Lewis结肠癌;实验动物: C57BL/6小鼠36只,雄性,4,6周龄,体质量(18? 2)g,购自中南大学实验动物中心,许可证号为SCXK [收稿日期]2010—08—30[修回日期]2010—10—06 [作者简介]龙惠(1976一)女,湖南人,主管药师,学士,从 事药理学研究工作.电话:(0),E—mail:798587414 @qq.corn. [文章编号]1004—0781(2011)04—0462—03 (湘)2006—0002,在无特殊病原体(specific—pathogen free,SPF)条件下饲养. 1.1.2药物与试剂老鹳草饮片,天津中药饮片厂, 批号:05-0013.羟喜树碱(hydroxycamptothecine, HCPT,湖北黄石15-云制药公司,批号:H4202283),按 小鼠2.5mg?kg.(相当于临床用量)用0.9%氯化钠 溶液配制成0.25mg?mL,;老鹳草提取物配制:按小 鼠12mg?kg(相当于临床用量)用0.9%氯化钠溶液 配制成1.2mg?mL'.混悬液;兔抗小鼠PS2和c—myc 单克隆抗体(北京中山金桥生物有限公司),免疫荧光 相关试剂(晶美有限公司). 1.1.3主要仪器解剖显微镜(日产Olympus),电子 天平(上海第二仪器厂),超净工作台(guard型, 德国),水平离心机(LD4—2型,北京医用离心机厂), 计数器(MH.01型,中创集团北京民华科技公司研制, 中国同位素公司监制). 医药导报2011年4月第30卷第4期?463? 1.2老鹳草水醇提取液的制备将老鹳草片粉碎,干 燥,称取250g,按液料比10:1加入75%乙醇,室温 下浸泡24h.浸泡结束后,将全部液料放入回流提取 装置中,回流提取2h,将药液进行抽滤,抽滤后的全部 药液放人旋转蒸发仪中浓缩至500mL,冷却后放入冰 箱保存备用. 1.3Lewis结肠癌瘤株的培养,制备Lewis结肠癌瘤 株用达尔伯克改良必需基本培养基(dulbeccoS modifedminimalessentialmedium,DMEM)+100mL? L小牛血清培养至第3代生长密集时,用2.5g?L 胰蛋白酶+2g?L.乙二胺四醋酸消化,洗涤,离心后, 配制成接种细胞浓度5×10.?mL一. 1.4荷瘤小鼠动物模型的建立参照文献[5].选 用"1.3"中制备的Lewis结肠癌瘤株直接注射接种于 2只C57BL/6小鼠颈侧和大腿皮下,共4处,每处 0.2mL,成瘤后取出肿瘤组织,取样器切成体积约 1mmxlmmx1mm组织,用6号套管针左侧腋部皮下 移植实体瘤模型.待瘤体直径增至0.3,0.5cm时, 分别标记,并随机分成3组,每组12只,共36只裸鼠. 1.5分组与给药空白对照组:腹腔内注射0.9%氯 化钠溶液10mL?kg,;老鹳草提取物组:腹腔内注老鹳 草提取物12mg?kg..;羟喜树碱组:腹腔内注羟基喜树 碱2.5mg?kg,,各组均每周腹腔注射1次,连续3周 (药物剂量参照人体体质量剂量的10倍),实验共3周. 1.6测荷瘤小鼠瘤体的生长情况,计算抑瘤率每周 观察瘤体的生长情况,并测量瘤体的长径(.)和短径 (b),实验期间按以下公式计算瘤体体积(V/mm): = (axb)x~-/6.处死动物后,剥离移植瘤体,电 子天平称定质量,计算抑瘤率;石蜡包埋,连续切片,厚 度约4txm.抑瘤率(%)=(对照组瘤质量一用药组瘤 质量)/对照组瘤质量X100%. 1.7PS2和c.myc表达水平采用免疫荧光法检测 Lewis结肠癌瘤株转染的C57BL/6小鼠PS2和c—myc 表达水平.转染后48h收集细胞,调整浓度至1X 10?mL,,接种于六孔板(预置盖玻片)内爬片,24h 后用4?,3.7%多聚甲醛固定10min,4oC磷酸盐缓 冲液(phosphatebufferedsaline,PBS)洗涤3次,每次 10rain,0.1%Triton.x'100作用5min,PBS洗涤3次, 每次10min,3%过氧化氢室温孵育10min,按PS2和 c.myc试剂盒说明书操作. 1.8统计学方法实验结果数据均用均数?标准差 (?s)表示,统计学处理分别用检验和t检验.P< 0.05表示差异有统计学意义 2结果 2.1裸鼠移植瘤生长情况和抑瘤率与空白对照组 比较,老鹳草提取物组和羟喜树碱组都可使移植瘤体 的体积缩小,差异有统计学意义(P<0.01),但老鹳草 提取物组比羟喜树碱组效果更明显,差异有统计学意 义(P<0.01),见表1. 表13组裸鼠移植瘤体积比较mill',?s 驯体实体抑/ 与空白对照组比较,P<0.01;与羟喜树碱组比较,P< 0.01 2.2移植瘤组织内PS2和c—myc阳性细胞数的比较 与空白对照组比较,老鹳草提取物和羟喜树碱组都 可使移植瘤体的PS2和c—myc表达降低,差异有统计 学意义(P<O.O1),但老鹳草提取物组效果更明显,差 异有统计学意义(P<0.01),见表2. 3讨论 肿瘤的发生,发展过程中涉及到多基因畸变以及 多信号转导途径的异常,但其确切机制至今仍不十分 明确.研究认为Wnt通路参与了肿瘤组织恶性转化 的过程.Wnt/13一catenin信号转导途径是近年来才被 认识的.一类传导生长刺激信号的通路,在动物胚胎发 育和肿瘤形成中起着重要作用,其中涉及到多个基因, 如c.myc等,这些基因的突变引起转导途径失调控从 而导致多种肿瘤形成J.研究表明细胞质内c—mye的 高表达与结肠癌的形成有关.宿主的免疫状态可 影响肿瘤黏附分子的表达,从而影响肿瘤的转移能力. 研究表明免疫系统功能低下或丧失会使PS2,c.mye表 表23组裸鼠移植瘤内PS2,c—mye的阳性细胞数%,~--+s 与空白对照组比较,P<0.0l;与羟喜树碱组比较,"P<O.01 ? 464?HeraldofMedicineVo1.30No.4April2011 达升高,从而使肿瘤细胞的转移能力加强.本实验 结果提示老鹳草町以降低黏附分子PS2,c—myc的表 达,其可能机制一方面是对黏附分子PS2,c—myc表达 的直接抑制,另一方面可能与提高小鼠自身免疫力,问 接影响PS2,c—myc的表达有关. [DOI]10.3870/yydb.2011.04.018 [参考文献] [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北 京:巾国医药科技出版社,2010:124—125. [2]MOUrH,YOURL,WEIM,eta1.Inhibitoryeffectof dietarycurcuminonforestomaeh,duodenalandcolon carcinogenesisinmice[J].CancerRes,1994,54(2):5841— 5843. [3]HANANS,ARDECTK,MITTLEA,eta1.Chemoprerention ofaominducedcoloIIeareinogesisbydietarycureumin,a naturalacecringplantphenoliccompound[J].CancerRes, 1997,57(4):1301—1303. [4]吴裕丹,陈燕,陈文娟,等.老鹳草素对急性髓性白m病 细胞HI50增殖和凋亡的影响[J].中国肛肠病杂志, [5] [6] [7] [8] [91 2009,25(3):47—49. 王希胜,陈光伟,李仁廷,等.山仙颗粒抗肿瘤的临床与实 验研究[J].陕西中医学院,2002,25(3):47—49. GHOSSEINRA,ROSA1S.Polymerasechainreactioninthe detectionofmicrometastasesandcirculatingtllnlorcells[J]. Cancer,1996,78(1):1101一l104. PANTEIK.COTERJ,FODSFADO.Detectionandclinical importanceofmicrometastaticdisease[JI.JNatCancerlnst, 1999,91(13):1113—1124. MASRAMONL,ARRIBASR,TORTOLAS,eta1.Moderate amplificationsWntsignalingastrointestinaltumor formation.gastroenteofthec—mycgenecorrelatewith molecularandclincopathologirology【j].CancerRes,2000, l19(4):116l—l】64. WHARTONRQ,JONASSK,GLOVERC,eta1.Increased detectionofcirculatingtumorcellsinthebloodofcolorectal carcinomapatientsusingtworeversetranscription—PCR assaysandmuhiplebloodsamples[J].ClinCancerRes, 1999,5(2):4158-4l63. 戈合瑞林联合比卡鲁胺间歇性治疗晚期前列腺癌28例 牟红云,张鑫圣 (浙江省台州市中心医院泌尿科,318000) [摘要]目的比较戈舍瑞林联合比卡鲁胺间歇性与持续性治疗晚期前列腺癌临床疗效.方法晚期前列腺 癌患者56例随机分为间歇组和持续组,每组28例.两组患者均口服比卡鲁胺50mg,qd,皮下注射戈舍瑞林3.6mg,每 4周1次,每个月复查血清前列腺特异性抗原(prostatespecificantigen,PSA)值.间歇组当血清PSA值降到<0.2ng' mI..停用2种药物,PSA>4ng?in1开始新一轮治疗,如此循环,持续组血清PSA值无论是否正常,均连续使用药物12 个月.比较两组治疗前及治疗后3,6,9,12个月时血清PSA值,临床症状改善情况及骨转移灶的变化.结果两组患者 3,6,9,12个月血清PSA值均显着下降,与治疗前差异有统计学意义(P<O.01),组间差异无统计学意义(P>0.05).所有 患者治疗后直肠指诊或影像学检查前列腺体积明显缩小.两组患者治疗前后临床症状改善情况及骨转移灶的变化差异 有统计学意义(P<O.05),治疗前后组间差异无统计学意义(P>O.05).结论戈舍瑞林联合比卡鲁胺间歇性与持续性 治疗晚期前列腺癌均能明显控制前列腺癌疾病进展,改善尿路梗阻与骨痛等症状. [关键词]戈舍瑞林;比卡鲁胺;前列腺癌 [中图分类号]R979.1;R737.25[文献标识码]A[文章编号]1004—0781(2011)04—0464—03 近年来,前列腺癌的诊断率呈明显增高趋势,许多 患者在出现临床症状就诊时已发生转移,失去治愈的 [收稿日期]2010—09—06[修回日期]2010—10—15 [作者简介]牟红云(1973一),女,浙江台州人,主管护 师,从事泌尿科工作.电话:0576—88526126,E—mail: mouhongyun—tz@163.coin. [通讯作者]张鑫圣(1978一),男,湖北武汉人,副主任医 师,硕士,从事泌尿临床诊治工作.电话:0576—88526126,E— mail:zhangxs0624@163.corn. 机会.内分泌治疗是晚期前列腺癌的主要治疗手段, 但目前被公认最为有效的内分泌治疗仍难以确 认】.2007年12月,2009年6月,笔者比较戈舍瑞 林联合比卡鲁胺间歇性与持续性治疗晚期前列腺癌临 床疗效,现报道如下. 1与方法 1.1临床资料选择能完成治疗并随访?12个月患 者56例,年龄52,89岁,平均年龄68岁,经血清前列 腺特异性抗原(prostatespecificantigen,PSA),CT,B