【doc】人类乳头瘤病毒DNA在喉乳头瘤病的表达

【doc】人类乳头瘤病毒DNA在喉乳头瘤病的达 人类乳头瘤病毒DNA在喉乳头瘤病的表达 中国限耳鼻喉科杂志2O02年第2卷第3期l47 人类乳头瘤病毒DNA在喉乳头瘤病的表达 赵燕玲’柳端夸张勇…芦志达… 【摘要】目的探讨不同型人类乳头瘤病毒 (humanpapilfomavirus.}I}v)DNA在喉乳击瘤中的作用.用多聚 酶链反应(ynmtus~chait~,鼎0n,PCR)厦原位杂交(insituhyhfidimn,ISH) 方法对喉乳头瘤病(1aryngealpapillomatosis. LP)不同标本拴疆6.10倒鳞癌标本对照.结果PcR检测结果显示35/36瘤体标本HPV6b/l1阳?陆.l0,36例瘤体标 本6h/1l和16/18同显阳性.3/7例瘤旁正常组织标本,5/5例碳化标本以厦1/4烟雾标本HPV6h/l1阳性.ISH检测 鲒果显示瘤体27,36例HPV6b/l1阳性,2例l6型f13性,l例18型f13性.鳞癌对照组中HPV16,18f13性各1例;无6b/ 1l阳性者.结论我们研究认为LP中}I}v感染以6b/I1为主.步部分伴16118型.而后二者更倾向于与恶性肿瘤 厦LP恶变有关LP瘤旁组织厦c02激光碳化气雾存在HPV 【关键词】喉乳岳瘤病;人类乳岳瘤稿毒:多聚酶链反应;原住杂交;c激光 TileexpressionofI一DNAinlaryagealpal0l?咄 ZIIAOYarding.L1UI枷.ZHANGYang,(Depa,~nent.自z咄,EEArY且l 础f. FadanUnizer~y.Sha,rghai200031.Odna) 【Ab~a-aet】Pllrp惦 eTodetemtinethepossibleassociationbetweenthevarioustypesofHPVwithLP.Methodsu她 PCRandISHtOdetect刖DNAinvarietyoflaryng~papill~tissues,and10hIy铲~!tmmouscarcm,maa1as cora~llinggroupResultsThemsdbofPERshowed35136cas档? positiveforHPVt:q~e6b/lland10/36cases,~vcuep0si— bvehHPV6b/11and16/183/7adjacent/IO137/1~specimen,5/5lasers吡 rymnir.gtissuessatd1/4collaserpe.p一 l12~nwep~sidveforHPVtype6b~11.nresults0fISHshowed27,36waspositivefor6b/11.2ofwhichwereD0veforHPV16 and1forHPV18,respectively.OfterLlar~gealsql?uscarcinomaspeeimem.18type.NoHPV6b/11?foundinanyll1alj. gantspecimen,C.~dusionOurfindingsuggestflaatthe}DNA6b/11isthedominatetypeintheLPtissuse.and16/18 typeisseldomfoundinLPbuthasacloserassociationwithmalignantlesions.}口VDNAexistsinLPadjacentnormaltissueand claser蛔. 【Keywords】】目ealpapil~atosis;HPV;PCR;1SH;mlaser 喉乳头瘤病是一种鳞状上皮非浸润性生长的良 性肿瘤.由于其临床行为的不确定性给治疗带来较 大困难,目前尚无特效方法.本研究目的:(1)利用 多聚酶链反应(polymeraseo,h~nreaction,PCR)及原位 杂交(inshuhybridism,ISH)方法对青少年型及成人 型的LP组织的不同标本进行检测,寻找不同型人类 乳头瘤病毒(humanpapilloma.virus,HPV)DNA对【|P 临床发生,发展的影响及相关联系;(2)探讨【|P患者 瘤旁组织及c激光术后HPV潜在感染可能. 材料与方法 1.标本来源 LP所有实验标本选自1995年1月,1996年1 月北京同仁医院耳鼻咽喉科收治的I患者36人 次,其中青少年(JOP)组(<20岁)2l例,成人(AOP) 组(>20岁)15例.另采取瘤旁约1?以外肉眼正 常组织标本7例,二氧化碳激光手术烟雾标本4例. 碳化组织标本5例.喉鳞癌对照标本10例.全部 *复f]大学附属跟耳鼻喉科医院上海2/X]031 北京同仁医院’.耳鼻喉科…病理科北京1Glib05 LP喉鳞癌病例均经同仁医院病理科证实. 2.标本采集方法: 瘤体标本:所有瘤体标本均采自全麻支撑喉 镜下,肉眼所见喉部乳头状瘤瘤体部分.将瘤体组 织一式2份,1份行PCR检测,另1份ISH检测.瘤 旁正常组织:为肉眼所见喉部瘤旁约1cm非瘤体处 正常黏膜行PCR.二氧化碳烟雾标本:无菌海绵经 二氧化碳烟雾吸引器吸附烟雾行PCR,注意勿吸引 分泌物.碳化组织为术野中碳化组织,注意避免与 瘤体接触.鳞癌标本:取自经同仁医院病理证实的 组织切片. 3.实验方法: PCR检测法:引物合成由中山大学卫生部 医药中心PCR技术推广应用中心设计台成:HPV6t l1引物:5’一GTGGGCGAACG’IETCCCTGA3’.5’.TGD. AGCATIqEGGGCCAGC,CG-3’,目的扩增片断438bp. HPV6/18弓I物:5’.”W,GTGCCATGcACATcAGGAcA. 3’,5’-T?ACAG(兀’交,洗涤染色,最后结果判定;HPV 感染阳性细胞表现为核内显示紫蓝色颗粒. 结果 1临床资料分析:本课共采集36份新鲜LP 肿瘤组织标本,其中男性22人,女性l4人.男女比 为1.6:1;年龄l0个月,72岁,按目前临床普遍应 用的Lmdeberg分类法0分为JOP(<20岁,共21人 次)与AOP(>20岁,共15人次).本课题中有2例 既往有明确lJIJ病史并经同仁医院病理科多次证实. 此次以lJIJ复发人院治疗,术后病理诊断为喉鳞状上 皮细胞癌,故仍计人AOP组. 2.PCIt检测结果:瘤体:6b/11阳性率97%(35/ 36),1例单纯16/18阳性(3%);此外,IO例为6b/ll 及16]18双重阳性;HP~阳性表达JOP组与AOP组 经卡方检验p>0.05,差异无显着性;性别在HPv阳 性表达上差异无显着性.7例瘤旁正常组织,3例 HPV6b/11阳性,其中1例合并16/18型阳性.5例 碳化标本HPV6b/11均阳性.4例烟雾标本中,1例 H~W6B/1I阳性;其余为阴性. 表1PCR检测HPVDNA分布 *其中1倒台并16118型阳性 3.IsH结果: lJIJ:HPV—DNA阳性表达共3O例(83%),其中 6b/11阳性75%(27/36),包括6b/11+16阳性1例; 6h/11+18阳性2例.另HPV16阳性2例;18型阳 性J例.鳞癌:lO例喉鳞状上皮癌中,HPV16,18阳 性各有J例;无6b/11阳性者(详见表2). 表2ISH检测HPVDNA分布 *包括6b/11+16阳性1例,6b/l1+18阳性2例 讨论 喉乳头瘤病(IJlJ)以其I临床行为的不确定性以 及在不同年龄组中病情转归的差异,一一直为I临床难治 的疾病之.人们曾试图从不同角度研究相关因 素,以期能找出可以预知其临床行为的方法.到目 前为止已知HPV感染为重要的发病原因.既往许 多报道中,lJIJ中I-1PV主要以6,11型感染多见】. Dickeaa等于1991年首次报道lJIJ组织中检出HPV16 型,而另方面大量研究证实在喉及呼吸道其他 部位的鳞癌,疣状癌,生殖系统肿瘤中发现HPV感 染以16,18型常见;因此一般认为HPV6,11型为”低 危型”而HPV16,18属”高危型”.本研究显示在lJIJ 中HPV有很高的阳性表达,证实HPV与lJIJ的密切 相关性;而这其中又以6b/11型为主,极少部分为,伴 I6或l8型.本课题中有3例经ISH检测伴l6或l8 型阳性,其中1例18型阳性者为术后证实恶变的 LP;在对随机选出的lO例喉鳞癌检测发现各有1例 HPV16或I8阳性;相对于喉癌中6b/1I型全部阴性 表明I6和/或18型HPv感染与恶性肿瘤的关系更 密切.本研究认为对这二型阳性患者临床更应密切 随诊. 关于呼吸道正常组织中HP~的潜在感染已陆 续有报道.我们注意到本研究中:(1)瘤旁组织中4 例梭出HPv感染,且与瘤体HPV同型,继而推测 HPv潜在感染在lJIJ复发中起某些作用;(2)有研究 认为,在激光作用的周边组织出现细胞的溶解,故而 激光作用的组织及其周边接壤的细胞出现不可逆损 害.而远离激光作用区域的细胞损害则为可逆 的.本组采集的5例术后碳化标本全部显示HP~ 与瘤体的感染同型.在除外标本被污染的基础上, 强烈提示二氧化碳激光手术后虽然已除肿瘤,但 局部仍然有HPV病毒存在.高温并不能完全破坏 病毒DNA,为|?病毒潜伏提供了证据.从另一角 度解释了为什么二氧化碳激光手术并不比常规手术 切除更有效的减少LP肿瘤的复发.本课题所收集 的4例烟雾标本中1例为HPV6b/11阳性,虽然收集 (下转第150页) 曩J_1 中国跟耳鼻喉科杂志2002年第2卷第3期 矫正,影响鼻窦的引流而易发生鼻窦炎”.时于前 次手术失败病例作鼻窦cT扫描和鼻内窥镜检查, 证明未能矫正的偏曲部位并发鼻腔或鼻窦病变;? 手术时将鼻中隔软骨脱位,或仅切除部分偏曲软骨 而将中隔推直,有时固偏曲的软骨切除不足,两侧鼻 腔填塞力量不对称,鼻外伤等而弹原位致矫正失 败;@对于鼻中隔偏曲或矫正术后伴随的鼻甲代偿 性肥大,术后鼻腔粘连等处理不全面,都会影响通气 或鼻塞加重,使手术达不到原有效果. 由于前次手术而使鼻中隔黏软骨膜或黏骨膜粘 连紧密,如再由鼻腔径路势必存在着术野小,出血 多,分离暴露困难等缺点.再次手术不仅要解决偏 曲问题同时应该避免造成鼻中隔穿孔等损伤.因 此我们大多选择在鼻内窥镜下或鼻小柱翻揭径路完 成手术.鼻内窥镜下鼻中隔手术由于视野清楚,创 伤小等优点,国内外皆有成功经验.切口可选择 在鼻中隔骨与软骨交界处或接近偏曲处使损伤范围 小.我们通过临床实际操作体会到鼻内窥镜同样适 用于鼻中隔偏曲的再次手术,但由于前次手术后粘 连的限制,切口通常选择在偏曲未矫正处的后方约 2n’tm处,切开黏膜后可以向前,向后分离暴露偏曲 的骨或软骨边缘,因为有鼻中隔软骨或骨的支撑作 用使分离易于进行.本组病例中有7例在鼻内窥镜 下手术,并同期处理窦口鼻道复合体,鼻窦病变,均 取得满意效果. 经鼻小柱翻揭径路可以扩大手术视野使操作在 直视下进行,便于准确地在黏软骨膜和黏骨膜下分 (上接第148页) 的量尚不能对气雾中HPv含量及危害做出准 确的判断,有待今后加大样率量,但认为在进行与 HPV感染有关疾病的二氧化碳手术时采取保护措 施,对减少患者,术者及手术中其他工作人员的潜在 感染无疑是有益的. 根据以上研究结果认为:(1)LP与HPV感染有 极为密切的关系,且以留手术糖痕的影响, 因此我们不主张适用于女性或具有瘢痕体质的患 者.鼻腔径路适用于鼻中隔单纯棘状突起且对侧无 凹陷者,可以直接在棘突处分离暴露,将其凿除即 可. 固鼻中隔偏曲而造成的鼻腔解剖结构异常或鼻 甲的代偿性肥大,以及手术操作不当或鼻腔填塞易 造成局部粘连,本组病例中就有类似情况发生所 以我们在再次手术后采用指套填塞,保证新鲜创面 的隔离和避免粗糙填塞物对鼻腔黏膜的损伤,以免 发生再粘连而影响手术效果. 参考文献 l1JYousemDM,KennedDw.flosenbergs(Istiomeatalcomplex riskfacto]3forsinusitis:crevaluationJOtolmTngo}.199120 (3):419—422 [2]马有样,于德林鼻中隔高位偏曲与鼻窦炎耳鼻咽喉 一 头颈外科,1996,3(4):218—219 — 3GdeWC,GrossCW,AbramAcetalEndoscopica”la. ngosex)py,1994,104(12):1507—1509 [4]赵守琴,周兵,刘华超鼻内窥镜下鼻中隔粘膜卜切 除术耳鼻咽喉一头颈外科L995,2(【)ls一20 (收稿日期20011l一13) (本文编辑:蓝士熊) 参考文献 [1jLindel~rgH,QsterS,Oxlund1,etalkPapillomas: ClassiilcationandCoatsClJnOtolaryngol,1986,11:432—439 2JDerkayCSRecurrentRespiratory.Pupil]omatosisIaryjJgo- scope,2001.111:57—69 [3JDickertsP,Srivastav~G,LokeSL,etalH?PpillorrtavinB 6t11and16inLaryngealPapillomasJPathol,199l,165: 243—246 [4JMcNillanK,ShapshaysM.MdSilliganJA.etal585lhfftmeter pulseddyelasertamnfoflm3~eMpapillomas:preliminary reportLatTnguscope.1998,l08:968—972 tll复稿日势】2o(}70301) (本文编辑:蓝士熊)