复方鱼胆草胶囊制备工艺与质量标准的研究（可编辑）

复方鱼胆草胶囊制备工艺与质量标准的研究（可编辑） 湖南中医药大学 硕士学位 复方鱼胆草胶囊制备工艺与质量标准的研究 姓名:李波 申请学位级别:硕士 专业:中药学 指导教师:夏新华 20060101中文摘要 复方鱼胆草胶袭是由鱼越草、关黄袖等中药纽方制备而成,临床 髑于滏热下注型妇科带下病具有显著疗效。作者对该剑裁工艺的 可行 性以覆质量的可控蛙遇行了系统的实验研究,为进一步髓药理、 毒震 与;烙床研究奠定了熬础。 一、工艺酶可行幢研究 根据本处方药物的性质以及预试验结果,剂型确定为胶囊刿。醇 提工艺研究中,以麓酸小禁碱及浸富得率为评份臻标,采髑正交 试验 法优选霸最佳醇提工艺条件为:%乙醇浸泡.小时,提取次, 加醇蚤分别为药材的倍、倍,提取盼斌分别为.小时、,小 时;拳提工艺研究申,躁獐牙菜苦蔷及漫膏得率为译价指标,采臻 正 、时,提取次, 交试验法优选瘩载佳水提羔艺譬为:加水浸泡. 加水量分削为药材的倍、倍,提取时黼分嬲为.小时、.小时。 纯艺.艺研究中,缀对比试验,确定鱼鼹莩等簿枋戆最佳纯艺. 艺条件为:水提液减压浓缩歪黪液相对密度约为。《的浸 膏,加%乙醇至蕊液含醇羹迭%。 成型艺研究中,考察辅料对浸膏粉吸澄控砖影嘞;采用对比试 验选择助流剂的用黄。成型工艺条件确定为:干膏粉与淀粉按,: 混匀,再加入菇微粉硅胶,混匀,装入号黢囊。漕界相对湿度约 为%。二、质量标准的研究 采髑薄层层析法对剽剂中炒白芍、关黄稻进行了薄层色谱的鉴 别,采髑法对鱼胆草、警归进行了色谱鉴别,采用 法对盐酸小襞碱进行了含量测定,并进行了方法学考察,平均嚼 妖率 为%筠%,此法准确、可嚣,可用于铡剡中妁含赞溅定。 差艚谚复方鱼胆草胶囊;娃酸小襞碱;制备工艺;质量标准; ;正交试验: :? ,,, 、 ,. . . , ., .:. ,.,. %,% , ., .: . ,,.,. ., : . %. ?, , . ,、 ; 、 . , .% .%。. ,, ; : ; ;; ;写 言 复方鱼胆草胶袭来源于晦床经验方,系由鱼胆草、美黄柏等中药 纽方制备而成,临床用于湿热下注型妇科带下病具有显著疗效。 带下病是稳妇女耨道肉的分泌物明漫增多,其色、质、气味发生 异常,或锌全身、局部症状者,是妇科常见疾病之一。带下病邋常是 电湿郑影响冲任,警脉失约,任脉失固,导致鞠遭分泌翰蚤多或邕、壤、 气味的异常改变。本病多见于撬代医学中溺遭炎、宫颈炎、盆羧炎及 予宫颈癌等疾病“。 曹晓鸣”按照年国家中医药管理局颁布鲢《中医躺证诊妨 疗效标准》,对近年门诊诊治的饲带下病患者龄~岁 统计分析结果为:湿热下注型例,占.%;脾虚湿因型 例, 占 。%;肾联痰型捌,占.鹦;秀有自拟瘀毒隰跑型钢, 占.%。其中以湿热下注型居多。 霹前,西医治疗主要采鼹抗菌药、抗生紊等惑殿或夕洗,疗效快, 但易产生耐药挂,常潮治疗不彻底而反复发作。现代研究稍,中浚 治疗拜霜清热解毒抗菌作用,健脾升麓提高免疫力,祛湿止带 错中铡腺体分泌等治雯《进行治疗,迭翻标本兼治砖瓣鹳。诧夕卜,中 药资源丰富,侩格便宣,便于推广利用。溪此,重视对本病稳截药 开 发研究具有十分熏要蛹意义和良好的市耢前景。 为充分发挥中羼中药在治疗带下瘸方露的作髑,并为广大的带下 病患者提供一种安全有效、使嗣方便、稳定性好、质量可控的中药新药,本课题拟选择上述治疗带下病的有效缎验方进行新药开发。 本课题主要是针对复方鱼胆草胶囊合理的稍备工艺与质量标准 进行研究,以便为进一步的药联、毒理与临床研究提供依据。制备工 艺研究包括药材提取、缝艺、浓缩与于燥及成型等工艺条件的考察与 优选;质量标准研究包括篓别、检查及含蚤测定方法等研究工作。第部分复方馥髓草胶囊制备工艺的研究 .蕊品、试蓊与义器 .。药品、试药 复方鱼胆莩胶囊申各喙药材赡鑫湖南省药材公霹钦片厂,其孛关 黄拍、墨归、农芍三喙药材缎鉴定符合《中溜药典》年受砉晃定; 鱼胆草药橱经鉴定符合《鹳川省中药材标准》年版规定。 盐酸小檗碱对照品中国药品生物制品捡定所 獐牙莱苦苷对照品申溺药品生物稠品检定所 阿魏酸对照品 中因药品生物制潞捡定所 乙脖 《毡谱纯淑癞辱匕工研究院精细馋工研究辑 甲酵 色谱纯湖南化工研究院精细化工研究所 甲醇 分析纯湖南师大试剂厂 元承乙醇 分析纯长沙市有机试裁厂 冰醋酸 分折纯长沙市有机试帮厂 磷酸 分橱纯长沙市有机试剂厂 三乙胺 分析纯长沙事有机试裁厂 淀粉 分析纯广东油头市西陇纯工厂 微粉硅胶 分析纯上海化学试剂 硅菇吏 青岛海洋化工厂 蒸馏水为堂蒸馏水 。仪器高效液相色谱议;登紫外捡潮器 .作站;数据处理瑟 超声波提取器 ?邕京匡矮设备厂 旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂 型电子炙乎 上海天平仪器厂 型电热恒温水浴镐 上海精宏实验设备有限公司 型真空干燥籁 上海精宏实验设备有限公固 电热恒温鼓风干燥箱上海精宏实验设备有限公司 .剂型的选择 复方鱼嚣壁摹胶裳楚方系鼠鞫验方,籀床应用多以汤荆入药,吴 有 清热祛温,化瘀止痛的功效。用于湿热下注型妇科带下病疗效显著。 但汤裁存在裁备和服月不便、工艺落后警缺点。爨此,拟根据处方鳃 成药物的理化性质进行提取、分离及精制,制成胶袭剂,达到服用剂 量准确,质量可控的目的。由于胶囊剂具有崩解时限快,释药迅速, 便于服用,易于被患者接受的特点。因此,选择了胶裳剂型。 。掇激工艺路线设专 ..处方成分分析 焱胆草:为君药,具有清热解毒,利湿杀虫等功效。主要化学成 分獐牙菜苦苷,獐牙菜蔷,苦猿酯蔷 ,齐墩果酸和熊果酸等。药理研究表明,其煎剂对白 色葡萄珠菌、福氏痢疾轩菌、志贺氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、不凝集弧 菌等有较强的抗蔚作用”’。由于上述苷类成分在水中有较好的溶解 注,结合煎翔的药瑷作霜,故拟定鱼胆草永提为宜。 关黄柏:为臣药,具有清热考《湿,泻火除蒸,解毒疗疮等功效。 主要化学成分为小繁碱、药根碱、本兰花碱、黄秘碱、辩一甲基 大麦芽 碱、掌哼跨己碱、蝙晒葛碱等生物碱、另含黄精瀚、黄糖内醺。黄袖 酮酸、青荧光酸、一脱氢甾酵、?一谷甾醇、菜波甾醇。现代药壤研 究表臻:煎裁及水浸裁有抗真蕊作鼹、抗病毒作惩、抗徽生物锋惩, 醇溶性浸出物有抑制白色念珠菌的作用;其主要化学成分小檗碱有抗 菌作用”’,且易溶于热水或热乙醇“’。因此,黄柏可采用水提或醇提。 另外,关黄柏中所合生物碱类成分可能与含有机酸、蒽醌、苷类的药 物相互作用形成难溶性沉淀物前在滤过操作中损失,故在提取时可以 盐酸小檗碱含量及浸膏得率为考查指标,选择是否合煎或分煎。 奎归:具有补血活血、调缝之功效。其主要彳毪学成分为裤发性成 分、糖类、氨基酸、阿魏酸等有机酸及无机无素,当归煎帮可调节血 压、抗血小扳聚集、抗血栓形成、促遘血红蛋鸯及红纽胞生成;茄有 抗氧化、抗簇荡、抗炎、解毒等作用;爨归多糖能增强体液免疫 和细 胞免疫,增强吞噬细胞的吞噬功能和促进淋巴细胞转匕作用。考 虑到 原处方临床以汤剂入药,故确定当归直接髑搽蘸提。 白芍:具有泰血柔肝,缓中止痛的功能。主要化学成分为白芍总 蔷约占%一%、牡丹酚、羟基芍药瞢、芍药花蔷、苟药内醚苷等苷 类成分。白芍总苷对免疫系统有调节作用、丈献报道还具有镇痛、 抗壤爰作用”。自芍所含苷粪成分,水溶蛀较好,致拟定水提。 综上所述,以上四味中药,可设计两条提取艺路线进行比较: 一是关黄抽单提髑水或醇提取,其它三喙中药周水混提;二是关 黄拍与其它三味中药混合水提。 。.攥取工艺路线考察??荚黄稿漫撵与蕈提的诧较 关黄柏、当归等药材混提液的制备:驭鱼胆草、关黄柏、 当归、白芍,加求浸泡分嚣,煎煮次,入水量分别为 倍、倍、倍,:藏煮时间分别为.小时、.小时、.小时,滤 过,分别收集滤液,定容,备丽。 关赞柏单提液的制备:取黄柏,共二份,分别以水和/乙 醇为溶裁,浸泡分锋,提取次,溶粼用量分别为药材的倍、 倍、倍,提取时间分别为.小时、.小时、,小时,滤过, 分别收集滤液,定容,备用。 一提取液的分析测定: 漫静得率的测定:精密吸取上述提取液各。,置干燥至恒 重的蒸发皿中,水浴蒸干,于?干燥小时,置于燥器中,冷却 分钟,迅速称重,计算,结果见表。 盐酸小檗碱麓含量测定:取上述已定容提取液,采周高效液翔色 年版.附录 测定。 谱法《中国药典 色谱条件与系统适应经试验:震卡八烷基硅烷犍合硅黢为填充荆; 乙腈~%磷酸%三乙胺水溶液:为流动相;检测波长为 ;流速,/;柱温,理论扳数按盐酸小檗碱计不低 于 。 对照品溶液的割备:精密称取盐酸小繁碱,麓容量瓶 中,加甲蜉溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得./。 拱试品溶液的蒂《备:取上述已定容蓰取液感。秘辩徽芤滤骥滤 过,取续滤液,印得。 测定法:分别精密吸取对照茹与供试品溶液各譬,注入蔼效液 穗色谱仪,结果见轰。 。, ??弋磊烹石壅』?壅霉型堕鐾型萼堂壅.莩童霉垒型塞丝墨 提取次蔫史 第次 第次 第次蕙;??虿了夏苫葱要虿孬:虿 。丝 坠 混提水 ,? , , 。?嚣了?????西??~ 娄窖掣霉堕?竺?里堡一堕 单提水 。 . . . . . 。 。 . 。童堂%乙醇 . 表 关黄柏混提与单提盐酸小檗碱提取量 丽否磊夏????~ 提取次敬 第次 第次 摹次 基号??五嚣幕聂 螋 要窖警掣业?型??掣?』一堕? 混提水 . . . 。‘。菊?丁????西丽?~ ~ :二堡 兰壑黑熏姜尝黑里翌?羔?。~塑? 码争插药材中盐酸小襞械的含量为.%。 出表、可知,以水为溶剂时,关黄张菸材单提的盐酸套襞癜 提取量嗯显高于混提;而单捉时,以%替为溶裁的盐酸枣襞硪提 取量又明显离于以水为溶剂,且浸膏得率有所降低有助于制剂成 型。 综上,可确定关黄柏以%乙醇为溶剂单捉。.提取工艺条件的优选 ..美黄柏援歌工艺条髂的考察 。,.乙醇滚度及提取次数对浸出的影晌: 称取关黄柏 盐酸小檗碱含量为.%,共三份,分别 默%乙醇、%乙蘑、%乙游为溶铡提敬,各溺流提取三次,加溶 亵萤分潮为锫、锫、梧,提驭时阍分蹦为.、.稚、.强, 分别收集各次提取液,测定浸霄得率与盐酸小檗减的提取量,结 暴见 表、。 表 乙醇浓度及提取次数对浸膏得率%的影响 表 乙醇浓霞及提取次数对盐酸小檗碱含量的影响鸯以上图表可 知,关黄秘汉%乙醇提取,其盏酸小鬃碱键提 取量最高,且浸霄得率较低;第三次提取的浸膏得率与盐酸小檗 碱提 取量均少于三次提取总量的%。因此,从缩短生产时惩与方便浓 缩操作的角度考虑,关黄柏以醇提二次为宣。 ..藕材粉碎度对浸出酌影响: 取关黄柏盐酸小檗碱含量为.%,共兰份,一份以饮 片蒋%己醇提取,秀一份以粗粉用泓乙簿提取,各国流提取二次, 加溶剂量分剐为倍、倍,提敬时间分别为.、.晒,收集提取 液,然后溅定漫膏碍率与盐酸,、襞碱畿提驭量,绣装霓表。 表 乙醇浓度对浸出影响的试验结果 由表可知,关黄柏菇材以粗粉提取,其盐酸小襞碱的提取量 优予以饮息提取。 ...熊它工艺条件的优选: 震验设计:单因素考察确定了乙醇用鼙、药树的粒度,在此基础上, 采用正交试验法对关黄柏酵提取的其它工艺条件进行优选。选择 浸泡时阁、加酵量、提取时阉诈为考察图素,以浸膏得率及蛰酸 小檗 碱提取餮为指标,用,正交表安排试验。所选因素水平及 正交试验见表、。 表 %乙黪簿提王艺正交试验因素水乎表 浸泡时间 加醇羹倍 提取时间 ?弋 。 , .,. 。 。,. , . , .,. 实验方法与数据:取美黄糖糖粉盐酸小繁娥含量为。 %,共丸份,怒正交试验表表的安搏,分别加%乙醇搿流提 取次,收集提取液,准确量取体积,备用。精密萱取适量,分别测 定浸膏得率与盐酸一、檗碱含量,并诗算盐酸小襞碱提驭量,络暴 霓袁 . 表 醇援工麓燕交试狳设计表及结采 因素 试验熔暴 列号 醇浸膏褥率% 盐酸小襞碱提取蚤. 。. 。 试 . .《. ,. ., 验, .. . 口 拿 . . 丁 . 冀 . . 。 醇 浸 《. . 。 . ?。/。 最 , . . . , 。 膏 。 , 。 得 。 /一 率 . 。 . 。 , 。 . 盐 . 酸 。 . . . ?/;. 小 . 。 . . , 。 。 襞 . . /一 碱 . . 。 . 提 取 量 表 醇凌浸膏得率方差分暂表 表 盐酸小檗碱提取量方差分祈袁 以浸膏得率为评价指标,对表进行数据处理。由直观分析可知, 最佳提取工艺条件为,,;,极差值大,、漫示,各薅素的主次顺序 为、、;方差分析结果表明各因素的影响均无显著性意义., 以。。,组合为佳见表。而以盐酸小襞碱提取蚤为评价指标, 其最佳提取工艺条件为:,。各因素的主次顺序为、、,其中 因素经方差分斩表稍对盐酸小檗碱提取量有强显著槛影响,溺素有 显著性影响注:方差分析申,考虑阉素的。比空白别的空。还小, 鼓认为霭素对盐酸查檗硪提取量没有影响,并将其。的萑合并在空 刍列的. 。中锋为误差估诗,以提高分橱的精确度,晃表。撂擦 上述分析,因素无论是以浸膏得率还是盐酸小檗碱提取量为指标, 其极差冀与均最小,而且均比空白列小,故可任驭一令拳乎,为综短生产时间,取。为佳;、因素在上述二种评价指标中,均是以 。、,为佳。综上,可确定簿提工艺的最优奈件为;,,,即提取时加 倍、 %乙醇浸泡.小时,提取次,加醇量分别为药材的 倍,提取时闻分别为.小对、.小时。此工艺条件与正交试验表 中盐酸小檗碱提取量最高的第号试验条件一致,从而其合壬里性 亦得 实验的验证。 ..鱼胆草等菊材水提工艺条件的考察 ..,提取次数对浸出的影响 ?鱼胆草等药材提取液的制备:取鱼胆草獐牙莱苦蔷的含量为 .%、炒白芍、当归 ,加水浸泡。,加热回流提取 三次,加承量分嬲为药材酌倍量、倍羹、倍量,提驭时闻分嬲 为.、、,分别收柒提取液,定容,备用。 ?提取液砖分橱淤定: 漫膏得率婚测定:精密嗫驭上述疑驭液各。,美予漂至 恒重的蒸发皿中,水浴蒸予,于 ?干煤小时,萎于燥器申,冷 静分锋,迅速称霞,诗算,镳果见表。 獐牙菜苦苷的含量测定:取上述已定容提取液,采用高效液相 色谱法《中国药典》年版一部附录 测定。 色谱条件及系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂;甲游~乙腈一水::为流动相;检测波长为;流速./:柱温?。 对照品溶液的裁备:精密称驭獐牙菜苦蔷,嚣容量瓶 中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得./。 供试品溶液的制备:取上述各提取液周.瓣瓣擞孔滤膜滤过, 取续滤液,帮得。 测定法:分剐精密吸取对照品与供试茹溶液各肛,注入离效 。 液穗色谱议,测定,结暴冕表 表 提取次数对浸出影响的试验终暴澎以上图表可知,第三次提 取转浸膏得率与獐牙菜苦苷提取量均 少于三次提取总量的%。因此,从缩短生产时同与方便浓缩操作 的角度考虑,鱼脾草等药材以水提二次为宣。 。。水提工艺条譬戆优选 蜜验设骨:在确定提取次数媳基磁上,采用正交试验法对鱼胆草 等药材水捉的其它工艺条件进行优选。选择浸泡时间、加水量、 提取 时间作为考察圆素,以浸膏得率及獐芽菜苦餮提取量为评价指标, 用 ,正交袁安耩试验。霹选溜素水乎及正交试验方案霓表、 。 表 永提工艺正交试验圈素水平表 浸泡游潮 加拳量《掊 褒驭对蠲 ?迥乏 . , ., . , .,, 。 , 。,, 实验方法与数据:霹,正交表安瓣试验,称驭鱼嚣壁草 獐牙菜营蔷昀含量为。%、炒白芍 ,照设定方案 、当归 进行提取,滤过,合并滤液,浓缩定容至一定体积。精密吸取,分别 测定浸膏得率与獐牙莱苦苷含量,并计算獐牙菜苦苷提取量,结 果见裹。 襄 术提工艺正交试验设诗袁及嚣装 嚣 蚤 蘧素 试验结暴 确号 浸蚤器率%獐雳蒹苦瞢鬟取簧/ .,。 ., 辱。 试。 .验 . ?.毒。 鑫。 羔 . 垂。《 号。 .。 . ?. , 。 浸 . 。 . 膏 蔓 。 。 ;《?/;. . 。 , 。 簿 一《&;~《。》?《。》。 鱼 . 。 , /一 , . 。 猿 襄 。《 , 。 。菱 . 。 。 , 艺 /. 牙 莱. 。 . 。 :十, , . 。 苦 。 /一 。 营 。《 。】 浸 出 量 ;辞牙繁营簪浸蠢量/:茉糯奄囊胆萃中獐孽策警苷的浸交量《 、 表 拳捉浸寄得率方羞分析表 , . .,. 表《 獐譬’莱苦苷煲驭量方差分暂表 对表 进行数据处理,以浸膏得率为评价指标,由直观分析可 知,最佳提取工艺条件为;转,,,各鼹素的主次颁序两转、、轰,方 差分析表明因素对浸膏得率具有显著性影响见表 。以獐牙 菜苦苷提取量为评价糖标,其最佳提取工艺条件为。嚣:,,各因素媳 主次簸序亦为、蟊、,其申溺素方差分析表明,獐牙菜营瞽提取 量有显著性影响晃表。根据上述分祈,麓素无论是以浸膏得 率还是獐牙菜苦苷摄取量为糍标,其试验结果均无魏著影响,鼓可任 取一个水平,为有利于有效成分浸壹并兼簇生产时瓣,汉。为佳; 因素对上述二个糖标的影响较大,但:与髂,二个水乎的影响相避, 为减少提取溶刿,方便后续浓缡工艺,以:为佳;因素在上述二种 评价鞠标申,均以,为佳。综合上述分析,可确定鱼奔蔓草等药材水提 工艺的最优条件为。:,,即提取时加水浸泡小时,提取次,加 水量分慰为药材题倍、倍,提取时阏分著《为、.。诧王艺奈 件与正交试验表中獐牙菜苦苷提取量最高的第号试验条件一致,从 而其合理性亦得刘实验的验证。 .纯化工艺条件的优选 本制剂中鱼艘草等药材水提液中往箍含有较多杂质如蛋鸯质、 糊化淀粉、粘液质等,为提高药效,减少服髑刹量,方便制荆成型, 需进行缱纯处瑾,为了这到最佳纯化效暴,敝采疆水提醇沉法对童胆 草等药材的水提液进行精制,并以獐芽菜苦苷提取量以及浸膏得率为 考查指括,对醇沉时势液的含醇量、相对密度进行优选。...醇沉时药液含醇量的考察 按处方比例取鱼胆草,獐牙菜苦苷的含量为.%等水提 药材,按前述试验确定的水提工艺务件提取,合并提取液,等分成三 份,分弼浓缩至相对密度为。?热测,慢加快撬加入乙醇, 使药液含醇量分为%、 %、%,静置小时,抽滤,滤液定塞 至捆麓锩积。精密量取一定体积妁滤液,测定含量,缝果见衰。 表 翁液舍醇量对黪沉瓣影确 系糍每份醇沉液中獐矛装营蔷的总量 由表可见,醇沉药液的含醇量迭%时,不但獐牙莱苦苷含 量高,两显浸膏得率低有黪于减少觳簿量,并便于制荆成型。 ,,水提滚滚缀糕艘对醵淡影涤的考察 按处方毙倒取鱼蒡黧草,獐牙菜苦苷的含藿为。溉等水摄 药材,按前述试验确定的水旋工艺条件捉取,合并提取液,等分成三 份,浓缩至不鼹的翱对密度?热测,幔加快搅加入乙醇,使魏液 含醇量速菇,然后嗣上进行操作,结慕霓表。 表 水蓰浚浓缩程度对簿沉的影响 系搬每傍簿沉液申獐鹭菜营瞢戆总釜《 由袁可见,在试验范溜内,水提液浓缩至趣对密度为。 ?热测时,醇沉后药液中獐牙莱苦苷含量最高,但浸膏得率亦最高;相对密度为。?热测时,簿牙莱苦苷含量鞘宥下降,而浸 膏得率有明显下降。考虑醇沉后所瓤得的予浸膏吸潼幔较强,在后续 菝裳成灏工艺中一般还需要加入适量辅辩进行稀释以降低吸湿姓,为 避免濯浸膏得率镳篱赫在加入辅辩稍成胶裳后使藏瘸粒数编多,蔽确 定水援液浓缩至稿对密度为牺??热测时进行簿沉。 .滚续与干澡工慧的魏选 中药提取液在浓缩与干燥过程中,由于受热时间过长、温度过高, 常可导致有效成分不躅程度熄羧破坏。越此,选择合适秘浓缩与予爆 王艺十分必要。 ,。浓缩工艺条律鹪选撵 驭处方量水提药材接优选工艺提取、醇沉后,得醇沉液,回收乙 醇,分成二等份,一份于常压下温度 浓缩编号为,另一份于 滠度为。,真空度为,。减压浓缩编号为,浓缩液 浓缩至相对密庭约为.。:;时,观察浓缭效装;另驭关黄 铀药材按优选工艺酵提,得醇提波,回收乙醇,分成二等份,分舅《编 号为、,同上述条件下德行浓缩并观察其效果,结暴见。 袁碍:瀚浓缩方法的考察试验 结暴表明,采髑温度为。,真空度为一。。的减 压浓缩,可缩短浓缩时溺,提高生产效蘸,减少翻膏损失。 ..干燥工艺条件的选择 对中筠提取浓缩液秘干燥,翁前应髑最多的是真空子燥法。此法 的主要特点是:适于热敏姓物壮;干艨滠度低,速度快;产品呈松脆 的海绵状,易于粉碎等。鼹姥,缝合企业现有砖生产务传,选择真空 干燥法用于本制剂提取浓缩液的干燥。考虑干燥过程中,温度对提取 物中有效成分的影响较大,为确定适宜的予爆温度,尽量减少有效成 分的破坏,分别对关黄韬醇提浓缩液与鱼胆草等药材水掇醇沉浓缩液 抟予爆滋度进行了考察。 ..。关黄柏醣掇浓缩液干燥瀛度的考察 称取美黄袖薤酸小鬃碱舍量为,箍,照前述试验确定 的峰提工艺条件提取,合并提取液,等分成三份,浓缩至相对密度约 为。《 分另《于。、 、。真空干燥一., 然后测定每份予静申盐酸小檗碱的含量,结果见表。 袁 幂同予澡温度对于膏孛蔻酸小袋碱合营游影喃 系趣每份干静申盐酸小襞碱始总量. 由表可霓,对予黄菊醇援浓拣液,以。真空干燥。 为经。 ,.。鱼胆蕈簿蕊捞水瓣鹣淡滚缝渡于燎溢度懿考察 接处方比例称取鱼胆草獐矛菜苦蔷的含量为篙等水提药 材,按前述最佳工艺水提、醇沉后,等分成三份,浓缩至相对密度 约 为.。,分别于。、。、。真空子燥,然后测定每份 子膏中獐牙菜苦苷的含量,结果晃表。 表 不同予澡温度獐牙暮苦苷砖舍量 系指每份予膏中肄牙菜营苷的总量 由表可晃,对于鱼胆草等药材水提醇沉浓缩液,以。真空干燥 一.为佳。 .成型工艺的研究 。。骥料的选择 为便于割成适誊规格砖默囊,并降低中药曩吏囊剂的吸湿姓,胶 囊 裁成型过程中常需加入适量辅糟馋为穗释裁。中药驳囊裁常臻镌 鞴料 有淀粉、微晶纤维素、乳糖等,考虑淀粉在胶囊劐大生产中应趱 卡分 普遍,且伶掺便宝,有助于降低生产成本,故雷选淀粉作为本铡裁的 稀释刘进行考察。 ..胶囊规格与辅料用霾的设计 本处方的每日生药量为,经提取、纯化、浓缩、于燥后得予 膏约.其中关黄柏醇浸静约为.,鱼胆草等三味药材水提 醇沉浸膏约为.。若一日分次服用,每次粒,则要求每粒 胶囊含干膏粉约.。考虑实验过程中观察到本处方所得于膏粉暴 露于空气申表现出很强的吸湿性,若辅料加入量过少,则不能较好地 克服干膏粉的吸湿性,从而影响胶囊的填充,故稀释剂淀粉的加入量应多一些为宜。据此,初步设计每粒胶囊装量为.,贝每粒胶囊 中畿可加入辅耪的量为:。~。;,?终占每粒胶囊装量的 甄。 。。混会药粉滚动性与壤宠鲞豹考察 。,,混合药粉的制备 依处方比铡,取关黄袖簿捉浸膏粉.,鱼醢草等三味药水提 醇沉浸膏粉 。,淀粉.,充分混匀,即得。 ..。混合蓊粉流渤往翡考察 取混合药粉,采用固定漏斗法”’”测定其休止角,即:将只漏 斗串联并阉定予拳乎放置的坐标缀上铋的高度处,小心翼冀的将 颗 粒澎漏斗臻倒八最上的漏斗中直到坐标纸上形成的颗粒圆锥体尖端 搂静到漏斗口为止,街坐标纸溯出圆锥底部的直径计算出休止 角 /,撼暴见表?。 表 混合药粉的体止惫 由袁可见,混合药粉的乎均休止角为.。,虽然基本符 合胶囊涮填充对物料流动蛀麓要求休止意一般应控铡傣止是在 。以下“”,以保证分粼量的准确,但不是十分理想,可考虑加入适 量微粉硅胶劝流。 .。.助流剂对混合药粉流动性的影响 取上述混合药粉适量,共三份,分别加入嚣、《嚣、%的徽粉硅胶,充分混匀,按莆述方法测定其体止角,镰暴霓表。 表 徽粉硪胶对混合药料流动性的澎响 澳表可见,。尹混合筠粉申加入微粉硅璇后,其傣止角啜照下 降,袁骧加入擞粉硅胶有助改善本混合药粉妁流动姓。徽粉硅胶的 加入量,以%为挂。 。.。混合药粉的试填充 取号空心胶囊粒,分别精密称定重量,将药耪装入裳身, 并较轻敲打振动裳身蛊至装满,套上囊曝,用纱布较经麓试除去 粘隆 髓药粉,然后分别精密祢定每粒蓠曼裳的重量,计算装量,结黎见表 。 表 号空心曼囊试装混合药零争趟熬基 装蚤测定饺 平均值 幽表可见,粒黢囊药粉凄雾的平均装量可这.,表镄 选弼号空心胶裳对本稠剖混合药耪逃学填装,可满足前述装量设诗 的要求。 。。瀑金蕊耪潮粒对浚纛憋每壤究羹影淘韵考察 ,。,籁糍的制备 取上遂混合簿扮约,加入%乙醇适霞铡软材,挤压通过蛰 臻筛网,。干燥,赘粒过瑟筛,即得。 .彳.。,颗粒流动圣耋麓考察:驭激叛适量,按莆述蘧定漏斗法进行测定,结果见表 。 表 颗粒休止角测定结果 由表 可见,混合药粉制粒后,其流动性有较大提高。 ...颗粒的试填充 取颗粒适量,按前述“混合药粉的试填充”项下方法填装 粒 号胶囊,结果见表。 表 号空心胶囊试装颗粒的结果 装量测定值 平均值 由表可见,粒胶囊颗粒填紧的平均装量仅为.,达不 到装量设计的要求,故确定混合药料不经制粒而直接填充胶囊。 ..环境湿度的控制 胶囊成型过程包括混合、填装、包装中,应适当控制环境的 湿度。环境湿度的控制,可参考混合药粉的吸湿性大小进行。本制剂 粉末的吸湿性测定如下: ...吸湿百分率的测定限 取干膏粉含水提与醇提干膏粉、及上述加入淀粉、微粉硅胶 的混合药料适量,置于五氧化二磷干燥器内干燥至恒重,备用。将底 部盛有氯化钠过饱和溶液的干燥器放入?的恒温培养箱内恒温 小时。在已恒重的称量瓶底部放入已恒重的上述干粉末适量,准确称 重后置于上述盛有氯化钠过饱和溶液的玻璃干燥器内称量瓶盖打 开,于?恒温培养箱保存,定时称量并记录,按下式计算吸湿百 分率,结果见表与图。 吸湿后粉束莺量一吸瀑前粉末重奄 × % 吸湿率 吸溪前粉末重量 裹 药粉吸滏百分率 时问小时 . . 。 . . , 予膏粉吸浚率% . . . , , . 混合药耩吸湿率% / //孑孑“一” :辩粉 ‖“”” ~》港台秘辩。 , 瓣阁 圈 静粉与混合药料躐湿曲线 如表与图可见,在为 %的实验条件下,加入淀粉、 微粉硅胶所得混合药辫其吸湿性较干蚩粉在一定程度下降。 。了。.,混会药粉姨器相对遗攫懿测定渖, 在已恒重的称量瓶底部放入适量的混合茹料,准确称量后蘸于表 辑列酶具有不同浓度曲硫酸溶液或过饱和盐溶液的干燥器内,予 ?恒溢培养箱中保持天后称量,计算吸瀛百分率,结果见表。以表 中的嗽湿百分率%为纵坐标,相对湿度%为横搬标 馋疑,戆暴晃疆。 。 善 瓣。 蛊 薅? 整 。 鬏珏% 因 不问相对湿度下粉米的吸湿苜分率 律骚蛰线秘缡砖切线,麓切线交点对应酌横坐标带为辫界撩对 湿度,毙耪末的牺界稳对溅魔鞠为%。因她,装胶囊时应 控裁环境媳 相对湿度在煞躐下,以免予药粉枝潮而影嘞靛囊 裁质萋。结合实验情况与生产经验, 莰势本品成登工艺过程控剥 霜 对湿度在%以进行较为艘想。 .,潮嗣成型魁方与工艺瀚确定 综合上述黢裳成蝥相美试验赫结装,镌定本蔹裁成型楚方与工艺 如下 成型处方: 醇提干膏粉 约 水提干膏粉 约 淀粉 约 徽粉硅胶 约 粒 共裁成;毫囊./粒约 成型工艺: 混匀 填充胶囊,包装 药材提取物淀粉微粉硅胶????混合药粉?????? 成品 注:胶裳赢蝥过程,应控割在~?、?下透行。 .小结 根据处方药材提取物有关筠理作用的摄遭及所含有效成分的溶 解性等,确定了本制剂药材的提取工艺路线,即:关黄拍以 %乙醇 为溶剂单提,鱼胆草、当归、芍药炒三味用搬混提。 醇提工艺研究中,经对比试验与正交试验,确定关黄柏药材的 最佳提取工艺条件为:加%乙醇浸泡.小时,提取次,加醇 量分别为药材的倍、倍,提取时间分别为.小时、.小时。 水提工艺研究中,经对比试验与正交试验,确定鱼胆草等药材 的最佳提取工艺条件为:加水浸泡小时,提取次,加水量分别为 药材的倍、倍,提取时闺分别为、.。 纯化王艺研究中,经对比试验,确定鱼胆草等蓼材的醇沉工艺条 件为:水提液减压浓缩至相对密度为.。曼膏,加乙醇使 药液含醇量达%。 浓缩干燥工艺研究中,经对比试验,表明醇提与水提浓缩稠膏 于?真空干燥.为佳。 成型工艺研究中,通过实验,表明干膏粉中加入适量淀粉与微 粉硅胶,不但可降低于膏粉的吸湿性,而且其流动性亦能较好地 满足 胶囊填充的要求。第部分复穷鱼胆蕈胶囊质遢标准的研究 。药晶、试药卷仪器 复方鱼胆草胶裳中各味药材购自湖南省药材公司饮片厂,其中关 黄柏、眷归、镪芍三味药材经鉴定符合《申蕊药典》年版撼定; 鱼胆草药材经鉴定符合《瓣川省中药材标准羚年版规定。 魏酸小襞斌对照藩中国药品生物嗣潞检定所 獐矛菜苦替对照灞?中国药品生物制品捡定所 隋魏酸对照茹 《申圆爨品生物铡茹捡定所 乙礴 筑谱纯湖痛化工研究院精细化工霹究所 警酵 毯谱怒潮南化工研究浇精麴化工研究所 甲黪 分析绕潮离帮炙试剂厂 无水乙醇 分析纯长沙市有机试剖厂 臻醋酸 分析纯长沙事有机试荆厂 磷酸 分析纯长沙市有机试荆厂 三乙按 分析缝长沙市有祝试荆厂 淀粉 分析施广东汕头市西陇化工厂 徽粉硅胶 分析绽上海化学试裁 硅胶 《青岛海洋化工厂 蒸馏水为重蒸馏 .鉴剿试骏 。。臼芍的薄斌鉴别 取本品内容麴,加水饱和的正丁簿,超声处理:, ,滤过,滤液置分液漏斗中,用浓氨水洗涤次,每次 ,弃去氨水液,正丁醇液挥干,残渣加甲醇溶解,作为供试 品溶液。按处方配比称取除白芍以外的其他药材适量,按制备工 艺制 成缺白芍的阴性样品,同法制备缺白芍的阴性样品溶液;另取白 芍对 照药材粉末,加乙醇 ,振摇,过滤,滤液蒸干,残渣 加乙醇溶解,作为白芍对照药材溶液。另取芍药苷对照品,加甲 醇制成每中含的溶液,作为对照品溶液。照中国药典 版一部附录 试验,吸取上述种溶液各 ,分别点于同一 羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶薄层板上,以三氯甲烷一甲醇: 为展开剂,展开,取出晾干,喷以%香草醛浓硫酸溶液,热风吹 至斑点显色清晰。结果供试品色谱中,在与对照品、对照药材色谱相 应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性样品未见干扰见图。 .关黄柏的薄层鉴别 取本品内容物.,置于具塞锥形瓶中,加甲醇,超声处 理小时,滤过,滤液浓缩至约,作为供试品溶液。按处方配比 称取除关黄柏以外的其他药材适量,按制备工艺制成缺关黄柏的阴性 样品,同法制备缺关黄柏的阴性样品溶液;另取关黄柏对照药材粉末 .,加甲醇加热回流 分钟,滤过,滤液补充甲醇至, 作为对照药材溶液。取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每含盐酸 小檗碱.的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法中国药典 午版一部附录 试验,吸取对照药材溶液“,其它溶液 各“,分别点于同一硅胶板上以正丁醇一冰醋酸一水:: 为展开剂,展开,取出,晾干,置于紫外灯下检视。结果表明,供试品色谱中在与对照品和对照筠材色谱相应的位置上,有相同颜色 荧光斑点,而阴性对照未见干扰见凌。 ..鱼腿草鉴别试验 测定。 照嵩效液相色谱法中蕊药典年版一部附录一柱 色谱条件: ×.;甲醇一乙 靖:一拳:为流动相;检测波长 ;柱温 ?。 对照游溶液的稍备:精密称取獐牙莱苦苷对照品,羹 量瓶中,加甲醇溶勰,并稀释至戴度,箍匀,印得每申合.。 供试品溶没的制备:取本茹内容物,置容量甄中, 加甲酵溶液超声分转,驭盘放冷,甲醇至刻度,摇匀,周 .微孔滤膜滤过,即得。 阴性样品溶液够制备按处方配比称驭除鱼牌草以外的其他药 材适量,按制备工艺制成缺煦胆草的阴性样品,同法制备缺鱼胆 草的 阴性样品溶液。 、 色谱的测定:精密吸取供试品溶液及阴性样品溶液. 对照品溶液各,注入高效液翱色谱仅,记录色谱露。结果表明, 供试潞色谱中,在与对照品色谱相应的位置上有相同的峰,而阴 性对 照耒见于扰晃阁。 。。璺豳莲剐试验 测定。 照嘉效波相色谱法中溪药典每版一部瞪录一矗柱 。;甲醇一鬓泳 色谱条件:醋酸溶液: 为流动相:检测波长 ;柱温?。 对照品溶液的制备: 精密称取阿魏酸对照品,置量瓶 中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得每中含.。 供试品溶液的制备:取本品内容物,加%乙醇,称定 重量,加热回流,取出放冷,称定重量,用 %乙醇补足减失的重 量,摇匀,用.微孔滤膜滤过,即得。 阴性样品溶液的制备按处方配比称取除当归以外的其他药材 适量,按制备工艺制成缺当归的阴性样品,同法制备缺当归的阴 性样 品溶液。 色谱的测定:精密吸取供试品溶液、阴性样品溶液、及对 照品溶液各 ,注入高效液相色谱仪,记录色谱图。结果表明, 供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上有相同的峰,但阴 性对 照有干扰见图。 ,重金属及砷盐试验 ..重金属的检查试验 取样品 粒./宜,将内容物研细,取粉末,缓缓炽灼至 完全炭化,放冷至室温,加硫酸,低温加热至硫酸蒸气除尽后, 放冷,在~?炽灼使完全灰化,放冷,加盐酸,置水浴上 蒸干后加水 ,滴加氨试液至对酚酞指示液显中性,再加醋酸盐 缓冲液.,微热溶解后,移置纳氏比色管乙管中,加 水稀释成;另取配制供试品溶液的试剂,置瓷皿中蒸干后,加 醋酸盐缓冲液.与水,微热溶解后,移置纳氏比色 管甲管中,加标准铅溶液,再用水稀释成;再在甲乙两 管中分别加入硫代乙酰胺试液各,摇匀,放置分钟,同置白纸上, 自上向下透视,结果乙管中显出的颜色明显浅于甲管中颜色,表 明样品重金属含量低于见表。 。,砷数躯检粪试验 取样品 粒。/粒,驭内容物研缎,取粉末,加氢氧化钙 ,混匀,加水少爱揽匀,予燥后先用小火烧灼使炭纯,再在~ 炽灼使完全灰纯,放冷,加盐酸与适量水使溶解,并加永 定容至 ,备髑。餐取上述水溶液,加盐酸与拳, 依法《中国药典粤蔽一部辩录 第一法试验,结果样品砷 斑确蔑浅于标准砷斑,表稿样品含砷量低于,结果见表。 表 择茹中蚤金属、砷薤检查结果 .其它检餐项弱试验 按中霹蕊典年版一部瓣录 胶裳粼项下的有关怒定,对 三批中试样品进行检查,结果见袁。 表 三批样品检查绻暴 .含量测定的研究 鱼脬草为方申君旃,其主要有效成分为獐牙莱苦瞽,但霹蘸獐矛 菜苦蔷麓无供含测髑的法定对照品,其瘸于鉴涮的对照品经分 斩,测定纯度约为%,故暂不宜选择作为含测的指标。美黄袖为本 处方的基药,具有清热燥湿、泻火鲟毒的诈薅,莫主要有效成分为盐酸小麓碱““,且中国药品生物制品捡定所提供含量测定用的对照茹, 故选其作为本涮劐鲢含测对象。辫莆有关蕊黢小襞碱的测定方法有簿 层扫描法、高效液相色谱法等““”’,其中离效液相色谱法具有操作简 便、分离效果好,譬复挂好等优点。因此,采用色谱法对本:吏 囊镧中簸酸小檗碱的含量进行研究。实验结慕表明,谈法篱便可行, 霪复性好,乎均端牧率为。%,为.%,故可作为拳游的 质量控制方法。躲酸小檗碱含萋潮定的方法学考察情;兄如下: 。.仪器与试蕊 】一矗拄 仪器:离效渡糯龟谱仅; ×.,色谱工锋瓣。试荆:甲酶为色谱纯试剂,水为蘩蒸 德水,其它试裁均为分橱纯。 对照品:蓝蔽小鬃械对照龆批号: ,供含赣测 定用,由中国药品生物制茹检定所提供。 。怠谱条件 惑谱柱: 一拄×.;流动铀:乙 膪一%三乙艘呸磷酸水溶液:;捡潮波长“”:;流速: /:拄温:?。 ..对照品溶液的制备 精密称取盐酸小繁藏对照茹适量,加甲簿割成每舍。 的溶液,帮得, 。.嬉娃试晶溶液每黼眭溶液瀚澍餐 .,.提淑溶剂潞选撵 取本品内容物约。,精密称定,共份,分别攫于容量舞瓦 申,一份加入盐酸:,另一份加入甲黪,分 剐起声懋理,分钟。驭文,放置至室滠,加入捆应 溶液至刻度,摇匀,驭上清液,过.“微孔滤膜,取续滤液作为 供试品溶液。糖寮吸取对照品与供试品溶液适量,注入高效液相 色谱 援,测定峰磊积,计算其含量,结暴霓表。 表 不同提取溶粼对盐酸小襞碱舍繁测定结装的影响 由表可见,提取溶潮以盏酸甲醇一溶液为佳。 .。,攫取漪瀚的选择 取本品内容物约.,共份,精密称定,甚于容营瓶中, 加入盐酸一甲醪:,分别超声楚理,不茂 至刻度,摇匀, 时闪,取出,放罄至宣温,加入盐酸~甲醇: 取上清波,过瓯袋徽强滤髓,驭续滤波作为拱试品溶液。 , 按上述选定的条件,分别精密吸取对照品与供试品溶液各 注入高效液相色谱仅,测定,结果见表。 表 第圈提取霹潮麓含测结暴 由表可琵,超声处理分钟可使盐酸小檗碱基本提取完全《其 盐酸小襞碱漫庆蚤,与提取分钟相比,仅差。%,因此采用超 声处理分钟。 .,.试品溶液酌制备 综合上述试验结暴,确定拱试品溶液的稍备方波如下: 取装落差异项下的本潞内容物,取约。,精密精定,置 容量瓶中,加入盐酸一甲醇:,超声处王璺, 分钟,取出,放冷,加入盐酸一甲醇:至瓤虔,摇匀,取