中草药成药（口服液、蜜丸）的微生物检测

中草药成药（口服液、蜜丸）的微生物 药学、药学（医药营销方向）、药物制剂、中药学、中药学（国际交流方向）、 制药工程、中药学（知识产权保护方向）专业 2学时 了解药物微生物学检测项目，掌握口服药物以及其他药物的微生 物学检测过程。 药物中的微生物多来源于原材料和外界环境，中草药的原材料多 为植物的根、茎、叶，受微生物污染的机会更多，为保证药物的质量， 除对药物进行药效、药理学测定外还要进行微生物学的检测。根据给 药途径和使用的不同，将药物限定划分为两类，一类为规定灭菌药物， 它们包括注射剂、输液剂，体腔、眼科、烧伤、溃疡创面等用药。这 类药物中绝对无活菌存在，因此要对这类药物进行无菌测试；另一类 为非规定无菌药，包括各类口服药及皮肤外用药，这类药由于来源、 制备条件等原因可能含有不同种类和数量的活的微生物，只要染菌量 在药典规定的范围内且保证不含有特定的致病菌，一般对药物质量无 大的影响。为保证药物的质量和用药的安全性这类药物中的微生物的 种类和数量必须限定在一定范围内。因此要对这类药物进行微生物限 度检测。 我国药典规定口服的不含生药粉的丸剂细菌总数小于1000，霉 菌总数小于100，含生药粉的丸剂细菌总数小于30000，霉菌总数小 于100；煎膏剂和糖浆剂，细菌总数小于100，霉菌总数小于100； 不同的药物细菌的限定不同。大肠杆菌来源于人和动物的粪便，药物 中检出大肠杆菌说明药物曾被粪便污染，可能存在其他肠道致病菌， 因此药典规定口服的任何药物绝对无大肠杆菌存在。 1、细菌、霉菌（包括酵母菌）计数——平皿菌落计数法 1)供试液的制备：无菌操作，取10ml中药口服液或10g蜜丸分别加入稀释液（生理盐水）90ml或100ml，混匀即为供试液。进一步 稀释成1：100、1：1000等适宜的稀释级。 2）分别用无菌的吸管取不同稀释级的供试液1ml，置于直径90cm无菌平皿中，在加入准备好的无菌的约45?的各种培养基（经过无 菌和灵敏度测试的）15ml混匀待凝固后，倒置培养，每个稀释级应 作2—3个平皿；另取稀释液1ml分别置4个无菌平皿中再加入细菌、 霉菌的45?的各种培养基（经过无菌和灵敏度测试的）15ml混匀作阴性对照。 3）细菌计数培养用营养琼脂培养基，霉菌计数培养用玫瑰红钠 琼脂培养基。 4）细菌培养温度为37?，培养48小时，但在24小时、48小时可点计菌落数，以48小时为准，统计培养基上生长的菌落数，一般 选取菌落数在30——300之间的平皿进行计数为好，然后乘以稀释倍 数，即得每克或每毫升被检药物中的细菌总数。霉菌培养温度为25——28?，培养72小时，但在48小时及72小时可点计菌落数，以 72小时为准，一般选取菌落在5—50平皿计数，乘以稀释倍数即为 每克或每毫升药品中的霉菌总数。 2、大肠杆菌检查 1）取供试液10ml,加到100ml胆盐乳糖培养基，；再取10ml含50—100个菌（大肠杆菌）的对照菌液加到100ml胆盐乳糖培养基做阳性对照；最后取10ml稀释液加到100ml胆盐乳糖培养基做阴性对 照。37?培养18——24小时，阴性对照应无菌生长（不混浊）。 2）取上述3种培养物各0.2ml分别接种置5mlMUG（4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基）培养基内，37?培养24小时，分别于5小时与24小时取未接种的MUG培养基管作本底对照，将各培养管置365nm紫外光下观察，呈现荧光的为阳性，无荧光的为阴性。 3）在MUG培养管滴加靛基质指示剂，液面呈现玫瑰红色为靛基 质试验阳性。 当阴性对照阴性（培养基不混浊、MUG阴性、靛基质阴性）；阳 性对照细菌正常生长；供试液胆盐乳糖培养基澄清，MUG阴性，靛基质阴性，判断未检出大肠杆菌。相反，当阴性对照阴性；阳性对照细 菌正常生长；供试液胆盐乳糖培养基混浊，MUG阳性，靛基质阳性， 判断检出大肠杆菌。 4）若供试液MUG阳性，靛基质阴性或MUG阴性，靛基质阳性， 应取供试液胆盐乳糖培养物划线接种于麦康凯琼脂平板， 37?培养18—24小时，如无菌落生长，判断未检出大肠杆菌；有菌落生长， 应挑取2—3个可疑菌落做靛基质试验（I）、甲基红试验（M）、乙酰甲基甲醇生成试验（VP）、枸橼酸盐利用试验（C）和革兰氏染色进一 步的判断；大肠杆菌IMViC结果+ + - -,革兰阴性散在排列的短小杆 菌。 营养琼脂，玫瑰红钠琼脂， 胆盐乳糖培养基，需氧菌、厌氧菌 培养基，MUG培养基，真菌培养基，麦康凯琼脂，生理盐水，无菌试 管，无菌吸管，阳性对照菌（藤黄微球菌、生孢梭菌、白色念珠菌、 大肠杆菌）。 1、为使检测结果具有代表性，所测药物除随机采样外，还要求 具有一定的量，每个批号至少抽样2盒或2瓶（检测用量的3倍量），每次检测从样品中取出的药量不能少于10ml或10g. 2、检测前药物不应开封，应保证原包装状态，置阴凉干燥处（防 止细菌污染和细菌的繁殖）。 3、检测时一定注意无菌操作，稀释的药物样品2小时以内用完。 4、为排除药物中防腐剂和抑菌成分对测试结果的干扰，试验前 用被检测的药物的稀释液作抑细菌和抑真菌试验，若测试的药品有抑 菌作用，需用稀释法、中和法、薄膜滤过法消除抑菌性后，才可对该 药物进行细菌检测。 5、试验前还要对所用的培养基进行无菌和灵敏度（用已知的细 菌）测试。 详述口服药物的微生物学检测过程，如实检测结果并对你的 检测结果进行。 请如何进行外用药物的微生物学检测？ 论证与设计30%；方案实施20%；解决问题的能力20%；实验结果20%，实验报告10%。