EB病毒转基因小鼠血生化及白细胞分类的观察

EB病毒转基因小鼠血生化及白细胞分类的观察 EB病毒转基因小鼠血生化及白细胞分类的 观察 第27卷第1期 2010年2月 实验动物科学 LAB0RAT0RYANIMALSCIENCE V01.27No.1 February2010 EB病毒转基因小鼠血生化及白细胞分类的观察 康爱君郭长占田枫王学文郑振辉.赵德明 (1.中国农业大学动物医学院,北京100094) (2.北京大学医学部基础医学院免疫学系,北京100191) (3.北京大学医学部实验动物科学部,北京100191) 摘要:目的探讨EB病毒(Epstein—BarrVirus,EBV)BLLF1基因转基因小鼠的部分血生化指标改变和白细胞特性, 为该模型小鼠的进一步应用提供基础数据.方法选取2月龄和4月龄的EBV转基因小鼠及KM小鼠的血清测 定谷丙转氨酶(GPT),谷草转氨酶(GOT),总蛋白(TP),白蛋白(ALB),尿素氮(BUN)和肌酐(CRE),观察其肝.肾功 能;并测定总胆固醇(Tc),甘油三酯(TG)和血糖(GLU);取全血测定白细胞总数(WBC)及其分类.结果EBV转 基因小鼠血清中的GOT,TP,ALB,BUN,CRE,TC和TG与同周龄同性别的KM小鼠相比,均存在显着性差异;EBV 转基因小鼠的WBC总数以及中性粒细胞百分比(GRN%)与同周龄同性别的KM小鼠相比显着升高,而淋巴细胞 百分比(LYM%)显着降低.结论通过对EBVBLLF1基因转基因小鼠的部分血生化指标改变和白细胞特性的观 察,为该小鼠的应用提供了基础资料. 关键词:EB病毒;转基因小鼠;血清生化学;白细胞 中图分类号:R373文献标识码:A文章编号:1006—6179(2010)01—0001—04 EBV在人群中的感染很普遍,流行病学调查以 及临床病例研究发现EBV感染和人类若干种免疫 系统的疾病密切相关,如系统性红斑狼疮疾病 (systemiclupuserythematosus,SLE)?.SLE是一种 以产生大量自身抗体为特征的自身免疫性疾病,产 生的抗体可以沉积于皮肤,关节,肾脏等部位引起相 应的病变.近年来流行病学调查发现,在青年和成 年SLE患者中EBV的感染率及血清EBV抗体的滴 度明显高于正常人”,且研究还发现一些人在感 染EBV的同时或之后发生了SLEf5,63.EBV感染后 可表达9种蛋白,如潜伏膜蛋白(1atentmembrane protein,LMP)和核蛋白(nuclearantigen,NA)在潜伏 感染时表达,膜蛋白(membraneantigen,MA)在病毒 活化感染时表达.膜蛋白在病毒感染宿主细胞时发 挥重要作用,即膜蛋白可作为配体结合于宿主细胞 膜的受体上从而介导病毒感染.为了探讨EBV膜 蛋白BLLF1基因在致病中的作用,郭长占等首次 以KM小鼠为背景用BLLF1基因制备了转基因小 鼠,并发现基因的表达可引起SLE.本文以此小 鼠为对象,观察了不同性别和年龄的该模型小鼠血 生化改变和白细胞特性,为该小鼠的应用提供基础 资料. 1材料和方法 1.1实验动物 SPF级EBVBLLF1基因转基因小鼠80只,其 中2月龄40只,4月龄40只,雌雄各半;遗传背景 相同的非转基因KM小鼠80只,其中2月龄40只, 4月龄40只,雌雄各半.饲育在北京大学医学部实 验动物科学部,实验动物生产许可证为SCXK(京) 2006-0008. 1.2仪器和主要试剂 1.2.1仪器:日立7170A全自动生化分析仪,MEK. 6318K血液分析仪. 1.2.2主要试剂:血清检测试剂为北京中生北控生 收稿日期:2009—09—02 基金项目:国家自然科学基金面上项目(30171043) 作者简介:康爱君,女,硕士,主要从事疾病动物模型研究.E-mail:kangaijun1028@163.toni 通讯作者:赵德明,男,教授,博导,主要从事动物病理学研究.E.mail:zhaodm@edu.cau.cll , 驴着驴驴论驴驴.驴驴究《》驴研驴 ? 2?实验动物科学27卷 物工程科技有限公司产品. 1.3方法 1.3.1血清生化值的检测:小鼠眼眶内眦采血,离 心分离血清,应用全自动生化分析仪检测生化指标., GOT和GPT的测定应用IFCC推荐法,TP的测定应 用双缩脲法,ALB的测定应用溴甲酚绿法,BUN的 测定应用尿素酶法,CRE的测定应用Jaffe法,GLU 的测定应用葡萄糖氧化酶法,TC和TG的测定应用 氧化酶法. 1.3.2血细胞的检测:小鼠眼眶内眦采血,微量取 血管取全血20L,用2mL稀释液稀释,应用血球 计数仪计数. 1.4统计学方法 应用Excel2003和spssl3.0forwindows统计软 件进行统计学分析,数据以元?S表示. 2结果 2.12月龄及4月龄EBV转基因小鼠肝肾功能血 生化指标的变化 2月龄雄性EBV转基因小鼠血清中的GOT与 同龄对照组KM小鼠相比显着升高,(P<0.05);2 月龄雌性EBV转基因小鼠血清中的TP水平与同龄 对照组KM小鼠相比显着升高,有极显着差异(P< 0.01);2月龄雌性EBV转基因小鼠血清中的ALB 水平与同龄对照组KM小鼠相比显着升高,有显着 差异(P<0.05);2月龄雄性EBV转基因小鼠血清 中的BUN与同龄对照组KM小鼠相比显着升高,(P <0.01);2月龄雌性及雄性EBV转基因小鼠血清 中的CRE水平与同龄对照组KM小鼠相比均显着 升高,有极显着差异(P<0.01).见表1. 4月龄雄性EBV转基因小鼠血清中的GOT与 同龄对照组KM小鼠相比显着升高,(P<0.01);4 月龄雌性及雄性EBV转基因小鼠血清中的ALB, BUN,CRE水平与同龄对照组KM小鼠相比均显着 升高,有极显着差异(P<0.01),见表1. 2.22月龄及4月龄EBV转基因小鼠血糖和血脂 的变化 2月龄雌性EBV转基因小鼠血清中的TG水平 与同龄对照小鼠KM相比极显着升高(P<0.01);2 月龄雄性EBV转基因小鼠血清中的TC水平与同龄 对照小鼠KM相比极显着降低(P<0.01);4月龄 雌性及雄性的EBV转基因小鼠血清中的TG水平与 同龄对照小鼠KM相比极显着升高(P<0.01);4 月龄雄性EBV转基因小鼠血清中的TC水平极显着 降低(P<0.01);GLU水平与同龄对照组KM小鼠 相比没有差异,见表2. 表1EBV转基因小鼠和KM小鼠肝肾功能血生化指标比较(x-i-) 注:与同龄同性别KM小鼠比较:P<0.05,一P<0.01 表2EBV转基I~ld,鼠和KM小鼠的血糖,血脂指标比较(?) 注:与同龄同性别KM小鼠比较:P<0.05,’P<0.01 第1期康爱君等:EB病毒转基因小鼠血生化及白细胞分类的观察’3? 注:与同龄同性别KM小鼠比较:JP<0.05,P<0.01 2.32月龄及4月龄EBV转基因小鼠白细胞总数 和白细胞分类结果 2月龄及4月龄的EBV转基因小鼠全血中的 WBC总数与同龄对照小鼠KM相比显着升高,有极 显着差异(P<0.O1),中性粒细胞百分比(GRN%) 与同龄对照小鼠KM相比显着升高,有显着差异(P <0.05),而淋巴细胞百分比(LYM%)与同龄对照 小鼠KM相比显着降低,有显着差异(P<0.05),见 表3. 3讨论 以往的研究结果已经证实EBVBLLF1转基因 小鼠由于MA在其体内的表达而发生了SLE, SLE是一种系统性自身免疫疾病,可使多系统,多器 官受累.如引起狼疮性肾炎,临床表现血肌酐和尿 素氮持续升高,肾脏功能逐渐减退.本研究结果也 发现EBV转基因小鼠在2月龄和4月龄时体内肌 酐和尿素氮水平显着升高了,这一现象作者将会结 合组织病理学做进一步探讨. 据报道临床SLE患者常存在不同程度的脂代 谢异常.由于SLE患者体内存在的大量致病性 自身抗体与自身抗原结合形成的免疫复合物沉积于 肾小球基底膜,引起肾小球系膜增生和肾小球硬化, 肾小球滤过屏障选择通透性被破坏,载脂蛋白,氨基 葡萄糖和酯酶辅助因子从尿中丢失,影响了脂质降 解酶的活性,极低密度脂蛋白(VLDL)转化和清除 减慢,导致血清TG水平增高.本研究也发现EBV 转基因小鼠体内血脂代谢出现异常情况,表现为TG 水平极显着升高,然而TC水平却降低了,这种脂代 谢异常情况的出现,值得进一步关注. SLE引起的血液学改变较常见,但其表现却是 多种多样,无明显特点,其中贫血伴白细胞减少较为 多见...而SLE患者白细胞升高大多与感染有关, 本研究中我们发现EBV转基因小鼠白细胞总数和 中性粒细胞百分比较对照组小鼠显着升高,这一表 现与小鼠患SLE后合并微生物感染是否有关有待 进一步探讨. 综上所述,通过对EBVBLLF1基因转基因小鼠 的部分血生化指标和白细胞特性观察,为该模型小 鼠的进一步应用提供了基础资料. 参考文献 BarzilaiO,RamM,ShoenfeldY.Viralinfectioncaninducethe productionofautoantibodies[J].CurtOpinRheumatol,2007,19 (6):636—643. VerdoliniR,BugattiL,GiangiacomiM,eta1.Systemiclupus erythematosusinducedbyEpsteineBarrvirusinfection[J].BTJ Dermatol,2002,146(5):877,881. BarzilaiO,ShererY,RamM,eta1.Epstein-Barrvirusand cytomegalovirusinautoimmunediseases:aretheytrulynotorious. Apreliminaryreport[J].AnnNYAcadSci,2007,1108:567— 577. ArbuckleMR,McClainMT,RubertoneMV,eta1. Developmentofautoantibodiesbeforetheclinicalonsetof systemiclupuserythematosus[J].NEnglJMed,2003,349 (16):1526,1533. BhimmaR,AdhikariM,CoovadiaHM,eta1.EpsteineBarr virusinducedsystemiclupuserythematosus[J].SAfrMedJ, 1995,85(9):899—900. 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CharacteristicsofBloodBiochemistryandLeukocytesinEBVTransgenicMice KANGAi—jun,GUOChang—zhan,TIANFeng,WANGXue—wen,ZHENGZhen—hui,ZHAODe. ming (1.CollegeofVeterinaryMedicine,ChinaAgricultureUniversity,Beijing100094,China) (2.DepartmentofImmunology,PekingUniversityHealthScienceCenter,Beijing100191,China) (3.DepartmentofLaboratoryAnimalScience,PekingUniversityHealthScienceCenter,Beifing10019 1,China) Abstraet:0bjeetiveToexaminesomeserLlmbiochemicalindexesandthecharacteristicofleukocytesin EBVtransgenicmice.MethodsGPT,GOT,TP,ALB,BUN,CRE,TC,TGandGLUofseracollectedfrom two.monthandfour—month—oldEBVtransgenicmiceaswellasnormalKMweremeasured.Thenumberand classificationofthewhole.bloodWBCswerealsodetermined.ResultsThereweresignificantdifferenee sinTP. ALB,BUN,CRE,TC,andTGlevelsbetweenEBVtransgenicandKMmice.Theobviousdifierenceswer ealso observedinthenumberandclassificationofWBCsbetweenEBVtransgenicandKMmice.ConclusionT he serumbiochemicalindexesandcharacteristicofleukocytesdeterminedbypresentstudyprovideimport antbasic referencesforscientificresearchandapplicationofEBVtransgenicmice. Keywords:Epstein—Barrvirus(EBV);Transgenicmice;Bloodbiochemistry;Leukocytecharacterist ics j’}I;}业jkrjs’}夸业业{夸I}宣;窖业夸;章夸;拿I窜r’}宣}韭窖;鲁业宣’};}韭韭自’}夸’}宣krjrj夸l章j.夸l鲁夸j;}j;j-}j’eI}I 关于《实验动物科学与管理》更名为《实验动物科学》的启事 《实验动物科学与管理》迄今已出版,发行了20多年,承蒙广大读者,作者的支持和厚爱及各届编委的 悉心呵护和辛勤耕耘不仅相继被评为”中国科技核心期刊”,”中国科技论文统计源期刊”和《中国学术期刊 综合评价数据库》来源期刊,而且所载全文或文献还被中国期刊全文数据库,万方数据一数字化期刊群,中 国生物文献数据库,中文生物医学期刊文献数据库,中文科技资料目录一医药卫生光盘数据库,中国实验动 物信息网络文献库和中国核心期刊(遴选)数据库等多家检索性期刊数据库收录. 随着我国生物技术的发展和应用,实验动物成为生命科学研究中不可缺少的”精密”科学仪器,并在未 来生命科学研究发展中占有重要的地位.为推动实验动物学这一基础学科的深化和系统发展,突出学科特 点,把握实验动物研究水平前沿,在符合现有学科发展的时代背景下准确定位,在广大读者和作者的一致建 议要求下,于2006年4月经国家新闻出版总署批准,自2007年1月起《实验动物科学与管理》将正式更名为 《实验动物科学》.由季刊改为双月刊. 《实验动物科学》主要刊载实验动物科学及其相关方面的理论和应用研究,技术与方法,专题评述等内 容,读者对象主要是从事医学实验动物,动物实验科研及生产应用的专业技术人员和科研管理人员,医药生 产研究,检验工作者,为其提供更广泛的学术交流与争鸣园地. 今后将继续秉承原有办刊原则,保持原有风貌,总卷目与其接续,刊期,邮发代号不变.新的国内统一连 续出版物号为:CN11.5058/N.所载文献及全文亦继续被上述检索期刊和数据库收录. 敬请广大科技工作者及管理工作者继续支持本刊工作,我们将以最真诚的服务回报大家的厚爱.欢迎 广大读者,作者踊跃订阅,投稿! 本刊编辑部