传染性法氏囊病毒VP2基因重组新城疫病毒疫苗的

传染性法氏囊病毒VP2基因重组新城疫病毒疫苗的 传染性法氏囊病毒VP2基因重组新城疫病毒疫苗的 传染性法氏囊病毒VP2基因重组新城疫病毒疫苗的 鸡胚免疫接种能使雏鸡出壳时至出壳后几天内就具有特异性主动免疫力,该方法具有提早免疫、应激反应低、注射精确且一致、劳动力成本低和疫苗污染少等优点,一直是国内外学者的研究热点。本研究选用达传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒株VP2基因重组新城疫病毒(NDV)Lasota疫苗株(rL-VP2),对其半数鸡胚感染量(EID_(50))、平均鸡胚致死时间(MDT)、脑内接种指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)等毒力指标进行了测定,结果表明重组病毒rL-VP2具有低致病性和高滴度鸡胚生长特性。选择18胚龄的SPF鸡胚,按不同的接种剂量经羊膜腔途径实施胚胎免疫接种。出雏后对不同剂量组的孵化率进行统计,并分别于出雏后的第9 d、第14 d和第21 d对免疫鸡血清中抗IBDV抗体和NDV抗体水平进行测定,结果显示按104 EID_(50)/egg剂量进行免疫不会影响SPF鸡胚出雏率和健雏率,并且能够使免疫鸡产生较高的抗体水平,因此确定104 EID_(50)/egg为rL-VP2实施胚胎免疫的最佳免疫剂量。在出雏后第4周,对10 4 EID_(50)/egg免疫组的雏鸡分别用IBDV强毒vvIBDV Gx株和NDV强毒F48E9株进行攻击,结果显示rL-VP2免疫鸡能对两种强毒的攻击产生100%的免疫保护,攻毒后对雏鸡的增重未见显著的影响(P0.05),免疫鸡的法氏囊组织在攻毒后未见明显的病理变化。本研究表明用重组病毒rL-VP2进行胚胎免疫具有较好的安全性和有效性,为同时预防IBD和ND的疫苗在胚胎免疫上的应用奠定了理论基础。 中文摘要9-10英文摘要10-11第一章 引言11-301 传染性法氏囊病研究进展11-16 1.1 传染性法氏囊病概述11-12 1.2 IBDV的基因组结构及其编码蛋白的功能12-15 1.3 IBD的防制15-162 新城疫研究进展16-23 2.1 新城疫概述16-17 2.2 NDV的生物学性状17-18 2.3 ND的诊断18-19 2.4 新城疫疫苗的研究进展19-22 2.5 利用新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展22-233 胚胎免疫研究进展23-29 3.1 胚胎免疫概述23-25 3.2 鸡胚免疫的免疫机理25-26 3.3 IBD的胚胎免疫研究进展26-27 3.4 ND的胚胎免疫研究进展27-28 3.5 胚胎免疫技术在预防其他疫病上的应用28-294 本研究的意义及主要内容29-30第二章 重组病毒 rL-VP2 的生物特性研究30-371 和方法31-34 1.1 疫苗毒、细胞和血清31 1.2 SPF鸡胚和SPF鸡雏31 1.3 主要试剂与仪器31 1.4 间接免疫荧光(IFA)VP2 基因的表达31-32 1.5 重组病毒rL-VP2 半数鸡胚感染量(EID_(50))的测定32 1.6 重组病毒rL-VP2 平均鸡胚致死时间(MDT)的测定32-33 1.7 重组病毒rL-VP2 脑内致病指数(ICPI)的测定33 1.8 重组病毒rL-VP2 静脉致病指数(IVPI)的测定33 1.9 重组病毒rL-VP2 的鸡胚生长特性测定33-34 1.10 数据分析342 结果34-36 2.1 IFA检测结果34 2.2 EID_(50)和MDT测定结果34-35 2.3 ICPI和IVPI测定结果35 2.4 重组病毒的鸡胚生长特性35-363 讨论36-37第三章 重组病毒rL-VP2 胚胎免疫最佳免疫剂量的研究37-431 材料与方法37-39 1.1 SPF鸡胚37 1.2 疫苗毒和NDV抗原37-38 1.3 主要试剂及仪器38 1.4 试验分组及蛋内接种38 1.5 血清中抗NDV抗体的检测38-39 1.6 血清中抗IBDV抗体的检测39 1.7 数据分析392 结果39-41 2.1 不同免疫剂量对出雏率和存活率的影响39-40 2.2 血清中抗NDV抗体水平测定结果40-41 2.3 血清中抗IBDV抗体水平测定结果413 讨论41-43第四章 重组病毒rL-VP2 胚胎免疫保护力研究43-491 材料与方法43-45 1.1 病毒43 1.2 SPF雏鸡43-44 1.3 主要仪器44 1.4 试验及攻毒方法44 1.5 攻毒后囊重比(F/B)及囊指数(BBIX)的测定44 1.6 法氏囊组织病理学观察44-45 1.7 数据分析452 结果45-47 2.1 攻毒保护效果45 2.2 胚胎免疫对雏鸡增重的影响45-46 2.3 攻毒后各免疫组囊指数(BBIX)的测定结果46-47 2.4 攻毒后法氏囊组织病理学分析473 讨论47-49第五章 结论49-50 参考文献 50-55致谢55-56攻读学位期间发表的论文56