两种革兰氏阳性杆菌染色体DNA提取方法简介

两种革兰氏阳性杆菌染色体DNA提取方法简介 统疾病 ;其死者分别占死亡总数的 30 . 67 % 、,0 - 岁组和 60 岁以上人群是死亡高危著 28 . 28 % 、15 . 42 % 、7 . 20 %和 3 . 42 % 。而 农 群 ,各个年龄组的主要死因又各不相同 。 市的平均死亡率虽略高于农村 ,但没有明 村的则为心血管疾病 、呼吸系统疾病 、肿瘤 、 的区别 ,其原因是多方面的 ,城市人群物质意外死亡和未明原因死亡 ; 其死者分别占死 亡 总 数 的 35 . 74 % 、18 . 06 % 、17 . 71 % 、 文化生活发达 ,普遍受教育程度高 ,自我保 意识强 ,社会卫生服务健全 ,但较农村污染 8 . 40 %和 4 . 85 % 。 重 ,社会压力大 ,精神负担重等 。七年来 , 1991, 1997 年 死 于 前 三 位 死 因 者 占 总 死亡 数 的 72 . 1 % , 城 市 点 占 总 死 亡 数 的 因的前三位一直是心血管疾病 、恶性肿瘤 74 . 4 % ,农 村 点 为 71 . 5 % , 也 就 是 说 不 论 城 呼吸系统疾病 ,传染性疾病的死亡率随着 市或农村 ,前三位死因的死亡数都超过总死 民经济的发展 、社会卫生服务水平的提高 亡数的 70 % 。如 果 城 市 点 和 农 村 点 年 平 均 渐下降 ,意外死亡则趋于上升 。未明原因 亡率排位较靠前 ,其原因值得进一步研究 。死亡率分死因做一比较 ,肿瘤 、意外死亡 、未 明原因死亡和感染性疾病差异显著 ,其余则 未来 30,40 年 ,中国中老年人口将分 差异不显著 。 增加 2,3 倍 ,逐渐向老龄化社会过渡 ,患 性病的总数将比现在多得多 ,并且随着经 各个 年 龄 组 的 主 要 死 亡 原 因 又 不 甚 相 同 ,新生儿的前三位死因为呼吸系统疾病 、感 发展 、教育以及社会组织的完善 , 城市化 、 染性疾病和围产期的呼吸窘迫综合症 ; 青少 业化逐渐形成 ,人群中出生率下降 。慢性病 年则是意外死亡 、呼吸系统疾病和感染性疾 性传播疾病 、意外伤害逐渐成为危害人类 病 ,值得注意的是 ,青少年死于恶性肿瘤有增 康的主要卫生问题 ,因此应开展死亡监测 加的趋势 ;而老年人则主要是心血管疾病 、恶 别是慢性病的监测和防治 ,加强老年医疗 性肿瘤和感染性疾病 。这提示我们应该根据 生保健服务 ,使之成为预防保健的重点 。不同的 年 龄 构 成 采 取 不 同 的 防 病 和 治 疗 措 参 考 文 献 施 ,才能有的放失 ,达到事半功倍的效果 。 1 . 宋扬 ,王燕 ,邓颖. 四川省疾病监测点 1992,1996 年死 ( ) 讨论与小结动态分析 ,疾病监测 ,1998 ,13 7?266 () 1998 年 9 月 17 日收稿 、12 月 24 日修定本文分析显示 : 年龄组的死亡率差别显 两种革兰氏阳性杆菌染色体 DNA 提取方法简介 1 22 2梁旭东蔡洪涛 李忠福陈卫民 为了能够快速 、高产量的获得革兰氏阳Joe . shaw 博 士美国宾西 法 尼 亚 州 立 大 学 帮助 ,向我们提供了他们各自实验室用于 性杆菌染色体 DNA ,我们获得了美国路易斯 备革兰氏阳性杆菌染色体 DNA 的方法 。 安娜 州 立 大 学 Martin . Hugh - Jo nes 教 授 和 们在实验室应用这两种方法均获得了满意 1 中国 预 防 医 学 科 学 院 流 行 病 学 微 生 物 学 研 究 所 革兰氏阳性杆菌染 色 体 DNA 。现 将 两 种 ( )102206 法介绍如下 。 2 内蒙古兴安盟乌兰浩特市卫生防疫站 1 . 菌 株 : 炭 疽 杆 菌 84 株 , 蜡 样 杆 菌 16200ul 三蒸水溶解 ,置 - 20 ?备用 。后用 ) 株 ,苏云金杆菌 2 株 ,枯草杆菌 2 株 。2在 LB 肉汤培养基中振汤培养细菌 12 2 . 主要试剂 :蛋白酶 K、十六烷基三甲基 ,16 小时 ,收集 3 ml 细菌培养物 , 用 0 . 85 % 溴化铵 、RNaSeA 购自华美生物工程公司 。 的 NaCl 溶液洗涤细菌沉淀物 1 次 , 加 400ul ) ( ) ( ) 蔗糖溶 液 6 . 7 %, 40ul 溶 菌 酶 10 mg/ ml , 3 . 方 法 : 1从 40 mlLB 培 养 基 中 收 集 菌 ( ) 悬液 ,用 100 %的无水乙醇洗涤一次 ,弃上清 10ul RNaSeA 10 mg/ ml , 混 匀 置 37 ?孵 育 ( ) 液 ,加入 8 . 5 ml T E 垂悬细菌沉淀物 , 放置在 30,45 分钟 ,加 100ul SDS 溶液 10 %,充分 液氮中完全冻结 ,再转至 65 ?水浴中完全融 混匀置 37 ?裂解 30 分钟 , 加 10ul 蛋白酶 K () 化 ,重复 3 次 ,加入 450 ml10 %SDS 溶液 、45ul 溶液 20 mg/ ml,充分混匀置 65 ?孵育 30 分 ( ) () 蛋白酶 K 溶 液 20 mg/ ml 彻 底 混 匀 置 42 ? 钟 ,用等体积的酚和氯仿 1?1抽提 2,3 次 , 温育 1 小时 ,加入 1 . 5 ml 5M NaCl 溶液充分 上清液加 1/ 10 体积的 3M 醋酸钠和 2 . 5 倍 混匀 ,加入 1 . 4 ml 含 10 %十六烷基三甲基溴 体积的冷乙醇沉淀 , 离 心 沉 淀 DNA , 自 然 干 化铵的 0 . 7MNaCl 溶液充分混匀 ,置 65 ?水 燥后用 100ul 三蒸水溶解置 - 20 ?备用 。 浴中孵育 30 分钟 ,加入等体积的酚 、酚 - 氯 上述两种方法均能够获得较为理想的革 兰氏阳性杆菌染色体 DNA 。 仿 、氯仿各抽提 1 次 ,上清液加入 2 倍体积的 冷无水乙醇沉淀 , 离 心 沉 淀 DNA , 自 然 干 燥 一起炭疽病暴发的调查报告 ()车代铭 李太尧贵州省开阳县卫生防疫站 550300 1997 年 8 月 24 日贵州省开阳县米坪乡月 5 日 1 例 ,9 月 11,13 日 2 例 ,共 12 例 ,死 () 大坝村发生了一起炭疽病暴发流行 ,发病率亡 1 例 李某 1997 年 8 月 20 日死亡。发病 () () 最小年龄 5 岁 、最大 58 岁 ,18 , 50 岁发病 9 3 . 8 % 12/ 312,病死率 8 . 3 % 1/ 12。 米坪 乡 1993 年以前曾发生过散在炭疽 例 ,占 75 % 。除 1 例患者是幼儿外 , 其余 11 病 。1997 年 7 月 31 日米坪乡大坝村村民李 例都是农民 。男发病 9 例 ,女 3 例 。12 例炭 (某途经高岩村发现一匹死马骨头 ,拖回家中 疽病中皮肤型 11 例 ,占 91 . 6 % ,混合型 肠道 ) 放在猪 、牛 圈 处 , 煮 骨 头 汤 喂 猪 。1997 年 8 和皮肤型并存1 例 、占 8 . 4 % 。Ascolis 试验 月 3 日李某猪 、牛死亡 ,立即请 7 人杀猪剖牛 均呈阳性 。 食用和销售 ,由于在解剖途中 ,李某未洗手就 疫情发生后 ,通过防疫和兽医部门采取 ( 拿西红柿吃 ,8 月 4 日发病 主要表现手 、背 、 综合性防制 ,控制了疫情的扩展 ,在医学 ) 胸部 出 现 疱 疹 和 胃 肠 道 症 状, 8 月 10 , 18 观察 15 天后未发生新病人和新病畜 。 日又发病 4 例 ,8 月 21,25 日再发病 4 例 ,9