用免疫细胞学方法从母羊生殖道样品中检测鹦鹉热衣原体

用免疫细胞学从母羊生殖道样品中检测鹦鹉热衣原体 用免疫细胞学方法从母羊生殖道样品中检 测鹦鹉热衣原体 原梆 ? 56? l.5"7 用免疫细胞学方法 礁剥鳜嗽 18卷第3期l99B年8月(总第7.螂) S2.6 从母羊生殖道样品中检测鹦鹉热衣原体 鹦鹉热衣原体(C.Psi.)是绵羊地方传染 性流产的主要病因.对母羊来说本病只能感 染一次,流产母羊仍有生殖能力.初产母羊 和/或新生羔羊接触病羊胎盘而传播此病.流 产母羊的生殖道仍带C.Psi.,因此这些母羊 可能是地方流行性C.Psi.的储主.鉴别出带 菌母羊有助于改进管理战略,在羊群中消灭 本病.本论述了应用免疫细胞学方法从 慢性感染母羊的生殖道中检测C.Psi.. 本研究应用10只4岁龄经产Arcott母 羊.其中8只曾实验感染C.Psi.而流产或产 出弱羔,2只为非感染对照母羊.本研究中的 妊娠失败母羊.3年后有2只妊娠并产出健 康羔.在每次妊娠期间.一组4只母羊用 C.Psi.皮下实验感染;另一组4只母羊只在 第一次妊娠期间实验感染.母羊在发情第17 天同时用孕酮海棉和注射促性腺激素.在3 个人工发情期后,采集母羊血清,阴道拭子 桶舷 和阴道及宫颈细胞学样,.征第l,2次排卵 间隔2,3天;第2,3次排卵间0,3天第 2,3次排卵间隔2,5天,应用商品孕酮酶免 疫测定法测定血清孕酮浓度,以证实排卵. 收集样品时,先用阴道扩张器将阴道扩 开,用皮肤清洁器盛4洗必肽葡萄糖酸盐 清洗外阴,于距子宫颈约9cm采集阴道粘膜 左壁样品.用无菌聚酯纤维拭子蘸取阴道粘 膜.然后用农原体Clearview试验盒检查衣 原体脂多糖.采集拭子后立即从同一部位采 取阴道细胞学样品,从子宫颈外口采取子宫 细胞学样品然后涂在5cm凹孔玻璃载片 甲醇固定,一2O?贮存. 上.空气干燥, 用免疫过氧化物酶法检测细胞学样品中 的C.Psi.感染细胞.以0.3甲醇过氧化氢 溶液于室温下处理载片lO分钟,抑制内源性 过氧化物酶活性.将1t10(1稀释的PBS兔 血清,置室温3O分钟,以阻断非特异性免疫 和4(8%)头动物血清在BHV一1一gEEIISA 中呈阳性.总之.对于来自BHV1阳性牛群 的混合乳样(n=69),用BHV一1一gEELISA 有88.4检出抗体.无论是未接种牛群.还 是疫苗接种牛群.混合乳样的阻断率之间没 有差别.这表明抗疫苗株的抗体可能对 BHV一1一gEEIISA阻断率没有增强效果t这 与VanOirschot等(1997)的报道一致. 结果表明,BHV一1一gEELISA适合于检 测混合乳样中的BHV—l—gE抗体.并且在牛 群内有l0,15的动物血清BHV一1一gE EIISA阳性廿寸.混合乳样结果由"阴性"向 "阳性转变.这意味着在消灭BHV一1 中.可检测野生型BHV一1或/和糖蛋白E非 缺失的完全BHV一1疫苗的糖蛋白E特异抗 体的BHV一1一gEEIISA,能用来监渊混合乳 样以评估未接种牛群和疫苗接种牛群的 BHV一1感染率.如果混合乳样BHV一1一gE ELISA强阳性,建议对该牛群进行标记疫苗 接种.万一混合乳样BHV—l—gEELISA阴 性,就应检测所有单个动物以剔除BHV一1一 gE阳性血清动物和考虑中断疫苗接种.根据 应用BHV-1一gEEusA监铡无 这些数据, BHV一1牛群(疫苗接种过)的混合乳样,以 牛群是否引人了单个或少数感染动物是 行不通的.对BHV-1一gBEIISA也曾得出同 样的结论. Vet.Rec.,1998,142(9):219~220. 补忠军译黄绍棠校 一 墟白愁录污圻 星主E置墨生二直蛊佳銎塞簋!!鲞蒸翅!!堕生!旦簋筮!!塑f/ 一 7.组化法诊断瘟病毒感染引;诊治川免疫组化法诊断瘟病毒感染引起 的牛羊流产和围产期死亡 ' mu2, B.Thiir等 牛病毒性腹泻毒(BVDV)和绵羊边界病 病毒(BDV)同属黄病毒科的瘟病毒属. BVDV,BDV以及古典猪瘟病毒(CSFV)之 间有密切的抗原关系.应用传统血清学和病 毒学诊断方法会出现交叉反应.不同的瘟病 毒问投有严格的种属特异性.根据细胞培养 特性.BVDV可区分为细胞病变生物型和非 细胞病变生物型.BVDV呈世界性分布.而 BDV在绵羊养殖业占有重要地位的国家比 较常见. 本研究旨在评价应用免疫组织化学方法 苫,龌 S# 并与其它 诊断流产胚胎感染瘟病毒的潜力, 方法做了比较. 和方法 动物对213头牛胚胎,31R羊胚 胎,36头新生犊牛,25只新生羔羊进行了尸 检及检验.不考虑临床病史,对所有胚胎以 及出生后3天内将要死亡的动物进行瘟病毒 检铡.实验动物来自瑞士的不同地区.千尸 化的胚胎不作研究 应用冷冻切片进行免疫组织化学捡潮 球蛋白的结合.用PBS洗涤载片.再用对羊 源C.Psi.有特异性的单克隆抗体(mAb)于 室温下处理30~60分钟.使用前,用PBS将 mAb稀释成1:150(前已证明这种mAb对 C.Psi.母羊流产株有特异性).然后用1 1000稀释的免抗鼠IgG过氧化物酶氨联苯 胺结合物载片检测C.Psi.感染细胞与mAb 的反应用苏木紫做细胞的反衬染色.在 5cm样品孔中,用5O倍放大镜观察5个视 野进行细胞计数以估算感染和非感染细胞 数 阴性对照载片未见非特异性着染从三 年前实验感染C.Psi.而弓I起流产母羊获得 的样品中检出与C,Psi.单克隆抗体起反应 的细胞(图1).每次实验感染的妊娠母羊和 仅在第一次妊娠感染的母羊检测水平无差 gI』.每次采集的子宫颈或阴道样品中,感染 细胞数亦作了比较(图2).在发情期当天及 第l7天和发情后第3,19和36天.能观察 到大量感染细胞.在阴道样品载片上细胞总 数在40~300个之问,而在子宫颈,细胞数 为300~1200个.在发情期,细胞结构无明 显差异.C,Psi感染细胞的检出率增高与排 卵密切相关,并与衣原体Cleazvie~试验盒 检测阳性结果一致,但阳性结果很弱,这是 难以理解的.在其他时期,衣原体C|earview 试验结果呈阴性,并在子宫颈免疫细胞样品 中感染细胞甚少. 作为诊断绵羊C,Psi.慢性感染的一种 有效方法,我们在本文中阐述的阴道或子宫 免疫细胞检测方法有其应用潜力.对排卵时 问的掌握是其检测的关键.作为控制自然衣 原体感染的诊断指标,有必要对田问绵羊样 品进行检测以作进一步改进并揭示其真正效 果. Can.J.Vet.Res.,1998,62(1)l75,79 杨淑萍扬束译刘文韬校