药学毕业论文HPLC法测定犀羚解毒丸中甘草酸的含量

药学毕业论文HPLC法测定犀羚解毒丸中甘草酸的含量 HPLC 法测定犀羚解毒丸中甘草酸的含量 作者:秦战勇林莉莉姚雪花杜树山 【摘要】 目的 建立犀羚解毒丸中甘草酸含量的测定方法。方法 采用 HPLC 法色谱柱:Diamonsil C18 250 mm×4.6 mm5 μm流动相:甲醇-0.2 mol/L 醋酸铵-冰醋酸33?164?36检测波长:250 nm流速:1.0 mL/min。结果 甘草酸铵在 0.075,0.375 μg 范围内呈良好的线性关系r,0.999 6加样回收率为 98.25RSD,0.92。 结论 该方法快速、 简便、准确、重复性较好结果可靠可用于控制犀羚解毒丸制剂的质量。 【关键词】 犀羚解毒丸;甘草酸;高效液相色谱法;含量测定 Abstract:Objective To establish a method for the determination of Glycyrrhizic acid in Xilingjiedu Pills. Methods Diamonsil C18 250 mm×4.6 mm 5 μm column in an oven at 30 ? wasneed with a mobile phase consisting of methanol - 0.02 mol/L ammonium acetate - glacial aceticacid 33?1 64?36 and a UV detector at 250 nm the flow rate was 1.0 mL/min. Results Thelinear range of Glycyrrhizic acid was 0.075,0.375 μg/mL. The average recovery was 98.25RSD,0.92. Conclusion The method is simple and accurate and can be used for the qualitycontrol of Xiling Jiedu Pills. Key words:Xiling Jiedu Pills;Glycyrrhizic acid;HPLC;content determination 犀羚解毒丸是由玄参、连翘、薄荷、牛蒡子炒、荆芥穗、板蓝根、金银花、地黄、麦冬、栀子、淡竹叶、桔梗、甘草、犀角粉、水牛角浓缩粉、羚羊角粉、冰片等组成的纯中药制剂具有辛凉发表、祛瘟解毒之功效用于外感时邪引起的发热恶风、头痛目眩、四肢酸懒、面赤腮肿、咽干口燥、咳嗽咽痛等。犀羚解毒丸载于《卫生部药品中药成方制剂》第 6册由同仁堂集团股份公司生产。甘草为本品方中的主要药材甘草酸是该药的主要有效成分故以甘草酸为指标进行含量测定控制成品的质量。参照 2005 年版《中华人民共和国药典》一部1我们建立了犀羚解毒丸中甘草酸含量的 HPLC 测定方法该方法快速、简便、准确、重复性较好结果可靠可用于犀羚解毒丸制剂的质量控制。 1 仪器与试药 Waters1515 高效液相色谱仪Waters2487 紫外可见光检测器Mellennium32 色谱工作站美国 Waters 公司;KQ-250 型超声波清洗器Mettler Toledo AG135 十万分之一电子分析天平。 甘草酸铵对照品购自中国药品生物制品检定所批号 110731-200511;犀羚解毒丸制剂由北京同仁堂集团股份有限公司提供批号 6013957、6013958、6013959。甲醇色谱纯水为纯净水其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件及系统适应性 色谱柱:Diamonsil C18250 mm×4.6 mm5 μm;流动相:甲醇-0.2 mol/L 醋酸铵-冰醋酸33?164?36;检测波长:250 nm;流速:1.0 mL/min。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的甘草酸铵对照品 1.25 mg置 25 mL 量瓶中加流动相溶解并定容至刻度摇匀作为对照品储备液。精密量取对照品储备液 5 mL置 10mL 量瓶中加流动相溶解并定容至刻度摇匀即得 25 μg/mL 甘草酸铵对照品溶液折合甘草酸 24.487 5 μg。 2.2.2 供试品溶液的制备 取犀羚解毒丸批号 6013957适量与硅藻土按 6?4 比例粉碎并均匀混合成中粉取上述粉末 8.0 g精密称定置 250 mL 具塞锥形瓶中加入 40甲醇 100 mL称定重量超声处理功率 250 W频率 40 kHz30 min放冷用 40甲醇补是减失的重量摇匀静置离心分取上清液滤过取续滤液作为供试品溶液。 2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除甘草以外的其他药味依照犀羚解毒丸的生产工艺制成阴性制剂再按供试品溶液制备方法制成缺甘草的阴性对照溶液。 2.3 线性关系考察 分别精密吸取 25 μg/mL 甘草酸铵对照品溶液 3、5、8、10、13、 15 μL。在上述色谱条件下分别注入液相色谱仪测定。 以甘草酸铵的进样量μg分别对相应峰面积积分值进行线性回归得回归方程:Y,788 206X,8 096.4r,0.999 6。 结果表明对照品进样量在 0.075,0.375μg 范围内甘草酸铵峰面积与进样量呈现良好的线性关系。 2.4 空白试验 分别吸取甘草酸铵对照品溶液、犀羚解毒丸供试品溶液及缺甘草的阴性对照溶液 10μL注入液相色谱仪按上述方法分别测定得到相应的色谱图见图 1。结果表明:犀羚解毒丸供试品溶液的色谱图在与甘草酸铵对照品相应保留时间处出现甘草酸的色谱峰; 而缺甘草的阴性对照溶液色谱图在相同保留时间处没有出现上述色谱峰说明制剂中其他成分对甘草酸的测定不产生干扰。 2.5 精密度试验 分别精密吸取 25 μg/mL 甘草酸铵对照品溶液各 10 μL重复进样 6 次结果甘草酸铵峰面积的 RSD,1.86表明精密度较好。 2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液批号 6013957分别于 0、2、4、6、8、12 h 进样测定结果甘草酸铵峰面积的 RSD,1.76表明犀羚解毒丸供试品溶液在 12 h 内稳定性良好。 2.7 重复性试验 精密称取同一批犀羚解毒丸批号 6013957按“2.2.2”项下方法制备供试液共 6 份并在 RSD,1.16上述色谱条件下进行测定。结果样品中甘草酸的平均含量为 2.37 mg/丸表明重复性较好。 2.8 加样回收率试验 取犀羚解毒丸批号 60139572.40 mg/丸适量与硅藻土按 6?4 比例粉碎并均匀混合成中粉精密称取 4.0 g 上述粉末共 6 份分别置 250 mL 的具塞锥形瓶中精密加入甘草酸铵对照品 1.25 mg精密加入 40甲醇 100 mL称定重量超声 30 min放冷再称定重量用 40甲醇补足减失的重量摇匀静置离 。结果表明按心取上清液滤过取续滤液进行回收率测定计算加样回收率结果见表 1本法测定样品中甘草酸的含量加样回收率均符合要求。表 1 甘草酸的加样回收率试验结果(略) 2.9 样品测定 精密称取 3 批不同批号犀羚解毒丸制剂每批平行测定 3 份按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液并在上述色谱条件下测定计算样品中甘草酸的含量结果见表 2。 2 甘草酸含量测定 表结果略 3 讨论 本试验考察了超声处理不同时间、加入不同体积提取溶剂的样品中甘草酸的含量结果表明超声提取 30 min、溶剂量为 100 mL 可提取完全。取甘草酸铵对照品溶液适量经紫外光谱扫描其最大吸收波长为 250 nm因而选择检测波长为 250 nm。 根据文献报道2-6并经预试验对药典中流动相进行了优选确定甲醇-0.2 mol/L 醋酸铵?冰醋酸33?164?36为流动相色谱柱为 Diamonsil C18250 mm×4.6 mm5 μm所得色谱图的分离度好保留时间较合适。故本试验选用的流动相为甲醇-0.2 mol/L 醋酸铵-冰醋酸33?164?36并将该条件的色谱图记录下来以被测组分甘草酸峰计算理论塔板数并计算甘草酸与相邻峰的分离度。根据试验结果考虑到仪器、色谱柱、流动相的配制和温度等系统因素的影响规定理论塔板数按甘草酸铵峰计算应不低于 2 000。 【参考文献】 1 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部S.北京:化学工业出版社2005.59. 2 白 丽 陈 晓 辉 徐 新 盛 等 .HPLC 测 定 萆 薢 分 清 丸 中 甘 草 酸 的 含 量 J. 中 成药2005278:981,982. 3 刘 彤史 浚李 婷等.HPLC 法测定木香顺气丸中甘草酸的含量J.天津药学2003151:12,14. 4 郭定海林 晓.HPLC 法测定橘红片中甘草酸的含量J.中国药品标准 200456:58,60. 5 高 秋涛毕开顺 .HPLC 法测定 甘草附子汤中甘 草酸和桂皮酸的含量 J.中 草药20033410:913,914. 6 裘飞君裘学强陈仁兴.HPLC 法测定胃炎宁颗粒中甘草酸的含量J.中国药业2002119:39,40.