肉食品中住肉孢子虫的检测方法探索毕业论文

肉食品中住肉孢子虫的检测方法探索毕业论文 - 2013 设计,论文,题目 肉食品中住肉孢子虫的检测方法探索 姓 名 李红飞 学 号 201022160106 所 属 系 农学院 专业年级 绿色食品生产与检验 指导教师 2013 年 5 月 . - 摘 要 住肉孢子虫(Sarcocystis)是一类人畜共患的寄生原虫，主要寄生在宿主的各类肌肉组织中，其宿主范围很广，包括哺乳类、鸟类、爬虫类以及鱼类。在马、牛、山羊、绵羊、猪、骆驼等家畜以及鸡体内均有不同种类的住肉孢子虫寄生，人也可以被感染。住肉孢子虫寄生在宿主体内可使人、畜、禽等产生住肉孢子虫病，并对其健康造成很大影响，因不断产生代谢废物等也会对肉食品的质量造成不同程度的影响。但目前人们对住肉孢子虫的认识还不普及，更对住肉孢子虫可能对肉类食品乃至人体造成的危害缺乏认识。因此，开展此类研究是有重要意义的。由于住肉孢子虫是寄生原虫且虫体微小，又寄生在宿主的肌肉等组织中而不易被发现，传统检验方法要借助于显微镜等设备在实验室内完成。本实验在传统检验方法的基础上加以改进，以期获得更简单易行的检验方法，为肉食品中的住肉孢子虫检测和保障肉食品安全、优质提供资料和方法支持。此类研究在部分地区存在吃生肉习俗的云南省，就显得更加重要而有意义。 关键词:住肉孢子虫; 危害; 检验方法; 肉食品安全; . - Abstract Sarcocystis (generic name) is a zoonotic parasitic protozoa, mainly parasitic host various types of muscle tissue, a very wide host range, including mammals, birds, reptiles and fish. Have different types of horses, cattle, goats, sheep, pigs, camels and other livestock and chickens live Sarcocystis parasitism, can also infect people. Sarcocystis parasitic people, livestock, poultry and other meat live cryptosporidiosis in the host body can make a great impact on their health, due to the continuous generation of metabolic waste the quality of the meat will cause varying degrees of . Sarcocystis is not widespread more Sarcocystis possible for meat and even the human body the harm caused by a lack of understanding. Therefore, to carry out such studies is significant. Sarcocystis parasitic protozoa and parasites tiny, and parasites in the host muscle and other tissue not easily found, traditional testing methods with the aid of a microscope and other equipment in the laboratory. This experiment on the basis of the traditional test method to be improved, in order to obtain a more simple test methods, in meat Sarcocystis detect and protect the food safety of meat quality to provide information and support. Such studies exist in some parts of eat raw meat customs Yunnan Province, has become more important and meaningful. Keywords: Sarcocystis;harm;test methods ;meat food safety; . - 目录 前言………………………………………………………………………………………… 1 第一章 实验步骤………………………………………………………………………… 2 1、实验材料与方法……………………………………………………………………… 2 1.1材料………………………………………………………………………………………2 1.2检验设备…………………………………………………………………………………2 1.3检验方法…………………………………………………………………………………2 第二章 实验结果……………………………………………………………………………2 第三章 结果与讨论……………………………………………………………………3 、结果分析…………………………………………………………………………………3 1 2、讨论………………………………………………………………………………………4 参考文献………………………………………………………………………………… 6 致谢……………………………………………………………………………………… 7 . - 前言 住肉孢子虫在分类上属于原生动物门、孢子虫纲、住肉孢子虫科、中的住肉孢子虫属，广泛寄生于哺乳动物、鸟类和爬行类动物的肌肉等组织中。现已经命名的有寄生于猪牛肉内的枯氏肉孢子虫、毛形肉孢子虫、人肉孢子虫三种。上述各种住肉孢子虫的特征为:包囊较小、灰色、纺锤形等，大小在549*66,9700*2800微米之间，壁厚在3.0,3.8微米的包囊表面有排列整齐或不整齐的短指状突起，包囊内的缓殖子为香蕉形，大小为15.3*3.7,15.6*4.3微米。 (图一为猪肉中的住肉孢子虫) (图二为牛肉中的住肉孢子虫) 住肉孢子虫是一类人畜共患的寄生原虫，主要寄生在宿主的各类肌肉组织中，其宿主范围很广，包括哺乳类、鸟类、爬虫类以及鱼类。在马、牛、山羊、绵羊、猪、骆驼等家畜以及鸡体内均有不同种类的住肉孢子虫寄生，人也可以被感染。住肉孢子虫寄生在宿主体内可使人、畜、禽等产生住肉孢子虫病，并对其健康造成很大影响，因不断产生代谢废物等也会对肉食品的质量造成不同程度的影响。但目前人们对住肉孢子虫的认识还不普及，更对住肉孢子虫可能对肉类食品乃至人体造成的危害缺乏认识。因此，开展此类研究是有重要意义的。由于住肉孢子虫是寄生原虫且虫体微小，又寄生在宿主的肌肉等组织中而不易被发现，传统检验方法要借助于显微镜等设备在实验室内完成。本实验拟在在传统检验方法的基础上加以改进，以期获得更简单易行的检验方法，为肉食品中的住肉孢子虫检测和保障肉食品安全、优质，提供资料和方法支持。此类研究在部分地区存在吃生肉习俗的云南省，就显得更加重要而有意义。 第一章 实验步骤 1、实验材料与方法 1.1 材料:新鲜猪肉、牛肉。我们从农贸市场、超市分别购买了5头以上猪不同部位. - 的肌肉进行检验，另有白沙河实训基地自养的1头母猪。肌肉按颈肌、腿肌、心肌、膈肌等分部位获得后存放。同期，从农贸市场买来4头牛的肌肉，部位也按颈肌、腿肌、心肌、膈肌等获得后备用。对上述来自云南不同地区的6头猪和四头牛的肌肉组织进行检验。 1.2检验设备 体视镜、显微镜、载玻片、盖玻片、剪刀、0.9%生理盐水、胶头滴管、烧杯、擦镜纸、染色剂等。 1.3检验方法 踢出肉样中的脂肪和结缔组织、撕去肌膜。先用肉眼观察肌肉组织的外观性状，然后分别取颈肌、膈肌、腿肌、心肌等材料，沿肌纤维方向将肌肉剪成铅笔芯粗细大小的多组小条(当我们在用剪刀剪取其肌肉时，我们尽量剪取表面的肌肉，因为在表面的肌肉中含有的住肉孢子虫相对其深层的较多)。 将肌肉小条再次剪切成更小的组织后，置于已经加有生理盐水的载玻片上，每张载玻片上放置2,3条，再用另外一张载玻片盖上，缓慢、均匀挤压，尽可能使肌肉组织被挤压到最薄，然后分别用体视显微镜和显微镜进行观察。 在进行上述观察后，再分别加入染色剂后进行上述观察，对观察到的住肉孢子虫进行特征记录、拍照，比较未加入染色剂和加入染色剂后的效果并作好记录如下: (图三染色剂染色后的猪肉住肉孢子虫) 包囊较小、微蓝色、纺锤形，较未加入染色剂的时候更清晰，更容易观察 第二章 实验结果 . - 在实验的初期，我们一直没有检验到住肉孢子虫。通过继续参阅有关前人的实验报告和文献，加大检验猪牛的头数，并在方法上进一步改进，最终得到下述结果。 在6头受检猪的猪肉中，我们对来自于白沙河实训基地自养的1头母猪的大量猪肉，在整个试验期间制片621张，其中在编号60、编号324、编号546中发现了住肉孢子虫;对受检的4头牛的肌肉组织共制作装片435张，其中在编号214、编号356中发现了住肉孢子虫。 表一、实验中临时装片制作、检验数及检验结果 制片数 感染片数 检出率 感染率 猪 621 3 0.48% 16% 牛 435 2 0.46% 25% 第三章 结果分析与讨论 1、结果分析 从结果来看，我们不难发现孢子虫的感染是非常低的。据以前一些学者研究也同样有这样的结果，我们吸取教训，为了能更快更简易的发现孢子虫，在本次试验中我们加入了染色剂(伊红美蓝)，加入以后我们将住肉孢子虫片放置0.5-3个小时(通过我们设置3个时间段，分别为30min、1个小时、2个半小时，发现在2个小时以上这个时间段更有利于伊红美蓝与孢子虫更好的结合)，并且在取样时我们尽量剪取表面的肌肉，因为在表面的肌肉中含有的住肉孢子虫相对其深层的较多这样在观察时就更快速的发现孢子虫了。 我们在采样的时候为什么从表层采样而不从深层采样呢,这是因为有资料显示，肌肉表层中的住肉孢子虫数量高于肌肉深层住肉孢子虫的数量。此前有学者的研究结果表明，他们在分别对猪膈肌表层和深层的肌肉组织各取1g，放在载玻片上，在滴上50%的甘油水溶液，结果发现表层肌肉中有30多个住肉孢子虫的包囊，而深层肌肉中仅有10个左右，它们分布在表层、深层肌肉组织中的数量相差显著。这对于我们本次研究带来了一些启发，因此在采样的时候我们也注意到了这一问题。但由于我们检验到的住肉孢子虫装片太少，上述现象没有能够得到验证。 我们分别对6头猪不同部位的肌肉组织进行了检验，但发现住肉孢子虫的检出率非常低，这和早期研究者们的研究结果有一定差异。是什么原因可能会导致上述差异. - 的出现呢,为此，我们从过去和现在猪、牛养殖过程中可能存在的不同进行了分析和调查。分析、调查的情况如下: (1)猪、牛的饲料进行调查 我们查阅资料并结合对昆明数家养殖、饲料厂的情况进行了调查。我们对养殖场和饲料加工厂的技术人员进行走访发现，现在养殖猪牛等家畜饲料的配方中，成分复杂且加入了多种添加剂，主要包括蚕蛹、鱼粉、骨粉、血粉、羽毛粉等，并在其中加入了抗生素和添加剂，主要的抗生素为抗敌素，杆菌肽锌，黄霉素，那西肽，金霉素，制霉菌素、Dynafac、土霉素、竹桃菌素、青霉素、链霉素、斑伯霉素、替米考星、泰乐菌素及其盐类。它们的作用是:?抑制细胞壁的合成;?增加胞浆膜的通透性;?抑制蛋白质的合成;?抑制核酸的合成。上述抗生素的添加有可能在很大的程度上影响了寄生虫的感染率，并对我们实验中住肉孢子虫的检出率造成了影响。 (2)对猪、牛吃的草方面进行调查 我们对一个农场进行了调查，据有关人员介绍，现在种植青饲料土地的土壤中生活有很多的地老虎及其它地下害虫，这类地老虎等会咬断草的根而导致草的死亡，从而造成青饲料减产而影响到猪牛的养殖。为了防止、减少虫害可能对草场造成的严重危害，常常会对草场进行农药喷施等来防止产量下降。 从上述调查情况也可以作出分析，喷施农药来防止病虫对草场的危害，可能就会导致在收获的青饲料中存在有或多或少的农药残留。而当农药残留较高时，也可能成为住肉孢子虫检出率和感染率降低的因素。 我们知道，现今的部分农药中含有很高的毒性，它们通过食物直接进入猪牛的体内后，将会对猪牛的生理功能和内环境产生作用，而感染、寄生在此类宿主体内的寄生虫可能也将因此而发生感染率及寄生虫寄生数量等方面的变化。 上述两个方面存在的因素，可能都对我们此次的实验结果造成了影响。 2、讨论 由于住肉孢子虫是寄生原虫且虫体微小，又寄生在宿主的肌肉等组织中而不易被发现，传统检验方法要借助于显微镜等设备在实验室内完成，这样对猪、牛体内的住肉孢子虫检测就要花费较多的时间。猪牛肉作为今天人们的主要肉食品，如何能找到一种更加简洁、快速并为一般人也能掌握的有效方法，以实现更多人对肉品质及人身健康的关注，是有价值和一定意义的。 传统检验方法中既有我们在实验中应用的直接压片法，还有如胃蛋白酶消化法等。. - 而胃蛋白酶消化法中将用到如胃蛋白酶、氯化钠、浓盐酸、蒸馏水等试剂，其过程也更复杂而包括:A、取样，分部位取待检的猪牛肉样品并按实验设计进行处理;B.消化，将去掉脂肪和结缔组织的膈肌、心肌、腿肌、颈肌等切成1-2立方毫米小块，置于经40摄氏度30分钟在水浴振荡器中预热的盛有100毫升消化液的带有螺旋盖的锥形烧瓶中，继续置于40摄氏度的水浴锅内振荡5分钟。酶和振荡器的强力持续振荡使肌肉组织被消化，寄生于其中的住肉孢子虫也会经历滋养体从住肉孢子虫囊中释放出的过程;C、过滤并离心，对消化后的样品经离心机离心后，向沉淀物中加生理盐水后，再经取样、制片、镜检等过程。由以上所述可见，该方法对于实验室检测住肉孢子虫是一种可行的方法，它检出率高，在极少量的肌纤维被消化的情况下就可以使滋养体释放，并且可以完整无损的释放滋养体，从而使我们检测到住肉孢子虫。但这种方法对于快速检测就不适用了，它操作过于繁琐，设备要求高，耗费的时间多，这样就不适宜快速检测。 我们在实验中设计了寻找、发现适用染色剂用于直接压片观察的传统方法，而避免应用酶消化方法的目的，就是要探索更加简单、易检出和易观察的住肉孢子虫检验方法。实验结果虽然部分的实现了研究目的，但由于检验猪牛的头数、镜检的临时装片量以及用于实验的时间投入等都较少，更由于可能存在的养殖方法和饲料差异等因素，造成实验结果不理想且获得的数据也没有统计学上的意义，这是我们在今后实验中有待进一步改进并解决好的问题。但实验中发现的住肉孢子虫感染率较过去明显降低的现象，以及由此现象引出的造成感染率降低的原因是否与现在养殖中使用的饲料成分复杂有关，特别是这些有害物质是否对肉品质以及人体健康带来哪些危害。 上述问题的发现和提出，关系到肉食品质量高低和对人们身体健康的保护等问题，还因涉及到现在家畜养殖的方式、饲料配制、检验方法等并因此而有重要价值和意义。我们将关注上述问题并在条件得到进一步改善时，更加有效的开展相关研究，在探索得出更好的住肉孢子虫检验方法的同时，研究探明新发现问题的内在原因及解决途径，以便更好的解答有关食品安全等人们日益关注的民生问题。 参考文献 . - [1]汪明、马俊华等.家畜住肉孢子虫感染情况调查[J].中国兽医杂志.1999.25(12): 11-12. 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