鞣花酸对HEK293细胞的DNA损伤毒性作用以及可能的氧化应激、溶酶体膜通透机制研究（可编辑）

鞣花酸对HEK293细胞的DNA损伤毒性作用以及可能的氧化应激、溶酶体膜通透机制研究（可编辑） 鞣花酸对HEK293细胞的DNA损伤毒性作用以及可能的 氧化应激、溶酶体膜通透机制研究 鞣花酸对一细胞的损伤毒性作用以及可能的 氧化应激、溶酶体膜通透机制研究 王东 计:学位: 页 格:个 插 图: 幅 指导教师:陈敏副教授 申请学位级别:硕士学位 专业名称:劳动黠环宽峭 论文提交日期:年月 论文日期:年月 学位授予单位:大连医科大学 学位授予日期:年月 评阅人: 答辩委员会主席:独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地 方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 蠹 学位论文作者签名: 签字日期:坦监』年』月立日关于学位论文使用授权的说明 《鞣花酸对一细胞的损伤毒性作用以及可能的氧化应激、 溶酶体膜通透机制研究》系本人在大连医科大学攻读硕士学位期 间在导师指导下完成的学位论文。本人及指导教师完全了解大连医科 大学关于保存、使用学位论文的规定,同意学校保留并向有关部门或 机构送交学位论文的复印件和电子版本,允许论文被查阅和借阅,同 意学校将本论文加入: .中国学术期刊光盘版电子杂志社??《中国博士学位论文全 文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》及相关 数据库。 .中国科学技术信息研究所??《中国学位论文全文数据库》 .国家图书馆 本人授权大连医科大学,可以采用影印、缩印或其他复制手段保 存、汇编学位论文,可以公布论文的全部或部分内容。 论文作者签名: 指导教师签名: 签字日期: 也年 月上日目 录 一、摘要一中文摘要? 二英文摘要? 二、正文一前言 一,日吾 二材料和方法 三结果四讨论五结论六参考文献 三、综述?/ 一综述? 二参考文献 四、致谢?鞣花酸对细胞的损伤毒性作用以及可能的 氧化应激、溶酶体膜通透机制研究 硕士生姓名:王东 指导教师:陈敏副教授 专业名称:劳动卫生与环境卫生学 摘要 目的:鞣花酸 ,,是广泛存在于各种具有软果或坚果的植物 组织中的一种天然多酚成分。多项研究结果表明,具有抗肿瘤、抗氧化、抗 炎、 抗细胞增殖、抗菌和抗病毒等生物学作用,同时已有研究报道具有损伤 活性。本研究通过观察致.细胞损伤,探讨对损伤可 能的毒性机制氧化应激和溶酶体膜通透,为评估对人类的健康影响提供试 验及理论依据。 方法:以细胞作为试验系统。通过单细胞凝胶电泳试验检测引 起体外细胞的损伤,评价的损伤毒性。为探讨其可能的 损伤机制,以’,’一二氢二氯荧光素和苯二醛分别测定 细胞内活性氧以及还原性谷胱甘肽水平,以免疫组化方法检测 细胞内一羟基脱氧鸟苷的表达水平,以吖啶橙和罗丹明 分别测定细胞内溶酶体膜稳定性和线粒体膜电位的改变水平, 通过一乙酰半胱氨酸干预试验观察氧化性损伤对损伤的影响,通 过氯化铵干预试验观察溶酶体膜稳定性对损伤的影响,通过地昔 ,组织蛋白酶 帕明,酸性神经鞘磷脂酶的抑制剂和抑胃肽 的抑制剂干预试验观察溶酶体内酸性水解酶对损伤的影响。试验结果用.统 计软件进行统计分析。 结果:作用于.细胞小时后,引起链断裂,细 胞成彗星样拖尾,与空白对照组比其尾长明显增长,尾%增大;同时, . 作用于细胞 后,可致细胞内的表达水 平升高;作用于.细胞小时后,细胞内生成增加、 水平下降;一作用于一细胞小时后,细胞内溶酶 体膜稳定性下降,线粒体膜电位水平变化不明显。用、、地昔帕明和 抑胃肽四种干预剂预处理后,引起的链断裂、细胞内以及溶酶体膜 通透都有明显地减弱,说明上述四种干预剂的保护作用十分显著。结论:高浓 度能够引起细胞损伤,对.细胞具有损伤 毒性。可引起细胞内生成增加,细胞内抗氧化物质减少, 使细胞处于氧化应激状态,并使.细胞内氧化性损伤标志性产物 表达增强。抗氧化剂在降低了细胞内水平的同时,减弱引 起的链断裂程度,表明对.细胞的损伤毒性与氧化 性损伤有关。引起.细胞内溶酶体膜稳定性下降,对引起的 溶酶体膜稳定性及引起的损伤具有保护作用,抑胃肽和地昔帕明减弱了 引起的链断裂,这说明引起的细胞损伤的机制与溶 酶体有关,并且溶酶体内酸性水解酶可能在损伤毒性方面发挥重要作用。 关键词:鞣花酸损伤氧化应激溶酶体膜通透线粒体膜电位 ?一: :? : :? ,,, .,,. .?,.:一 . .一, ,?;; .一,, ... :., , . . “ .一;一 .,, , /,,一. :, . , . 晰 ,, ., 谢廿 ,, .: 鞣花酸对一细胞的损伤毒性作用以及可能的 氧化应激、溶酶体膜通透机制研究 硕士生姓名:王 东 指导教师:陈敏副教授 专业名称:劳动卫生与环境卫生学 月 舌 鞣花酸是一种在日常饮食中常见的多酚类化合物,主要存在于各种各样 的植物中,包括浆果、水果、坚果和蔬菜等【’】。近年来因为有着丰富的生物学 活性而受到广泛关注。已有研究表明具有很强的抗癌活性。随着对鞣花酸的不 断深入研究,一些小鼠和人组织体外和体内试验证实对许多种肿瘤都有很好的 治疗效果,特别是对白血病、结肠癌、食道癌、膀胱癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、 前列腺癌和皮肤癌的治疗效果十分明显。具有抑制致癌物的代谢活性的作用, 可以直接解除致癌物的毒性,还可以清除致癌物,与致癌剂的活性代谢物结 合形 成无害的化合物,从而使得致癌剂不能与细胞结合。另外,还具有诱导 肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤细胞增殖的作用】。的另外一个重要活性是抗氧化活 性。鞣花酸化学结构中含有许多容易被氧化的酚羟基,因此它可以在一定程度上 保护其他物质免被氧化。有试验表明鞣花酸可以增强谷胱甘肽结合反应关键酶谷 胱甘肽转移酶 ,平,起到抗氧化作用【】。除了 具有抗癌、抗氧化活性外还具有抗炎活性【】。同时,还具有促进凝血、抑菌、抗 疟原虫、保肝等【生物学作用。正是因为这些生物学活性被广阔的应用于药 品、食品及化妆品等领域引。然而,随着摄入量的加大潜在的毒性作用也可 能逐渐增加。 作为日常饮食中常见的植物化学物质,通常被认为是无毒的。目前关于 毒性报道的文章不多,但是已经有研究显示其具有一定的毒性作用。试 验中,对于鼠伤寒沙门氏菌株和无诱变作用【】。亚慢性毒性研究 显示,在对大鼠喂养处理天后,雄性大鼠没有明显变化而雌性 大鼠体重轻微改变 。然而,研究证实,在一定剂量下具有细胞毒性和 损伤毒性。细胞毒性试验显示,对中国仓鼠细胞具有细胞毒性,浓 度在时使细胞存活率降到%。同时,彗星试验显示处理中国仓鼠细胞 细胞株及河蚌消化腺细胞后细胞尾矩明显增加’ 】,说明具有 损伤毒性作用。本研究选用.细胞,通过观察致细胞损伤,探讨致 损伤的毒性作用及其可能的机制氧化应激和溶酶体膜通透,为评估对人类 健康潜在危害提供实验及理论依据。 材料和方法 .主要药品与试剂 购自美国?公司,号为??,纯度%。以 溶解,贮存液浓度为,常温保存。、’,’.二氢二氯荧光素 、苯二醛、溴化乙啶、吖啶橙、抑胃肽 均购自美国 、地昔帕、罗丹明 公司;低熔点琼脂糖和正常熔点琼脂糖购自英国 公司;抗.羟基脱氧鸟菅.单克隆抗体购自日本; 超敏试剂盒、显色试剂盒购于福州迈新生物技术开发有限公司;乙酰 半胱氨酸购自日本试剂公司;氯化铵购自天津市凯信化学 工业有限公司;培养基,胎牛血清为美国产品;其他试剂均为 分析纯。 .主要仪器 培养箱美国公司;型酶标仪美国.公司; 型超速离心机美国公司;.型冷冻高速离心机日 本公司;型电子天平、型电子分析天平上海精密仪器 科学仪器有限公司;型水平式电泳仪大连捷迈公司;.型荧光 分光光度计日本公司:型倒置显微镜、型荧光显微镜日 本公司;激光扫描共聚焦显微镜莱卡微系统,德国。 .试验方法 .细胞培养 .细胞来源于美国菌种保藏中心 .,购自中国协和医 科大学。细胞培养于含%胎牛血清及双抗青霉素/,链霉素/ 的高糖培养液中,在温度。,%的培养箱中培养,培养天左右 传代一次,取对数生长期细胞用于试验。 .单细胞凝胶电泳试验 ..细胞处理 选用对数生长期的.细胞,用.%胰酶进行消化,收集细胞,分别 加入终浓度为,, 的,同时设溶剂空白对照组,。孵箱 悬浮温育,细胞存活率经台盼蓝染色检测达到%以上,检测无 凋亡现象发生,离心去上清,用将细胞洗涤两次,重悬于中,使细胞浓 度最终达到 个/。 在干预试验中,分别用、、抑胃肽、地昔帕明四种干预剂对. 细胞进行预处理,达到干预目的。用.%胰酶消化收集对数期生长的 细胞,分别加入不同浓度的,,,,抑胃肽, 和地昔帕,做预处理温度,然后再各加入终浓度为 .,。孵箱温育,离心弃上清,用洗涤两次,最后将细胞浓度调 至×个/。 ..电泳 参照曲方法,略加改动。所有的载玻片,全磨砂玻璃片,盖玻片用% 的酒精浸泡 ,使用前均擦干、晾干备用。第一层凝胶制备:先将全磨砂载玻 ?冰箱中 片进行预热,然后在其上铺上熔融的.%,盖上盖玻片, 放置 。第二层凝胶制备:取出第一层凝胶片,轻轻揭去盖玻片,按:的比 例将上述细胞悬液与%在下混匀,迅速将混合液滴加在第一层 凝胶上,加盖玻片,置于冰箱中。轻轻移去胶片盖玻片,将载玻片水平 放置于新鲜配制的细胞裂解液含./ , ,/ , %.和%,中,冰箱裂解。从裂解液中将载 玻片取出,用少量碱性电泳液将载玻片表面残留的细胞裂解液冲洗掉,然后 水平 置于电泳槽阳极端,向电泳槽中加入新鲜配制的碱性电泳缓冲液 /, /,,使液面高于载玻片胶面.左右,放置 进行解螺旋。在电流强度 ?,电压下,电泳。停 止电泳后取出载玻片,用中性缓冲液./ .洗次,每次浸洗 ,微于后向胶片上滴加./溴化乙啶染液,盖上盖玻片,静 置后观察结果。 ..结果观察及评价 在荧光显微镜下进行观察,激发波长,发射波长。图像输入计 算机,保存为文件。每样本随机选择个细胞进行分析。利用,软件进行分析。 ..版 / 。 测定彗星尾部的% .细胞内免疫组化分析 按照等方法【略加改动。将盖玻片预先放置在孔板内,将 培 个/浓度细胞接种于孔板内,使细胞分布均匀地贴附在盖玻片上, 养。加入不同浓度的,使其终浓度为,, 和溶剂空 白对照组,?作用 。浸洗两次后取出盖玻片,待片子充分干燥后用冷丙一 ?作用,.% 酮固定。,。依次滴加/ 。作用,变性液/ ,./ 溶于%乙醇 。作用,然后用正常非免疫动物血清室温下封闭,滴加抗 单克隆抗体:稀释,。放在湿盒内过夜。次日取出湿盒,在室温 下放置,滴加生物素标记的第二抗体室温,,然后滴加标记有辣根 过氧化物酶的试剂室温放置。为降低背景值,以上各个步骤之间均用 浸洗。反应结束后,滴加新鲜配制的显色液,放置在显微镜下 观察?,显色后立即用自来水冲洗,经梯度酒精脱水干燥后,将玻片细胞生 长面朝下,用中性树胶固定于载玻片上。放置在显微镜下进行阅片,利用. ..图象分析系统进行定量图象分析,随机选择个细胞进行观察,用测 得的光密度值数值放大倍表示阳性表达的相对强弱。 .细胞内活性氧类测定 选用荧光探针?检测作用于一细胞后细胞内水平。 检测原理:.为非极性化合物,扩散进入细胞后,被酯酶水解为非荧光的 二氯荧光素,在存在的条件下,被氧化生成荧光物质, 荧光强度与细胞内活性氧水平呈正比【 。取对数期生长的细胞,向细胞悬浮液中 加入,,“的,同时设溶剂空白对照组,作用,温度均 为?.用漂洗三次后,离心收集细胞,加入 ?,?作用 后,用荧光比色计测定上清液和细胞的荧光强度,激发波长,发射波长 ,狭缝。 在干预试验中,收集细胞后,用, 预处理细胞,然后 , 浓度的作用,用漂洗三次后,再离心收集细胞,加入 。作用,然后用荧光比色计测定上清液和细胞的荧光强度,激发波长 ,发射波长 ,狭缝。 .细胞内还原型谷胱甘肽含量的测定 根据 等【】所述,在× 个/细胞悬液中加入,,的 ,同时设溶剂空白对照组,作用,?,离心弃上清,用漂洗 两次,再次离心去上清,加入. %三氯乙酸,。下作用,取离心后上 清液,加磷酸缓冲液.和 ,。避光作用。最后用荧光 比色计测定荧光强度,激发波长,发射波长,狭缝。 .细胞内溶酶体膜稳定性的测定 参考等人】的方法,消化收集细胞并将细胞数目调整至×/试 管,离心后加入,,的,同时设溶剂对照组,作用,。,用洗涤两次,将细胞悬液转移至一次性管内,离心弃上清后,每 个管内加入终浓度为./ ,混匀,。避光作用。然后洗 两次,用 混匀,最后用荧光比色计测定荧光强度,激发波长,发 射波长,狭缝。 在干预试验中,将收集好的细胞悬液用,作用, 再加入作用,之后步骤同上。 .细胞内线粒体膜电位的测定 罗丹明是一种易被有活性的线粒体摄取,无细胞毒性的荧光探针。 在正常情况下,罗丹明透过细胞膜,在活细胞的线粒体内聚集,发出黄绿色 荧光;但当线粒体膜转运能力降低时,线粒体对罗丹明的积聚能力减弱或丧 失,荧光强度降低。据参考文献盈所述,略有改动。消化收集细胞,调整细胞 数目为×个/,加入,,的,同时设溶剂空白对照组, 作用。用洗两次,离心去上清,加入终浓度为. /罗丹明并 混匀,?避光作用。最后离心弃上清,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细 胞荧光强度,利用? ..图象分析系统进行定量图象分析。 .统计方法 统计分析用 .版本完成,数据以均值士标准差表示,各组间均数比较 采用单因素方差分析,两种不同处理组间的均数比较采用检验,显著性水平为 .和.。 结果 .诱发.细胞链断裂 各剂量组细胞的存活率均在%以上且经检测无凋亡发生数 据未列出,排除试验中观察到的彗星样细胞是凋亡或坏死细胞的可能。在 试验中,. 作用一细胞。在荧光显微镜下,经染色的 一细胞呈橘红色。当浓度为和未见明显彗星样改变, 未发生断裂的,只有一个完整的头部。随 着剂量增加到 时, .细胞彗星样拖尾明显增长. 。尾%分析结果见. ,浓度的引起尾%的变化明显大于对照组,其差别具有统计学意义 .。这说明在较低浓度? 作用下一细胞没有发 生链断裂,而在较高浓度 作用下一细胞发生了链断裂。 高浓度可导致一细胞损伤。 一 鋈 日 一 ... ,,, ,.. ;? . ..; :× . .. .对细胞内.瑚表达水平的影响 经免疫组化染色后,在显微镜下观察,阳性物质呈棕黄色,主要集 ,细胞核的平均光 中在细胞核中. 。定量分析显示. 密度值随着浓度的增大而明显增强,当的浓度为、 时,与对照 组之间的差异具有统计学意义.。这说明在、 浓度作用 下,.细胞内表达水平增强,提示可以直接或者间接诱发 一细胞产生氧化应激,造成细胞的氧化性损伤。 圃 匝圈 加 ??一??一巾??;?一山叱.一.. ,,, . 一 . . 土.. ’.;: .. .对细胞内水平的影响 对一细胞内水平的影响见.。、和的作 用于一细胞后,和 浓度下细胞内水平没有明显变化,而 浓度下细胞内水平显著降低。.浓度组与对照组相比,其差异有 统计学意义尸.。 一?????嚣.正 《. .. . ,,, . . .. .. .对.细胞内水平的影响 .显示对.细胞内水平的影响。作用于.细 胞】后,细胞内水平随剂量的增加而逐渐增加,在浓度为 时,与对照组相比,其差异具有统计学意义伊.。低剂量对.细胞 内的生成无明显影响,无统计学意义,而高剂量可致.细胞内 生成量明显增加。 .. .? ,,, .?. .. ... .对引起的.细胞损伤的保护作用 在干预试验中,对 引起的.细胞损伤的影响见.。 细胞用预处理后,生成量与单纯肚作用组相比显著 降低 .. ;引起的损伤致细胞拖尾现象明显减弱,尾 %分析结果见. 。研究结果表 明,抗氧化剂预处理后,引起的 水平降低,同时引起的损伤减弱,提示引起的损伤 与细胞的 氧化应激有关。 竭?地加 一价??霹止? 加 ? ? ? 如 加 ? ?一???们?一~ ? ? ? 装 如 《 凸 : 加 巾. .. , 一 . ?.士 . .. . .;肇. .;删. .. .对一细胞溶酶体膜稳定性的影响 影响溶酶体膜稳定性,引起细胞内荧光强度增高。.所示, 在、、浓度下均引起细胞内荧光强度增高。在、、 浓度组与对照组相比,的荧光强度明显高于对照组,其差异均有统计学意义 尸 .。 ? ?价?正《 .. . . ,,, .. . .. .对.细胞线粒体膜电位水平的影响 经罗丹明染色之后可见,在、、浓度作用下,各组均未 见细胞线粒体膜电位水平明显变化,与对照组相比,其差异无统计学意义.。 .??可 价?一?价? .. . .,,, .士.. .对引起的细胞损伤的保护作用 对引起的.细胞损伤的影响见.。用处理后, 。用对 引起的细胞内荧光度升高趋势明显减弱.. .细胞预处理后,引起的细胞拖尾现象明显减弱,尾%与单纯 。结果说明 作用组相比,差异有统计学意义尸.. 预处理后,细胞溶酶体膜稳定性增加、损伤减小。 加 擂 拍 ? 加 一价?~??价 《 : 装 《 ..., “ .一 . 士... .‘. .;“. .;删户... .抑胃肽 和地昔帕明对引起的细 胞损伤起保护作用 用抑胃肽和地昔帕明对一细胞进行预处理,其结果显示干预组与单 纯“作用组相比,引起尾部%增加趋势显著减弱,其差异有统计学 意义..。 装《舌 叠 ?矿 譬矿 .. .一 . .. 士.. ..;肇 ... 讨论 本研究以.细胞为试验系统,应用试验,观察了对. 细胞的损伤毒性作用,并对其可能的作用机制进行了初步探讨。 .引起.细胞的损伤 目前检测损伤的方法有很多,传统的检测方法包括洗脱技术、梯度沉 降技术、解旋技术等,而单细胞凝胶电泳试验是最近几年发展起来的一种可靠且 灵敏的检测细胞核损伤的技术。单细胞凝胶电泳 ,技术,又称彗星试验 ,它的原理是链断裂后产生碎片, 碎片在强碱条件下,从超螺旋结构中释放而出,经过电泳后向阳极移动,经 溴化乙啶荧光染色后,在荧光显微镜下观察受试细胞呈现彗星拖尾样影像工。 单细胞凝胶电泳技术可以根据彗星样细胞的尾长、尾%、尾距尾距尾长尾 部含量%等指标分析检测细胞核损伤程度,可以检测碱不稳定位点、 单链断裂、双链断裂等类型的损伤,被广泛应用于检测各种因素如 紫外线、化学毒物、电离辐射等导致的损伤效应【删。已有研究报道, 处理中国仓鼠细胞细胞株细胞和河蚌消化腺细胞后, 彗星试验均显示细胞 尾矩显著增加,导致中国仓鼠细胞细胞株细胞和河蚌消化腺细胞发 生损伤】,这说明具有损伤毒性。本研究通过单细胞凝胶电泳 试验,观察对.细胞的损伤毒性作用。我们观察到、、 浓度的作用于.细胞 后,较低浓度、.浓度组没有产生明 显的拖尾现象,而较高浓度浓度组细胞迁移距离明显增加,引起细 胞损伤。这一结果符合之前研究报道,说明低剂量不能引起. 细胞损伤,而高剂量对.细胞具有损伤毒性作用。 .引起细胞产生氧化应激及其与损伤作用的关系 在众多引起损伤的机制中氧化性损伤是最常见的。氧化性损伤是指机体 在有害刺激作用下产生多种类型自由基,自由基的产生超过清除能力,打破了细 胞内氧化和抗氧化平衡系统,从而导致各种组织损伤,如链断裂、细胞膜结 构和通透性发生改变等【 。氧化性损伤可由体内产生过多和或抗氧化物 质女:水平下降而产生。外源性化合物进入机体后活化氧而产生化学性质活跃 的。含有氧原子或原子团,包括过氧化氢、羟自由基一、 超氧化物阴离子?等,对大多数细胞都具有毒性作用,可以诱发细胞产生氧化 应激,引起氧化性损伤引。在正常情况下,机体的产生与清除维持在一 种动态平衡状态。当这种平衡被打破,体内生成过多或清除能力不足,就会 引起水平升高,抗氧化能力下降,进而引起氧化性损伤,即氧化应激状态。 是一种小分子三肽物质,为细胞内最丰富的非蛋白巯基化合物,可以有效地 调节细胞内氧化还原状态,在维持氧化与抗氧化平衡的过程中起到重要作用,它 能清除氧自由基,对毒物诱导的氧化性损伤具有保护作用,可减轻自由基等各种 内源性和外源性物质所致的氧化性损伤,从而维持细胞内氧化还原状态的平衡【】。 可以通过修复、结合、清除等方式降低对酶、膜受体的损害,从而起到 缓冲细胞损伤的作用【?。作为的清除剂,细胞为会随着水平的升高 而降低。 本研究发现高浓度肛作用于一细胞后引起细胞内水平 显著升高,同时细胞内水平明显降低。结果说明诱导.细胞发生 氧化应激,细胞内的产生增加,而抗氧化物质减少,氧化还原平衡系 统被打破。为了深入探讨在诱发的.细胞氧化应激及损伤中的作用,我们选择用抗氧化剂对.细胞内水平实旌干预。 是一种有效的抗氧化剂,能直接清除羟自由基、过氧化氢以及次氯酸等。同时, 进入细胞后可以脱去乙酰基变为半胱氨酸,半胱氨酸是细胞内重要的非酶类 抗氧化物的前体。通过补充细胞内水平而增进的抗氧化功 能引。本研究采用单细胞凝胶电泳试验检测预处理对引起的. 细胞损伤的影响。试验结果显示,用进行预处理后,细胞内水平 显著降低,彗星尾%远低于未预处理组与对照组接近。这说明抗氧化 剂能够有效地降低引起的生成过多,抑制诱导的损伤。 干预试验再次证明:引起细胞内过量生成,诱导细胞发生氧化应激;氧 化应激是引起的损伤过程中的重要机制。 氧化和抗氧化平衡系统被打破后,过度生成的攻击碱基形成多种修 饰碱基,如胸腺嘧啶二醇、.羟基鸟嘌呤、胞嘧啶二醇、.羟基腺嘌呤等,其中大 部分碱基修饰位于脱氧鸟嘌呤的第个原子上,形成.】。的 形成可造成胸腺嘧啶取代被修饰的鸟嘌呤,发生基因突变,从而导致复制过 程中发生:?:碱基错误配对【】。的形成是比较常见的氧化性损 伤,而一性质比较稳定,利于检测,检测方法较敏感,所以.常作为 细胞内氧化性损伤的标志性产物。本研究定量分析结果显示,处理 细胞后,细胞平均光密度值随着浓度的增大而增强,说明细胞内 表达水平随着浓度增加而增高,在和 浓度作用下 细胞内表达水平显著增高。氧化性损伤标志性产物一的增多直接证 明诱 导的一细胞损伤为氧化性损伤,氧化应激在整个过程中起到重 要作用。 .对细胞溶酶体膜稳定性的影响 溶酶体是一种普遍存在于除红细胞以外所有哺乳动物细胞内的酸性细胞器, 在细胞损伤与凋亡过程中可作为重要的启动者与执行者。溶酶体内含有多种酸性 水解酶,如酸性神经鞘磷脂酶、组织蛋白酶等。在一些刺激因素的作用下,部分 溶酶体膜通透性发生改变,释放酸性水解酶,从而参与到细胞损伤的途径中【。 蛋白酶由溶酶体释放进入胞浆后,可引起线粒体膜电位改变,导致细胞色素等 促凋亡分子的释放,并激活下游凋亡酶凋亡酶体的组装与活化,启动细胞损伤与 凋亡的执行,这一途径被称为介导细胞损伤与凋亡的“溶酶体.线粒体途径”【矧。 胞浆中组织蛋白酶的致死效应不只局限于激活线粒体依赖的内在凋亡途径,通过 线粒体非依赖的死亡途径同样会引起细胞损伤。在经微管稳定药物处理的小细胞 肺癌细胞中,溶酶体膜通透发生在细胞死亡进程的早期,在这过程中组织蛋白酶 介导微核化,引发凋亡酶非依赖的细胞损伤与死亡【。此外,在多种人源肿瘤细 胞中,热休克蛋白的耗竭【】以及细胞的适度激活啷都会引发溶酶体膜 通透和组织蛋白酶介导的细胞死亡,然而这些过程均不发生细胞损伤内在的溶酶 体.线粒体途径的活化。因此,溶酶体膜通透是溶酶体参与细胞损伤调控的关键步 骤。在不同的细胞损伤刺激因素作用下、不同的细胞中,溶酶体膜通透在细胞损 伤中既作为起始者,也可以作为执行者,可以通过线粒体进行调节损伤,也可以 不经过线粒体直接引起损伤,具体作用方式主要取决于刺激因素以及细胞类型的 不同。此外,溶酶体中的多种酸性水解酶参与到细胞损伤与凋亡的过程中,并起 到重要作用?。 本研究结果显示:作用.细胞后,细胞内溶酶体膜稳定性明显 下降,而线粒体膜电位没有明显变化。而同时,在试验中作用一 细胞后出现细胞明显损伤。研究结果提示作用后引起一 细胞溶酶体膜稳定性下降,但是没有引起线粒体膜电位的改变。本研究说明在 诱导的.细胞损伤中细胞溶酶体膜稳定性下降可能直接发挥致损伤 作用,此过程可能不通过线粒体进行调节。 为了进一步证明细胞溶酶体膜通透及溶酶体内酸性水解酶在引起的 损伤中的作用,我们选用、地昔帕明和抑胃肽进行干预。有研究表明: 能降低细胞内的,增加细胞溶酶体的稳定性【,】。在我们的研究中,用 预处理后,一细胞溶酶体膜稳定性显升高,拖尾现象明显减弱,提示 对引起的溶酶体损伤和损伤具有明显的保护作用。这一结果证明 诱导溶酶体膜稳定性下降并且溶酶体膜稳定性下降在引起的损伤中 起到重要作用。溶酶体膜通透的程度不同可以导致细胞发生损伤或死亡。溶酶体 膜通透的程度低会引起有限的溶酶体内容物的释放,产生细胞损伤;而若程度较 高会导致溶酶体内容物的大量释放,引起快速的细胞坏死。溶酶体内的酸性水解 酶是引起细胞损伤或者死亡的最重要原因。细胞溶酶体膜稳定性下降后,溶酶体 内的酸性神经鞘磷脂酶和组织蛋白酶等酸性水解酶释放进入细胞质,可诱发 损伤?】。组织蛋白酶是溶酶体中含量最丰富的一大类蛋白酶,其最适为 酸性。一般认为该酶是溶酶体参与细胞凋亡启动与执行的关键蛋白酶。酸性鞘磷 脂酶是鞘脂类代谢的一种关键酶,它通过水解鞘磷脂生成神经酰胺进而生成鞘氨 醇等一系列生物活性脂。鞘氨醇是介导溶酶体膜通透的关键分子。鞘氨醇在溶 酶体中被质子化后导致溶酶体膜稳定性下降。低浓度的鞘氨醇可以引起线粒体膜 电位丧失、溶酶体膜通透、激活凋亡酶等,而高剂量的鞘氨醇会引起溶酶体崩解, 导致细胞快速坏死【】。地昔帕明是酸性神经鞘磷脂酶的抑制剂;抑胃肽是组织蛋 白酶的抑制剂【 。分别用地昔帕明和抑胃肽预处理后,结果显示,拖尾 均明显减小,提示地昔帕明和抑胃肽干预有效地减弱了引起的损伤程度, 说明溶酶体内的酸性水解酶可诱导.细胞发生损伤。以上研究结果 提示:引起.细胞内溶酶体膜稳定性下降,使酸性水解酶释放到胞质 中。酸性水解酶进一 步直接引起细胞损伤,此过程线粒体可能没有参与调节。 许多可导致细胞损伤的刺激因素都可以造成溶酶体膜通透性增加,而其中活 性氧是介导溶酶体稳定性下降的重要的常见因素。在细胞损伤因素的刺激下,细 胞内活性氧的生成增加,从而导致溶酶体膜稳定性下降,引起细胞损伤或死亡。 活性氧是通过溶酶体内积累的铁来实现对溶酶体膜的损伤【。自由态的铁可以催 化过氧化氢发生反应生成羟自由基,羟自由基攻击溶酶体膜,使膜完整性遭到破 坏,并导致溶酶体膜崩解,最终引起细胞的损伤与死亡。铁离子螯合剂可以保护 溶酶体膜完整性不被破坏,抑制氧化应激引起的由溶酶体介导的细胞损伤。氧 化应激可以引起细胞溶酶体膜通透,而溶酶体膜稳定性下降也会引起细胞氧化应 激的发生。在溶酶体一线粒体途径中,刺激因素引起溶酶体膜通透,导致线粒体膜 稳定性下降,同时在线粒体中产生过多使细胞发生氧化应激,引起损伤。 本试验结果显示引起。细胞内水平的升高,也引起细胞内溶酶体 膜稳定性下降,而对细胞线粒体的膜电位几乎没有影响。因此,我们推测:可 能直接引起.细胞溶酶体膜稳定性下降;也可能先诱发细胞内过 量生成,再由引起细胞溶酶体膜稳定性下降。 综上所述,我们推测引起.细胞损伤毒性机制可能是: 引起细胞内生成增多,抗氧化物质减少,氧化性代谢产物增加,细胞 处于氧化应激状态,造成.细胞氧化性损伤;过量生成的引起 细胞内溶酶体膜稳定性下降,使酸性水解酶释放,直接造成一细胞 损伤;也可能直接诱发溶酶体膜稳定性下降,使酸性水解酶释放,直接造成 损伤,不经过线粒体途径。详细的机制还有待进一步探讨研究。 结论 .试验显示,高浓度可以引起.细胞链断裂,表明 高浓度对.细胞具有损伤毒性。 .可引起.细胞内生成增加,细胞内抗氧化物质减少, 使细胞处于氧化应激状态。 .使细胞内氧化性损伤标志性产物.表达增强,表 明对一细胞的损伤毒性可能与氧化性损伤有关。 .引起一细胞溶酶体通透性增加;细胞内溶酶体膜稳定性下降与 损伤毒性的发生机制有关。 .具有抗氧化特性的化学物,组织蛋白酶抑制剂抑胃肽、酸性神经 鞘磷脂酶抑制剂地昔帕明及调节剂可预防引起的损伤。 .溶酶体内酸性水解酶在诱发的一细胞损伤毒性方面发挥 重要作用。 参考文献 .,..,., ..” ..” .、:. .,..,.., ..” .” :. 丁运生,孙小虎,李有桂,朱凯.鞣花酸及其衍生物研究进展.合肥工业大学学报., : .,. ..” .” :. .,. ..” ,,一, .? .” : ?. .,..,., ..” .” :. .,.,., . .” .” :?. .?,.,.., .. ” ?.” :?. .,..,., ..” .” : 一.。,.。.” :, ..” :?. .。一?,, :~ ..,,:~ .,.. ...” .” :. .,.,. ..” ,, .” : ?..,.,., ..”.” :. .” .,. ..”:. ...,.., :,, ,..?.. , , , . . 棚 .,: ...,..,.., ..” .”:?. . .,... . ,:.,.,.., ..”:?. .” ..,..,,..,,.., ....,. . . ... , ,、 : ,:. ....:?., ,..... . , , , , , , , , , . / :. . .,: ...... ...,:. . : . , .,:?. ..,..,? 、,. ,.. . . ,?一?,...,:. .,.,., ..”.” :?... .., . .。 , : .王沁.乙酰半胱氨酸抗氧化作用在慢性阻塞性肺疾病治疗的进展采用.临床 肺科杂 志.,: ..,.,.,, ?一 , ....,:?.: ..???. .. . ...,: . ,, , . 一 ...: ,, . . . ? ,,:? . , . , , ,, , . :? . , , , . . , . ,:? , , . , . . ..:? . , , , .. : ,,:? . ..,,: ..., , .?..... ,. .. .,.,. ..” ? .” :. ..,. ..”.” , , , :.. . :. ,,.,.,., ..”.” :?. ..,. ..” .” :?. ... .,,: .. ..?..,:? .. ..” .” :? ..,. ..” .” :?.综述 鞣花酸生物学活性研究进展 王东综述 陈敏审校 鞣花酸 ,是自然界中的一种天然多酚类化合物,在日常饮 食中比较常见。主要存在于各种各样的植物中,包括浆果、水果、坚果和蔬菜等, 在热带水果、覆盆子、石榴、草莓、核桃、越桔等果实中含量丰富捌。鞣花酸有 着丰富的生物学活性,近年来受到人们的广泛关注,被应用于药品、食品及化妆 品等领域。越来越多的研究表明鞣花酸具有很强的抗癌活性和抗氧化活性【,。除 此之外,鞣花酸能够起到抗炎、增强免疫力的作用。同时,鞣花酸还具有促进凝 血、抑菌、抗病毒、抗疟原虫、保肝等【‘生物学作用。然而,也有研究证实, 在一定剂量下鞣花酸还具有细胞毒性和损伤毒性作用本文就鞣花酸的理 化性质和生物学活性进行综述。 .鞣花酸的的理化性质和体内代谢 纯鞣花酸是一种黄色针状晶体,号..,熔点吡啶太于 ,微溶于水、醇,溶于碱、吡啶,不溶于醚。分子式】‰,分子量为.。天 然的鞣花酸是一种多酚化合物,与顺式没食子酸及其单宁不同,它存在于多种植 物的果实中,呈反式没食子酸单宁结构。鞣花酸的基本化学平面结构含个羟基、 个内酯环?引。 鞣花酸的吸收代谢比较迅速。 等在研究大鼠口服鞣花酸单体时, 在血中没有发现鞣花酸单体存在,静脉给药发现其代谢产物, 保留时间比鞣花酸 长,结构未知。鞣花酸代谢产物主要通过尿液排泄体外,粪便和胆汁中也有部分 排泄。 等【 】在给小鼠口服鞣花酸单体时发现血中鞣花酸原形药浓度极低, 静脉给药后内鞣花酸血药浓度下降/, 肝中浓度下降/,肺中下降/, 后约有%的揉花酸从尿中排泄。等【 用从石榴叶提取物中鞣花酸在大鼠体内 进行药物动力学研究。研究发现鞣花酸在体内吸收迅速,主要是在胃内吸收;口 服给药约后发现鞣花酸分布速度也很快,血药浓度下降到%。 等【酬 给小鼠口服标记的鞣花酸后发现:在口服给药后,肺、肝脏中鞣花酸浓 度达到峰值,而在时血中’鞣花酸浓度达峰值,随后迅速下降。在后 胆汁和尿液中即有鞣花酸,在时浓度最高,?后消逝。但此结果不能确定血 液内所测是否是鞣花酸原形。鞣花酸经口服迅速吸收,但原形药在血内含量极低, 不能确定鞣花酸完全在肠道代谢或者是吸收后在体内代谢。 .鞣花酸类化合物的生物活性 .抗氧化活性 鞣花酸化学结构中含有许多容易被氧化的酚羟基,因此它可以在一定程度上 保护其他物质免被氧化,具有抗氧化活性。抗氧化活性是鞣花酸最重要的生物学 活性之一,被人们广泛研究。正是因为它的这种活性,鞣花酸被广泛应用于医药 和食品领域。有实验表明鞣花酸可以增强谷胱甘肽.转移酶 ,水平。谷胱甘肽.转移酶是氧化还原反应中的重要酶类,是 催化谷胱甘肽结合反应的关键酶【。等【为观测鞣花酸对小鼠体内谷胱甘肽 .转移酶水平的影响,以鞣花酸喂养小鼠,然后进行检测。检测发现小鼠肝脏内谷 胱甘肽.转移酶在蛋白质水平、基因水平、水平的活性均明显增强。 等【】在喂食成年小鼠鞣花酸后检测小鼠消化系统细胞水平,采用免疫 组化方法及蛋白印迹方法检测硒?蛋白的表达。结果发现.蛋白表达显 著升高,说明谷胱甘肽.转移酶水平增高,证明鞣花酸的抗氧化活性可能与其增高 谷胱甘肽一转移酶表达有关。 掣】对鞣花酸、褪黑素及维生素 种抗氧化剂进行了抗氧化效果的比 较。选择中国仓鼠卵巢细胞进行体外培养,用博莱霉素及过氧化氢进行诱导,使 中国仓鼠卵巢细胞发生氧化性损伤,接着再分别用这种抗氧化剂进行处理, 最后采用碱性单细胞凝胶电泳技术观察氧化性损伤的逆转情况。实验结果显 示,褪黑素和维生素处理后由博莱霉素及过氧化氢引起的的中国仓鼠卵巢细胞 损伤只有轻度恢复,而鞣花酸处理后损伤明显减轻。同时,用细胞荧光 素方法测定细胞内氧化物的含量,结果显示,鞣花酸对氧自由基有很强的清除能 力。这些结果都说明,鞣花酸具有抗氧化活性,并且其抗氧化活性比褪黑素和维 掣】研究表明,鞣花酸可以有效的清除.自由 生素要强。 基,而且呈浓度依赖关系。该研究还比较了鞣花酸、槲皮素和叔丁对甲氧酚的自 由基清除活性,结果表明鞣花酸的清除能力与槲皮素相当,比叔丁对甲氧酚强。 同时,鞣花酸抑制微粒体脂质过氧化的活性比叔丁对甲氧酚和槲皮素都要强得多。 此外,鞣花酸与金属离子的螯合活性也呈明显浓度依赖关系。总而言之,鞣花酸 具有很好的抗氧化作用,它的抗氧化活性与叔丁对甲氧酚和槲皮素相近或更高。 .抗肿瘤活性 肿瘤的发生是由致癌物引发的一个漫长复杂的过程,许多实验已经表明鞣花 酸对许多肿瘤均有抑制作用。近年来,随着对鞣花酸的不断深入研究,一些小鼠 和人组织体外和体内实验证实鞣花酸对多种肿瘤都有很好的治疗作用,特别是对 白血病、结肠癌、食道癌、膀胱癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌和皮肤癌效 果十分显著【】。细胞的氧化应激状态在肿瘤的发生发展中起到非常重要的作用, 分子的氧化性损伤是突变和癌的始发原因,因此鞣花酸抗氧化、清除自由基 作用与其抗癌作用密切相关。鞣花酸还具有抑制细胞因子激活途径、阻断生长因 子信号传导途径、抑制肿瘤细胞增殖、抑制血管生成、抑制抗凋亡蛋白的表达和 诱导凋亡等活性【】,这些活性在鞣花酸抑制肿瘤过程中起到了重要的作用。 . 等【】发现鞣花酸可以与致癌剂的活性代谢物结合形成无害 的化合物,从而使得致癌剂不能与细胞结合,表现出对乳腺癌有很强的抑制 作用。结果显示,通过鞣花酸干扰,能使邻苯二甲酸酯二丁酯,具有较强致 癌性.力合物降低%以上,可能经过与酶无关的途径抑制.合。 等【应用微粒体介导的检测系统 发现 鞣花酸能够直接阻断致癌物的致癌作用,可以有效抑制苯一:合物的形成,使 加合物减少达%.%。等孙对比研究了鞣花酸和槲皮素对亚硝基二甲 胺诱导鼠肺肿瘤的抑制作用,鞣花酸使鼠肺肿瘤的发生率从%降低到%,而 槲皮素使鼠肺肿瘤的发生率从.%降低到.%,鞣花酸表现出比槲皮素更 强的肿瘤化学预防效果。掣】将.%浓度鞣花酸掺入食物喂养老鼠,结 果发现黄曲霉素诱发的,.谷氨酰转移酶阳性病灶显著减少,表明鞣花酸具有抑 制黄曲霉素的致致癌和突变作用。 鞣花酸可以诱导肿瘤细胞凋亡,从而起到抗肿瘤的作用。研究表明在细胞发 生凋亡的过程中,线粒体释放细胞色素胞浆起到关键作用,在脱氧腺苷三磷酸 存在的条件下细胞色素能够与凋亡因子.结合,同时促使半胱氨酸天冬酶 ..与其结合形成凋亡小体,激活的一启动半胱胺酸蛋白酶级联反 应,最终经过.激活内切酶进而引起细胞凋亡。等【用鞣花 酸处理人结肠癌.细胞和正常结肠一 细胞后,发现鞣花酸可以诱导 肿瘤细胞发生凋亡,但是对正常细胞没有诱导凋亡作用。在细胞凋亡过程中,检 测到鞣花酸使细胞内?下调,诱导细胞色素从线粒体释放至胞质,激活启 动因子.并向下逐级级联激活效应因子.,进而引起细胞凋亡。 .抗增殖活性 鞣花酸具有很强的抗增殖活性,该活性在抑制肿瘤发生发展方面起到重要作 用。 .等【】研究了鞣花酸对人脐静脉内皮细胞 ,的抗增殖活性。研究显示,. /浓度的鞣花酸对 具有明显的抗增殖作用。同时,鞣花酸也显示出抑制前列腺癌、结肠癌和 乳腺癌细胞株增殖的作用。 鞣花酸能够激活细胞周期的负调控因子和基因,从而影 响细胞周期。 在细胞周期中,基因表达蛋白与基因调节区结合,进而激活基 因转录,表达州蛋白。啪蛋白可以抑制细胞周期蛋白依赖性激酶。 与细胞周期蛋白形成复合物.驱动细胞进入期,但蛋白与 复合物结合后就会抑制复合物的活性,使细胞不能进入期,抑制其 增殖。等【】用鞣花酸处理膀胱癌细胞株后,、基因表达升高, 基因表达降低,癌细胞发生.周期阻滞和细胞凋亡,生长增殖受到抑制。 等【】研究了鞣花酸对宫颈癌细胞株增殖活性的影响。研究发现, 用鞣花酸处理宫颈癌细胞株后,细胞阻滞于.周期,、基 因表达明显升高,发生增殖抑制及凋亡现象。等【用 巧/浓度鞣 花酸处理结肠癌 细胞株 后,发现胰岛素样生长因子..下调, 删激活,调控细胞周期,导致细胞凋亡。?是一种有丝分裂原,可抑 制细胞凋亡,促进多种细胞的增殖。研究表明鞣花酸通过抑制肿瘤细胞增殖和诱 导凋亡达到抑制肿瘤的作用。 .抗病毒、抗菌、抗疟原虫活性 随着对鞣花酸的不断研究,人们发现它还具有抗病毒、抗菌和抗疟原虫等抑 制病原微生物的作用。鞣花酸和一些鞣花单宁显示对乙型肝炎病毒有抑制作用。 等【研究发现,当用鞣花酸以/体重的量喂养/鼠 后,能有效地阻止由弓起的免疫耐受性,增加抗体的产生,增强细胞毒性 一淋巴细胞免疫应答反应,表现出抗乙型肝炎病毒的活性。鞣花酸对细菌也有一 定的抑制作用。 等【研究了鞣花酸的抗菌活性,实验结果表明鞣花酸具有 中等抗菌活性。 等研究发现鞣花酸能够通过抑制菌膜形成而抑 制大肠杆菌。另外,已有大量文献报道,鞣花酸具有很明显的抗疟原虫活性。 等最先通过体外实验证明了鞣花酸能够抑制恶性疟疾原虫的生长。 等【】研究显示:在体外试验中,鞣花酸表现出很强的抗疟原虫活性, 并且与抗疟药物有很高的协同作用;体内试验中,鞣花酸抗疟原虫的能力明显降 低,可能是由于鞣花酸的吸收代谢过快并不能起到作用而引起。 .抗炎症活性 鞣花酸具有抗炎症的活性, 能够降低炎症介质表达,其抗炎活性与它的抗氧 化作用有关。 等用鞣花酸对周大的已患有慢性胰腺炎的 /大鼠进行喂养。在/体重/天的剂量下,鞣花酸减弱了胰腺炎和 胰腺组织纤维化,具有抑制炎症的作用。 等】以剂量为/ 体重/天的鞣花酸喂养雄性 鼠周,同时设立,一二甲基肼对照组,观 察体内炎症介质的表达情况,研究鞣花酸对炎症的影响。实验结果显示,与,一二 甲基肼对照组相比喂养鞣花酸组.,.,,.和一的表达水 平显著降低,说明鞣花酸抑制炎症介质表达,具有抗炎的活性。. 等【 将鞣花酸以%的比例混入食物中对糖尿病小鼠进行喂养,周后观察到鞣花酸明 显降低糖尿病小鼠心脏组织中的炎性介质水平,对心脏组织具有抗炎保护作用。 .细胞毒性及损伤活性 作为日常饮食中常见的植物化学物质,鞣花酸通常被认为是无毒的。目前关 于鞣花酸毒性报道的文章不多,但是已经有研究显示其具有一定的毒性作用。 试验中,鞣花酸对于鼠伤寒沙门氏菌株和无诱变作用【】。亚慢性毒 性研究显示,在对大鼠鞣花酸喂养处理天后,雄性大鼠没有明显变 化而雌性大鼠体重轻微改变【。然而,研究证实,在一定剂量下鞣花酸具有 细胞毒性和损伤毒性。细胞毒性试验显示,鞣花酸对中国仓鼠细胞具有 细胞毒性,浓度在时使细胞存活率降到%。同时,彗星试验显示鞣花酸 处理中国仓鼠细胞细胞株及河蚌消化腺细胞后细胞尾矩明显增加【, 说明鞣花酸具有损伤毒性作用。 我们进一步探讨了其机制,一系列实验结果显示尚未发表,以. 的鞣花酸作用.细胞小时后,彗星实验细胞明显出现拖尾、溶酶体膜稳 定性受损;以的鞣花酸作用.细胞小时后,细胞内水平显 著升高,细胞内水平显著下降,细胞内氧化性损伤的标志性产物 明显表达。结果提示鞣花酸使产生损伤,引起细胞溶酶体膜稳定 性损伤,诱发细胞内生成增多,细胞内抗氧化物质减少,氧化性代谢 产物增加,使细胞处于氧化应激状态,造成一细胞氧化性损伤。 .其他生物学作用 鞣花酸具有抗辐射活性。石榴汁中的主要成分是鞣花酸及其缩合形式鞣花丹 宁。等删利用增强紫外线.照射人表皮角质细胞来研究石榴汁的抗紫外线辐 射作用。将人表皮角质细胞以石榴汁./处理,然后以增强紫外线一 /剂量照射,再用电泳迁移率变动分析法、酶联免疫吸附测定法和免疫 印迹分析进行检测。结果显示,石榴汁在人表皮角质细胞中呈时间剂量依赖 的方 式介导丝裂原活化蛋白激酶信号通路的磷酸化过程,表明石榴汁是通过 对信号通路的干预发挥抗辐射作用。 鞣花酸还具有促进凝血的功效。 掣研究发现鞣花酸可以通过激 活哈格曼因子,促进凝血,有效的减轻出血。 .结语 植物化学物有着丰富的生物学活性,而且人们经常会在饮食中摄取,因此受 到人们的广泛关注。鞣花酸存在于各种各样的植物中,是日常饮食中常见的 植物 化学物。鞣花酸具有多种多样的生物学活性,包括抗癌、抗氧化、抗炎、抗 菌、 抗病毒、抗疟原虫和损伤作用等,被应用于药品、食品及化妆品等领域。随 着鞣花酸保健品、药品和化妆品等产品的开发利用,人体接触鞣花酸的量也越来越多,其潜在的毒性也越来越大。目前关于鞣花酸潜在毒性的研究不多,完整可 靠的毒理学实验可以为评估鞣花酸对人类健康潜在危害提供实验及理论依据。 参考文献.,..,., . .. ,?: ?...,..,..,. , :?. .丁运生,孙小虎,李有桂,朱凯.鞣花酸及其衍生物研究进展.合肥工业大学学报., : .,.,.. . ,,:..... ?,,一,? ? . ,, : . ., . , , ? ..,:. .,.,.,. . , , :...,.., ., , . :?. . . .,..,., 硒 ? . ,: :, .,.. . . , ,: . , , ., 。 . ?,,:? ..,.,., .,,.:.. .,.. .. , ,?:. .航,刘芸,刘春样.具有抗癌作用鞣花酸的合成。现代应用药学杂志.,: . . , .,: ., , , . ,西 , ,一? ’一.,,: . , . , , ~,,:一. . , .., : . ? , , ,. , .,,: . . , . , .,:?. , .. , /, : .,, ?. . , , , .. ,,:?. . , ,,:? . .郑英,俊梁武。鞣