藏红花对慢性高眼压下兔眼视网膜神经节细胞的保护作用

藏红花对慢性高眼压下兔眼视网膜神经节细胞的保护作用 藏红花对慢性高眼压下兔眼视网膜神经节 细胞的保护作用 206中华眼底病杂志2007年5月第23卷第3期ChinJOculFundusDis,May2007,Vol23,No.3 生成3_,而有的却不主张施行预防性PRP,建议仅在出现虹E1"7 膜或房角新生血管后马上应用[4],同时指出不应忽视PRP对r9] 缺血型CRVO患者残存周边视力的破坏L5].本实验结果也从另一 一 侧面支持了后者的观点,认为或许CRVO的自然病程中伴 随视网膜出血水肿的吸收尤其在明显吸收之后视网膜功能有L4j 一 定程度恢复过程,过早行PRP治疗可能不利于视网膜功能 的恢复.本实验观察时问较短,病程中较长时间的视网膜功能 恢复情况以及形态的变化有待后续更深入的观察. 4参考文献 吴德正.视网膜电图生理基础//吴乐正,吴德正.视网膜电图学. 北京:科学出版社,1998:17-20. 曹文捷,沈泽民.视网膜中央静脉阻塞的早期激光与手术治疗. 眼科新进展,2006,26:64—66. 余梓逵,何乃珍,周绍荣.早期全视网膜光凝治疗缺血型视网膜 中央静脉阻塞.中国激光医学杂志,2002,11:48—50. CentralVeinOcclusionStudyGroup.Naturalhistoryandclinical managementofcentralveinocclusion.TheCentralVein OcclusionStudyGroup.ArchOphthalmol,1997,115:486—491. HayrehSS.Managementofcentralretinalveinocclusion. Ophthalmologica,2003,217:167-188. (收稿日期:2007一O4—29) (本文编辑:朱敏) 藏红花对慢性高眼压下兔眼视网膜神经节细胞的保护作用 杨新光王昌鹏王晓娟周润海 【关键词】高眼压;视网膜神经节细胞;番红花;疾病模型,动物 中圈分类号:R775R一332 青光眼的病理基础是在高眼压和(或)视网膜缺血的作用 下,视网膜神经节细胞(RGC)及其轴突数目不断减少.在研究 对慢性青光眼的损伤和治疗时,通常以RGC数目作为观察指 标[1.].我们将藏红花提取液用于慢性高眼压兔眼模型,通过观 察RGC数目变化及其在电子显微镜下的改变,探讨藏红花对 慢性高眼压兔眼RGC的保护作用. 1材料和方法 材料:卡波姆一940购自上海申兴制药厂,配制成0.3复 方卡波姆溶液(含地塞米松0.025)供实验用.藏红花由第四 军医大学口腔医院药剂科提供. 藏红花提取液制备[3]:每次称取藏红花l50g,加蒸馏水 煮沸30rain后过滤2次,滤液减压浓缩,然后加3倍量95乙 醇沉淀24h,再过滤,滤液减压蒸馏回收乙醇,稀释成100ml 后装瓶,蒸汽灭菌30rain,实验使用时再稀释. 实验动物及分组:新西兰白兔3O只,体重2,3kg,12,16 个月龄,由第四军医大学实验动物中心提供.造模前用裂隙灯 显微镜,眼底镜检查眼前节及眼底无异常,0.5的卡因眼液表 面麻醉后schiotz眼压计连续测量眼压3d,1次/d,眼压低于 17mmHg(1mmHg一0.133kPa)的动物方可采用,随机分为 对照组,高眼压组,治疗I,?,?组,每组6只兔12只眼. 慢性高眼压模型的建立:参照文献E5]的方法,高眼压组和 治疗I,I,?组动物以速眠新0.1ml/kg耳缘静脉注射行全 身麻醉,0.5的卡因点双眼行表面麻醉,用1ml注射器在角 膜缘穿刺,抽出房水约0.2ml,注入约0.1,0.2ml的0.3复 基金项目:陕西省科学技术研究发展计划项目(2004K1oG7) 作者单位:710004西安市第四医院陕西省眼科医疗中心(杨新光,王昌 鹏,周润海)第四军医大学口腔医院药剂科(王晓娟) 通讯作者:杨新光,Email:yangxinguang62@hotmail.com 方卡波姆溶液,制作成慢性高眼压模型,维持眼压在22mmHg 以上.对照组仅作前房穿刺(1次/周). 眼压测量及用药:固定动物,0.5的卡因点双眼,测量并 记录眼压,1次/d,如果高眼压组和治疗I,?,?组眼压低于 22mmHg,则重复注入0.3复方卡波姆溶液.治疗I,?,? 组动物耳缘静脉注射藏红花提取液,1次/d,剂量分别为2O, 4O,80mg/kg. 制作光学显微镜,电子显微镜切片及计数RGC数目:慢性 高眼压持续4周后,兔耳缘静脉注射空气10ml,处死动物,摘 取眼球,角膜缘12点钟方位缝线定位,剪除角膜,虹膜,去除晶 状体及玻璃体,剩余眼球壁沿通过视乳头的矢状面剖开,颞侧 放入gouin液中固定24h,常规石蜡包埋,每个标本作3张切 片,每张切片均通过视乳头和6点,12点钟方位,苏木素一伊红 (HE)染色;鼻侧放入25g/L戊二醛液中,修成带视网膜的 1mm×1mm×1mm组织块,四氧化锇固定,乙醇脱水, Epon812包埋,制作成50nm的超薄切片,透射电子显微镜下 观察RGC的超微病理改变.用HPIAS—l000图象测量系统进 行RGC计数,测量视乳头两侧各5mm共10mm范围内的 RGC数目. 统计学处理:实验数据用SPSS10.0软件进行处理,各组 RGC值采用单因素方差分析和Tukey,Bonferroni检验. 2结果 眼压值:高眼压组和治疗I,?,?组动物的眼压在注入 0.3复方卡波姆溶液后,约3h眼压升高超过22mmHg,每 注射一次持续高于22mmHg约1,2周,在整个实验期间4组 动物的眼压均高于22mmHg,分别为(30.27?6.58), (30.37?7.07),(29.03?7.92),(35.81?5.14)mmHg,经方 差分析,差异无统计学意义(F一1.599,P一0.212),而对照组 中华眼底病杂志2007年5月第23卷第3期 ChinJOculFundusDis,May2007,Vol23,No.3 为(15.67?1.33)mmHg,与模型组比较差异明显. RGC在光学显微镜下的变化:高眼压组视网膜呈较长片 段RGC缺失,残存的RGC呈空泡样改变,数目为(62.83? 11.13)个/10mm,明显低于其余4组(P值为0.000,0.004, 0.000,0.000);治疗I组RGCs空泡化程度较轻,为(100.00? 23.98)个/10mm比对照组(311.75?22.56)个/10mm,治疗 ?组(288.16?36.47)个/10mm和?组(299.75?20.33) 个/10mm显着降低(P值为0.000,0.004,0.000);治疗?,? 组损伤不明显,RGC呈均匀单层排列,与对照组比较差异无统 计学意义. RGC在电子显微镜下的改变:高眼压组残存RGC核仁消 失,染色质浓缩边集,线粒体肿胀,嵴模糊不清,基质空泡化,粗 面内质网脱颗粒,部分扩张断裂;治疗I组RGC可见染色质不 均匀,线粒体轻度肿胀,内质网扩张,溶酶体增多;治疗?,?组 的RGC在电子显微镜下改变不明显,可见染色质均匀,有发达 的粗面内质网,线粒体肿胀不明显,接近正常对照组. 3讨论 高眼压组和治疗I,?,?组在注入0.3复方卡波姆溶液 后,约3h后眼压升高超过22mmHg,用单因素方差分析比较 了四组动物4周内的眼压值,各组间没有显着性差异,说明藏 红花提取液没有降低眼压的作用. 实验结果显示治疗I组RGC数目明显多于高眼压组(P一 0.000),残存RGC损害较高眼压组轻,说明20mg/kg的藏红 花提取液对慢性高眼压下RGC有保护作用;治疗?,?组和对 照组之间RGC数目差异无统计学意义,电子显微镜下RGC的 改变不明显,核仁,线粒体,粗面内质网等细胞器接近正常对照 组,而且RGCs明显多于治疗I组(P一0.004,0.000),说明 4O,80mg/kg藏红花提取液的保护效果没有差异,但都优于2O mg/kg的剂量. 慢性高眼压条件下,RGc损害的机制是复杂的,目前认为 病理性高眼压和(或)视网膜缺血共同成为青光眼病变的始动 原因.由于眼内压升高和(或)视网膜缺血,造成一系列链式反 应,形成视网膜节细胞层内神经营养因子的减少,视网膜和玻 璃体内谷氨酸浓度升高,RGC内钙离子超载,一氧化氮(N0) 207 和自由基增加,这些都直接或间接地造成RGC损害. 藏红花又名番红花,西红花,主要成分有藏红花苦甙,藏红 花酸和藏红花原色素等,其中藏红花酸是研究得最早的成分之 一 ,具有抗肿瘤作用,抗氧化作用[6].我们认为藏红花提取液通 过改善视网膜血液循环,阻断慢性高眼压条件下缺血缺氧对 RGC的损害,对RGC起保护作用.有实验表明[7],氧自由基在 青光眼中起重要作用,它通过脂质过氧化作用破坏红细胞膜, 使其运输氧的能力下降,血黏度增加,导致微循环障碍.另外 氧自由基还可以造成核酸断裂,蛋白质多肽链断裂,脂质过氧 化,能量代谢障碍.西红花酸的体外抗氧化作用的研究[8中显 示西红花酸体外可以显着降低肝匀浆的自氧化引起的丙二醛 增加,对于肝线粒体的诱导氧化引起的丙二醛的产生以及线粒 体溶涨度的改变有显着的抑制作用,表明西红花酸具有较高 的羟自由基清除能力,对红细胞和组织细胞以及亚细胞器膜性 结构有保护作用.因此,我们推测藏红花提取液可能通过降低 视网膜内的自由基,阻断自由基对RGC膜性结构,亚细胞器及 细胞核的损伤,对RGC起保护作用. 综上所述,藏红花提取液能降低全血比黏度,改善视网膜 血液循环;并降低高眼压造成的自由基增加,对RGC有保护作 用. 4参考文献 r1]BakalashS,KipnisJ,YolesE.Resistanceofretinalganglioncells tOanincreaseinintraocularpressureisimmune—dependent.Invest OphthalmolVisSci,2002,43:2648—2653. r2]NeufeldAH,DasS,VoraS.Aprodrugofaselectiveinhibitorof induciblenitricoxidesynthaseisneuropr0tectiveintheratmodel ofglaucoma.JGlaucoma,2002,11:221—225. [3]朱传义.藏红花综合利用研究.中药通报,1981:37—38. [4]曹春林.中药药剂学.上海:上海科学技术出版社,1986. [5]徐岩,陈祖基.复方卡波姆诱发的兔高眼压模型与其它兔高眼压 模型的比较研究.中华眼科杂志,2002,38:172—175. [6]宗颂梅,李宗友.藏红花的最新研究进展.国外医学中医中药分 册,1997,19:2O一21. [7]白禹诗,关家秀,皮静波.外源性SOD对兔急性高眼压致视网膜 损伤保护作用的研究.中华眼科杂志,1997,33:429—432. [8]龚国清,刘同征,李立文,等.西红花酸的体外抗氧化作用的研究. 中国药科大学,2001,32:306—309. (收稿日期:2006—03—06) (本文编辑:朱敏) 重组逆转录病毒pLXSN一脑源性神经营养因子在 小鼠胚胎细胞中的表达 李鸿翼原慧萍周欣荣邵正波周雪美 【关键词】脑源性神经营养因子;逆转录病毒科;基因 中图分类号:R373.5R349.64 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30471844);哈尔滨医科大学研 究生创新基金资助项目 作者单位:150086哈尔滨医科大学附属第二医院眼 通讯作者:原慧萍,Email:yuanhp@yahoo.com