氧氟沙星眼膏无菌检查方法的建立

氧氟沙星眼膏无菌检查方法的建立 .2009年9月第19卷第9期?日药学 氧氟沙星眼膏无菌检查方法的建立 湛文青,林丽英 (广东省药品检验所,广东广州510180) 摘要:目的建立氧氟沙星眼膏的无菌检查方法.方法按《中国药典》2005年版无菌 检查法,采用薄膜过滤法,以十四烷酸异丙 酯为溶剂溶解样品(浓度为0.01g/m1),用含0.1%聚山梨酯8O的0.1%蛋白胨水溶 液作冲洗液,冲洗量每滤膜600ml,通过接 种6种阳性代表菌株进行方法验证.结果阳性代表菌株在样品组与冲洗液对照组 均生长良好,样品的抑菌活性已消除.结论方法 简便快速,结果可靠. 关键词:氧氟沙星眼膏;无菌检查方法 中图分类号:R927.1文献标志码:A文章编号:1673—4610(2009)o9—0035一o2 EstablishingSterilityTestforOfloxacinEyeOintment ZHANWen—Qing,LINLi—ying (GuangdongInstituteforDrugControl,Guangzhou510180,China) Abstract:ObjectiveToestablishamethodofsterilitytestforOfloxacinEyeOintment.Metho dsAccordingtosterility testmethodoftheChinapharmacopoeia(2005edition),membrance— filterprocedurewasused.Isopropyltetradecanewas usedassolventtoproducetheconcentrationof0.01g/m1.0.1%polysorbate80of0.1%pepton ewasusedasrinse solution(atadosageof600ml/membrane).Themethodwasvalidatedbyvaccinatingsixkind sofcontrolbacteria. ResultsAllcontrolbacteriasrevealgrowthmicro— organisminsamplegroupandrinsesolutiongroup.Thesampleof antibacterialactivitycouldbecounteracted.ConclusionThemethodwassimple,rapid,anda ccurate. Keywords:OfloxacinEyeOintment;Sterilitytest;Methodvalidation 氧氟沙星眼膏是从日本进口的抗生素眼用制剂, 对革兰阳性菌,阴性菌群均有较强的抗菌作用,适用 于治疗细菌性结膜炎,角膜炎,角膜溃疡,术后感染 等外眼感染.根据《中国药典》2005年版, 建立其无菌检查方法并通过接种6种阳性代表菌株进 行方法验证. 1仪器及试药 1.1仪器, HTY一200A集菌仪,SN330,KSF330无菌过滤 培养器(杭州泰林高得科技有限公司). 1.2试药,菌种 氧氟沙星眼膏(批号:TRN0879,TRN0880, TRN0881,日本参天株式会社生产),十四烷酸异丙 酯(厂方提供),硫乙醇酸盐流体培养基,改良马丁 液体培养基,大肠埃希菌[CMCC(B)44102],金黄 色葡萄球菌[CMCC(B)26003],枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501],生孢梭菌[CMCC(F) 64941],白色念珠菌[CMCC(F)98001],黑曲霉 [CMCC(F)98003](均由中国药品生物制品检定所 提供). 2方法与结果 2.1试验菌液制备 按《中国药黄》05版2部附录无菌检查法菌液 制备方法,分别用1O倍系列稀释法制得每1ml含 菌数10,100cfu(菌落形成单位)的菌悬液(第三 代). 2.2方法及验证——薄膜过滤法 2.2.1试验组取样品30支,分6组,每组5支, 每支约取0.3g.每组加入已过滤灭菌的十四烷酸异 丙酯(溶剂)150ml,置45?水浴中,振摇使溶解, 按薄膜过滤法处理,用45~C含0.1%聚山梨酯80的 0.1%蛋白胨水溶液(冲洗液)冲洗,600ml/膜,调 节泵速为50r/min以下,验证细菌的滤筒加入硫乙醇 酸盐流体培养基,验证真菌的滤筒加入改良马丁培养 基,每滤筒加入1种试验菌菌悬液1ml,共验证6种 试验菌株. 作者简介:湛文青,副主任药师,Tel:020—81887687,E— mail:xzhanwenqing@163.com PharmaCyToday?20099Vo1.19No.9? 2.2.2阳性对照组另取培养器,分别加入与试验 组等体积的培养基和等量试验菌悬液.加入的试验菌 悬液同时作平板计数(生孢梭菌为液体计数). 2.2.3冲洗液对照组取6种试验菌悬液各1ml, 分别加入45cI=已过滤灭菌的十四烷酸异丙酯约150ml 中,摇匀,分别过滤,再用45?含0.1%聚山梨酯80 的0.1%蛋白胨水溶液冲洗,600mV膜,依法加入培 养基. 2.2.4空白对照组另取培养器,先过滤溶剂150mE/膜, 再过滤冲洗液600mV膜,加相应的培养基. 2.2.5样品组取样品l5支,每支约取0.3g,加入 无菌十四烷酸异丙酯450ml,置45?水浴中,振摇使 溶解,均匀分配到3个滤筒中,用45?冲洗液冲洗, 6oomV膜,调节泵速为50r/min以下,依法加入培养 基.以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌. 2.3培养 细菌培养条件为3O一35?培养1—3d,真菌培养 条件为23—28?培养1,5d,逐日观察结果(空白对 照组和样品组均培养14d). 2.4结果 结果显示(表1,表2),试验组与阳性对照组, 冲洗液对照组中试验菌细菌均在1d内生长良好,试 验菌真菌均在3d内生长良好,符合验证要求,表明 在上述试验条件下,可消除除样品的抑菌活性,且溶 剂和冲洗液对微生物的生长无影响,该方法可作为氧 氟沙星眼膏的无菌检查法. 表1试验茵生长情况 表2空白对照组及样品组微生物生长情况 注明:"+"表示微生物生长良好;"一"表示无微生物生长. 3讨论 氧氟沙星眼膏的无菌检查取样品15支,每支取 约0.3g,满足2005版《中国药典》眼用制剂最少检 验数量的要求. 使用含表面活性剂聚山梨酯80的冲洗液,可彻 底清除黏附在滤膜上的样品基质,消除样品的抑菌活 性.由于样品溶液较黏稠,实验全过程需调节泵速为 50r/min以下. 本实验设置冲洗液对照组,在与样品处理方法相 同的实验条件下,不加样品,分别加入6种试验菌, 考察实验所用的溶剂,冲洗液以及实验方法对微生物 的影响,以验证实验结果的可靠性. 样品组及空白对照组的设置,目的在于保证实验 在样品,溶剂,冲洗液,培养基及相关实验器材均为 无菌的情况下进行,避免上述因素对实验结果造成干 扰. 本实验建立的无菌检查方法科学,快速,结果准 确可靠,为具有抑菌作用的软膏剂的无菌检查法的建 立提供可参考的依据. (收稿日期:2009—06—18) 参考文献 l国家药典委员会.中国药典.二部.北京:化学工业出版 社,2005.附录89. 2苏德模,马绪荣.药品微生物学检验技术.北京:华龄出 版社.2007.243.