西南鼠耳蝠7种组织乳酸脱氢酶_LDH_同工酶的比较

西南鼠耳蝠7种组织乳酸脱氢酶_LDH_同工酶的比较 () 文章编号 :1007 —5570 200104 - 0001 - 03 西南鼠耳蝠 7 种组织乳酸脱氢酶 Ξ () L D H同工酶的比较 黄小燕 ()贵州师范大学 生物科学技术系 ,贵州 贵阳 550001 摘要 :采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直板电泳和日本岛津 CS 9000双波长薄层扫描仪 ,研究了西南鼠耳蝠 7 种组 () 织的乳酸脱氢酶同工酶 L D H,结果明 :西南鼠耳蝠 7 种组织 L D H 同工酶谱有较大的差异 ,其分布和含量具 有组织特异性 。 关 键 词 :西南鼠耳蝠 ;乳酸脱氢酶同工酶 ;电泳 ;组织特异性 中图分类号 :Q81419 文献标识码 :A A comparison study of isozymic LD Hs f rom seven t issues of M yot is a l t a r i u m Thoma s HU AN G Xiao2yan ()Depart ment of Biological Science and Technology , Guizhou Normal U niversity , Guiyang , Guizhou 550001 , China Abstract : We have st udied isozymic L D Hs f ro m seven tissues of M yot is . al t a ri u m Tho mas by dis2 co ntinuo us vertical PA GE and scanning wit h CS 9000 scanner . The result s show L D Hs of t he seven tissues have co nsiderable differences. The dist ributio n and co ntent are tissue specificit y. Key words : M yot is al t a ri u m Tho mas , isozyme , PA GE , tissue specificit y L D H 同工酶系统具有明显的种族及组织特异 5 月采自贵阳市乌当区阿栗村大转弯岩洞中 。 性 ,是细胞代谢中一种重要的酶 ,可作一项生化遗 1 . 2 取样 将动物处死后 ,立即取胸肌 、肝 、睾丸 、 1 传指标用于物种分类和种间亲缘关系的研究。 肾小肠 、心 、脑各 011g ,用冷生理盐水洗去血污后 , 翼手目动物是哺乳动物中能真正飞行的类群 ,关于 () 加 1 mL 0101 mol/ L 磷酸缓冲液 p H712,用玻璃匀 2 这类动物的 L D H 同工酶已有部分报道,但西南 浆器在冰浴上匀浆 ,匀浆液径 1 000r/ min 离心 10 鼠耳蝠的 L D H 尚未见报道 ,本文对西南鼠耳蝠 7 min ,取上清液与 40 %甘油按比例 4 : 1 混合作电泳 种组织 L D H 同工酶进行了初步分析 。 样品 ,4 ?冰箱中暂存备用 。 1 . 3 电泳 采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直板电 1 和 泳 。小孔胶工作液凝胶浓度为 715 % ,p H819 ,大孔 1. 1 动物来源 本实验所用材料为西南鼠耳蝠 胶工作液凝胶浓度为 310 % ,p H813 , 胶体积为 17 μ( ) ( ) Myotis altari um Thomas,2 只 ,雄性成体 ,于 2000 年×15 ×012cm ,每孔加样约 40L ,上槽 阴极加 1 ()第 19 卷 贵州师范大学学报 自然科学版 滴 012 %溴 酚 蓝 , 电 泳 按 112 mA/ 孔 恒 流 , 电 泳 约 6 h ,取出胶片 ,于蒸馏水中漂洗 2 次 。 ( 1 . 4 染色 按北大生物系遗传室 1984 北大生物 ) 系遗传室《, 遗传学实验方法和技术》,1984配方染 色约 2 h ,直至出现清晰蓝色酶带 ,蒸馏水洗后 7 % 乙酸固定 12 h 。 1 . 5 照相和扫描 将固定后的电泳胶板照相 ,并 用日本岛津 CS9000 双波长薄层扫描仪扫描 ,波长 ( 620 nm ,按 Goo dman Goo dman , Met . al , Brain Res , ) 1969方法 ,计算 H. M 亚基的百分含量 。 ) () (H % = L D H+ 3/ 4 L D H+ 1/ 2 L D H+ 1/ 4 1 2 3 1 、胸肌 6 、心脏 2 、肝 图 2 西南鼠耳蝠 3 种组织 L D H 同工酶扫描图 ()L D H 4 ( ) 表 1 西南鼠耳蝠 7 种组织 LDH 同工酶电泳相对迁移率 Rf M % = 1 —H % 。 L D HL D HL D HL D HL D H 组织 12345 2 结果 114 108 001 0125 0118 0115 0107 2 124 120 000115 0106 3 2 . 1 西南鼠耳蝠 7 种组织 L D H 同工酶谱型 0123 0120 0115 0112 0108 4 西南鼠耳蝠 7 种组织 L D H 同工酶谱从“ + ”到 0122 0118 0110 5 0114 0106 ( ) ( ) “ - ”分 别 为 L D HB、L D HBA、L D H1 4 2 3 1 3 6 0124 0120 0110 7 0124 0121 0115 0108 0105 () () ( ) BA、L D HBA、L D HA,为典型的五谱带 2 2 4 3 5 4 型 ,各组织相应酶带相对迁移率值基本一致 ,见图 量1 和表 1 。肾 、小肠 、脑 3 种组织出现了深浅不同的2 . 2 西南鼠耳蝠 7 种组织 L D H 同工酶 H 亚基含 对西南鼠耳蝠 7 种组织 L D H 酶谱进行扫描和 5 条主带 , 其 肾 组 织 除 L D H着 色 较 浅 外 , 其 它 4 4 计算所得结果列入表 2 ,典型组织扫描曲线见图 2 。 条着色较深 。小肠的酶活性在这几种组织中相对 从表 2 看 ,西南鼠耳蝠 7 种组织的 H 亚基和 M 亚 较弱 , 其 中 L D H , 着 色 很 浅 , L D H、L D H、L D H3 4 5 基所占的比率均不相同 ,心肌的 H 亚基含量高达 着色较深 。脑组织的 5 条酶带中 ,L D H稍浅 , 而 5 8716 % ,胸肌 、睾丸和肾分别占 5717 % 、5311 %和其余 4 条着色较深 。胸肌和睾丸组织缺失 L D H, 4 5215 % ,是以 H 亚基占优势的耗氧组织 。4 种组织前者 4 条酶带着色较深 ,后者 4 条酶带着色均浅 ; L D H 同工酶各组份的活性大小也不相同 , 心脏以肝脏 组 织 只 出 现 2 条 酶 带 L D H和 L D H, 缺 失 5 3 L D H、L D H、L D H, 其 中 L D H酶 带 着 色 很 深 , L D H、L D H活性最高 ,分别占 4918 %和 50104 % 。 1 2 4 5 1 2 L D H几 乎 看 不 见 , 心 脏 只 出 现 L D H、L D H、 3 1 2 胸肌以 L D H、L D H活性最 高 , 分 别 占 2712 %和 1 2 L D H3 条酶带 , 其中 L D H着色明显浓于 L D H, 4 1 2 2415 % 。睾丸以 L D H活性最高 ,占 6115 % ,L D H2 1L D H极浅 。 4 和 L D H的活性较弱 。肾组织以 L D H的活性最 3 5 高 ,占 43 % 。 肝脏 ,小肠以 M 型亚基占优势 。肝脏的 M 亚 基含量为 9919 % ,小肠的 M 亚基含量为 6818 % , 均为厌氧组织 ,而脑的 M 亚基含量与 H 亚基的含 量几乎相等 。这 3 种组织 L D H 同工酶各组份的活 性大 小 也 不 同 , 肝 脏 以 L D H的 活 性 最 高 , 占 5 9918 % ;而小肠 L D H 同工酶以 L D H活性最高 ,占5 1 、胸肌 2 、肝 3 、睾丸 4 、肾 5 、小肠 6 、心脏 7 、脑 5517 % , 活 性 大 小 顺 序 为 L D H、L D H、L D H、 5 3 2 图 1 西南鼠耳蝠 7 种组织 L D H 同工酶电泳模式图 L D H、L D H;脑组织中以 L D H的活性最高 ,活性 1 4 3 大小顺序为 L D H、L D H、L D H、L D H、L D H。张维道等认为 : 蝙蝠因适应长时间的飞行活动 ,肌 3 2 1 5 4 表 2 西南鼠耳蝠 7 种组织 LDH 的 H、M 2 种亚基的含量 %肉一直在不停地剧烈运动 。除需充足的氧供应外 , 同时还需要 H 型的乳酸脱氢酶将乳酸脱氢转变为 组织 胸肌 肝 睾丸 肾 小肠 心脏 脑 丙酮酸 ,进入线粒体进行彻底氧化 ,产生大量能量 —H/ % L D H 5717 011 5311 5215 3112 8716 4914 L D H —M/ % 4213 9919 4619 4715 6818 1214 50106 以满足飞行时肌肉运动的需要 ,因而其 L D H 同工 酶与其他哺乳动物不同 。本研结果表明 :蝙蝠肌肉 具有 H 型的 L D H 同工酶可能是普遍存在的生化 3 讨论 性状 ,是对飞行生活的一种进化适应 。 3 . 3 从电泳结果看 ,西南鼠耳蝠各组织酶带的深 311 报道的西南鼠耳蝠的胸肌 、肝 、睾丸 、肾 、小 浅有差异 , 出现酶带的数目亦不尽同 。充分证明 肠 、心脏和脑 7 种组织 L D H 同工酶与同属的大足 L D H 同工酶的活性和组织的功能 、氧张力等有密 2 ( ) 蝠 Myotis ricket ti相比基本相 同, 即 都 为 五 谱 切关系 。 带型 ,心 、肾 、胸肌 、睾丸 L D H 同工酶是以 H 亚基 参考文献 : 为主的好氧型组织 ,肝 、小肠等组织的 L D H 同工酶 2 Sharmar G. P. et . al . Serum L D H enzymes in st udying in是以 M 亚基为主的厌氧组织 。不同之处在于 ,西 1 terspecific relatio nship in birds J . The Nucleus , 1986 , 南鼠耳蝠脑组织 H 亚基与 M 亚基所占比率几乎 () 129 1 . 2:86 - 89 . 相同 ,而大足蝠的脑组织是明显以 H 亚基为主的 () 张维道 ,赵茹. 大足蝠 8 种组织乳酸脱氢酶 L D H同工 2 好氧 型 。再 就 是 西 南 鼠 耳 蝠 胸 肌 H 亚 基 占 ( ) 酶比较 研 究 J . 安 徽 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 . 5717 % , 相 对 较 少 , 而 大 足 蝠 胸 肌 的 H 亚 基 占() 1991 , 4:54 - 59 . 冯文和 . 大熊猫尸体组织 L D H 同工酶电泳观察 J . 兽 6118 % 。3 () 类学报 ,1985 , 3:167 - 172 . 3 . 2 西南鼠耳蝠与其它哺乳动相比 ,肌肉 H 亚基 3 含量明显较高 ,如大熊猫肌肉 H 亚基占 1618 %,