[doc] 家猫非繁殖季节诱导发情配种后排卵时间的确定

[doc] 家猫非繁殖季节诱导发情配种后排卵时间的确定 家猫非繁殖季节诱导发情配种后排卵时间 的确定 ?72?遗传繁育中国畜牧兽医2008年第35卷第1O期 家猫非繁殖季节诱导发情配种后排卵时间的确定 鲍文玉,刘云海,郭勇,徐杨,邬静,倪和民 (北京农学院动物科学技术系,北京102206) 摘要:作者尝试在非繁殖季节应用外源促性腺激素对家猫进行人工诱导发情,并判断其较为准确的排卵时间.试验采用 PMSG两次注射法对雌性家猫进行诱导发情,注射总剂量为150IU,PMSG处理后的第6d肌肉注射hCG(100Iu/只)并合笼 配种.分别于合笼后的24,3O,36h手术法摘除家猫卵巢及输卵管部,观察卵巢排卵情况并对排卯侧的输卵管进行冲胚. 试验结果显示,利用外源性促性腺激素可使家猫在非繁殖季节发情,且排卯时间范围为合笼配种后30h左右. 关键词:家猫;非繁殖季节;排卵 中图分类号:$829.3文献标识码:A文章编号:1671—7236(2OO8)10—0072—03 家猫是猫科动物中唯一一种没有被列为珍稀或 濒临灭绝的动物,具有易于饲养,可大量繁殖的特 点,可作为研究猫科动物人工辅助增殖的动物模型, 对保护其它濒临灭绝的猫科动物具有很重要的借鉴 意义.家猫是季节性发情及刺激排卵动物,通常春 秋两季发情,并且需要通过交配刺激才能够排卯. 目前,对于家猫的排卵时间的说法不一,有报道称家 猫在配种后24436h排卵,也有人认为是在配种48 h以后才排卵(Shille等,1983;Schramm等,1995; Wildt等,1981;文端成等,2004).而准确的排卵时 间的确定,则是研究胚胎发育及其它辅助生殖技术 的关键,利用促性腺激素对猫非繁殖季节诱导发情 的报道也比较少见;本试验利用PMSG/hCG对非 修回日期:2008-07—31 作者简介:鲍文玉(1983一),女,北京人,硕士生,研究方向:动物 产科及胚胎工程. 通讯作者:倪和民(1962一),男,副教授,研究方向:动物产科及 胚胎工程.E—mail:niheming@yahoo.com 基金项目:北京市教育委员会科技发展计划重点项目 (KZ200510020013);北京市教育委员会科技发展计 划面上项目(KM200710020006);2007年度教育部 留学人员科技活动择优资助项目(启动类). 繁殖季节的家猫进行诱导发情,记’录其配种后不同 时间的排卵情况,以期获得较为有效的诱导发情的 方法和相对准确的排卵时间,为猫科动物生殖生理 等方面的研究提供参考. 1材料和方法 1.1试验动物身体健康的1岁左右雌性家猫15 只,雄性配种用家猫5只,经过洗澡和药浴,每天投 喂猫粮早晚各1次,自由饮水,笼养. 1.2主要药品和试剂PBS冲卵液(自制),TCM一 199(Gibco),胎牛血清(FCS,Hyclone公司),PMSG (宁波),hCG(宁波),氯前列烯醇(上海),速眠新? (军事医学科学院). 1.3家猫的诱导发情及配种家猫需饲养一段时 间以减少应激反应,在其适应了生活环境后开始进 行激素的处理.将家猫带上伊丽莎白脖圈后置于手 术车上,两人分别保定猫的两前腿和后腿,一人根据 试验所需剂量肌肉注射激素.激素采用PMSG/hCG 联合使用.具体为:第1d上午9:00家猫肌肉 注射100IUPMSG,第2d上午9:00家猫肌肉注射 50IUPMSG,随后观察家猫发情情况,于发情后的 第2d即PMSG处理的第6d肌肉注射100IUhCG Abstract:Primersdesignedaccordingtopublishedliteraturesandthegeneseq uencesofchickenandgoosewereusedto amplifythecodingsequenceofMC4Rgene(985bp).Thehomologyofthisseq uencewithotheranimals(chicken,goose,Mo— nodelphis,Alopexanddog)was94,93,82,82and82%respectivelythroughBlastnofGenBank.SNPsofMC4R SSCPanalysi genecodingsequencewereidentifiedandgenotypedbyPCR— sandDNAsequencingintwopigeonpopulations.2 SNPsweredetectedintheresearchandanalyzedbytheleastsquareanalysis,theresultshowedthatthegenotypeofA903G mutationhadsignificantassociationwithbodyweight,carcassweightandholo—carcassweight(P%0.05)inmeatpigeonbuthad noassociationinthewildpolSulation(P~0.2).TheresultsofmultiplecomparisonrevealedthatAAbirdshadsignificanthigher bodyweight,carcassweightandho1o—carcassweightthanBBbirds.Wecan putativelydrawtheconclusionthatMC4Rgene wasthemajorgeneaffectingthebodyweightinpigeonorlinkedtothecertainmajorgene. Keywords:MC4Rgene;polymorphism;growthtraits;pigeon 中国畜牧兽医2008年第35卷第1O期遗传繁育?73? 后与公猫合笼配种,合笼时间为24h. 1.4子宫卵巢切除分别于家猫配种后的24,3O, 36h采用手术方法将子宫和卵巢切除.家猫按0.1 ml/kg剂量肌肉注射速眠新,待其进入麻醉状态后 保定于手术床上.常规剪毛,消毒后,于肚脐下 2cm左右划开皮肤,钝性分离脂肪后,延腹白线剪 开腹膜,创口约3cm左右.沿腹壁将子宫和卵巢拉 出创口,结扎后将卵巢和子宫切除放于37~C生理盐 水中. 1.5记录卵巢和胚胎收集情况观察卵巢情况,有 红体视为排卵,记录红体数.若有排卵点,则将该卵 巢一侧的输卵管剪下,由输卵管冲胚,记录冲胚数. 2结果与分析 2.1诱导发情在注射PMSG后3,6d,15只家 猫均有发情现,表现为焦躁不安,食欲减退,尾巴 不时高举,喜欢在物体上摩擦头颈,喜欢接近和接触 公猫. 2.2家猫配种后24h排卵情况从表1可见,家 猫在配种24h组大多未排卵,3号家猫卵巢上虽有 排卵点,但排卵数非常少. 表1家猫配种后24h排卵情况 注:R表示右侧卵巢.L表示左侧卵巢.下同. 2.3家猫配种后30h排卵情况从表2可见,家 猫配种后30h组卵巢上均有排卵点,家猫6,7,8可 以从相应输卵管中回收到胚胎. 表2家猫配种后30h排卵情况 2.4家猫配种后36h排卵情况从表3可见,家 猫配种后36h组卵巢上均有排卵点,且能从相应输 卵管中回收到胚胎,胚胎的回收率较30h组高. 表3家猫配种后36h排卵情况 3讨论 长期以来,以家猫作为动物模型研究猫科动物 生殖生理及胚胎发育的甚少,家猫作为季节性发情 动物,且具有需要交配刺激才能排卵的特点,其胚胎 的获得相对较难.家猫在春秋两季发情,一般要经 历11月,次年2月这一较长的乏情期,如果能充分 利用这一较长的时问段使家猫在人工诱导下发情并 配种,可以获得更多的胚胎以增加生产效率. 本试验中,利用PMSG结合hCG的使用来诱 导母猫发情具有一定的效果.15只母猫经人工诱 导发情处理后均在非繁殖季节有发情表现.通常采 用PMSG/hCG法对母猫进行超排的剂量在100, 200IU不等,wildt给每只母猫肌肉注射100IU PMSG,84h后注射100IUhCG获得了较好的效 果.由于在该试验预试验阶段采用过单次注射 PMSG的方法,注射剂量为200IU,但与分次注射 方法相比其诱导发情的效果并不好.考虑到本试验 是在非繁殖季节对猫进行诱导发情,其卵巢也处于 相对静止的状态(Toshihiko等,2000),因此采用分 2次注射法以提高诱导发情的效果.本试验中,在 注射PMSG后的第3,4,5d均有母猫发情的表现, 发情时间不同可能是由于个体差异及对激素的敏感 度不同所致.由于猫可以一直保持发情直到配种, 因此选在第6d注射hCG并合笼配种是恰当的. 猫是反射介导的诱导性排卵动物,如果没有交 配或类似的刺激则不能排卵.交配时,阴茎可能会 引起阴道的后部膨胀,通过神经内分泌反射性引起 丘脑下部释放GnRH.几分钟内LH达到峰值,多 次交配LH峰值比单次交配更高,持续时间更长. 排卵率与LH峰值的幅度直接相关,LH释放越多 意味着排卵越多(Banks等,1982;Tsutsui等, ?74?遗传繁育中国畜牧兽医2008年第35卷第1O期 1989).通常认为猫的配种时问需要2d,在这期间 公猫可以多次与母猫完成交配,多次的交配刺激可 以引发更为充分的排卵.而本试验旨在探讨家猫配 种后的排卯时间,因此试验中的配种时间定为24h, 避免由于多次交配刺激引发间隔时间较大的排卵情 况.在试验前期阶段,试图将试验分成24,36和 48h组,通过前期的预试验发现,36h组和48h组 都有排卵现象,说明36h就已经排卵,因此将试验 组调整为24,30和36h组,以期获得更为准确的家 猫的排卯时间.在注射hCG并配种后24h组中,4 只猫的卵巢上均未见排卵点,而有大量充满卵泡液 的大腔卵泡.这可能是交配刺激后在这一时间段内 GnRH的释放导致LH分泌存在一定的延缓期,短 时间内不能达到LH的释放高峰,因此未有排卵. 24h组的3号母猫卵巢上发现有少量的排卵点,可 能是与公猫的交配频率较高或交配刺激较大有关, 但与其它时间组相比排卵量仍然较少. 配种后30h组和36h组中,卵巢上均见有大 量鲜红色的排卵点,有些排卵点甚至连在一起形成 大片的排卵区域,排卵数大多高于自然发情的猫6 , 13枚左右.30h组平均排卵点为11个,36h组 为21.8个,这可能是由于在合笼的24h内,临近结 束合笼时间的配种产生的刺激在30h的时候还未 引发排卵,而36h则经过了LH的释放高峰,从而 得到更多的排卵数.从试验结果看,在配种后3O h,猫就普遍开始排卵,并能够从输卵管中收集到带 有几层颗粒细胞的受精卵.试验中,30h组的1O 号家猫,左侧卵巢上无排卵点,是由于在手术过程中 发现其左侧卵巢异于正常家猫,卵巢显着小于正常 家猫,且输卵管和伞部界限明显不清,看不到明显的 输卵管弯盘旋状,判定其为病理状态. 本试验中从见到排卵点卵巢侧的输卵管中收集 受精卵,但回收率并不高,可能是因为猫的输卵管外 包有一层紧密的系膜,紧紧的将输卵管包裹在一起, 与输卵管伞共同形成囊状结构,且输卵管本身呈螺 旋状,有很多拐点,冲卵液不易通过造成.另外,本 试验中选择的冲卵时间和排卵时间较为接近,有些 卵刚刚排出还未进人到输卵管较深的部位,经过对 输卵管的切除和剔除输卵管部的系膜等步骤,比较 容易丢失,是造成胚胎回收率低的主要原因. 参考文献 DeterminationoftheOvulationDurationforDomesticCatsafter Super0Vulati0nduringtheirNon—breedingSeasons BAOWen—yu,LIUYun-hai,GUOYong,XUYang,WUJing,NIHe-min (DepartmentofAnimalScienceandTechnology,BeijingUniversityofAgriculture,Beijing102206,China) Abstract:TheaimofthisstudyiStodeterminetheovulationdurationofdomesticcatsaftersuperovulationduringtheir non-breedingseasons.Afterthetreatmentwithtwiceinjectionof150IUofpregnantmares’serum,thehotqueenswereinjec— tedwithhCG(100IUpercat)afterthetreatmentwithPMSGandallowedtocoituswithmalesinfollowing24h.Theovulation assessmentwasinitiatedin24h,30hand36hafterthefirstcopulationbyovario hysterectom,andtheembryoswererecovered fromtheoviducts.Theresultsshowedthatalladultsrespondedwithartificiallyinducedestrusduringthenon-breedingsea— sons,andtheovulationinmostqueenswasmainlyinitiatedin30hafterthefirstcopulation. Keywords:domesticcat;non-breedingseason;ovulation 一一一一一一一一一一一一一一一一,,,一一一一一一一,一 一一一一一一一,一一一,一 12345678