冷沉淀解冻后凝血因子变化的实验研究

冷沉淀解冻后凝血因子变化的实验研究 [摘要] 目的 探讨冰冻冷沉淀解冻融化后，在不同温度、不同时间凝血因子活性的变化，为临床使用冷沉淀提供理论依据。 方法 随机抽取12袋(200 mL/袋)新鲜冰冻血浆，用离心法制备冷沉淀12袋，每袋冷沉淀混匀后立即用保存管分装成多个样本(2 mL/管)，速冻后-30?保存。样本在37?融化后分成两组，一组置于4?保存，另一组置于24?保存，两组分别于0、3、6、12、24、36、48、60 h进行PT、APTT、TT、FIB、F?、F?、F?、F?、F?、F? 水平测定。 结果 融化后的冷沉淀在不同温度保存，PT、APTT、TT、FIB、F?、F?、F? 变化差异无统计学意义(P , 0.05)，F?、F?和F? 变化差异有高度统计学意义(P , 0.01)。融化后的冷沉淀在两组温度保存48 h，APTT水平均有明显变化(P , 0.05)，在4? 6 h及24? 36 h，F? 水平下降均有高度统计学意义(P , 0.01)，且在4?组保存，F?衰减速度更快。除APTT、F?外，其他指标在两种温度下60 h均无明显的改变。 结论 融化后的冷沉淀在60 h的保存期内，除F?外，其他凝血因子活性没有明显的变化。在临床输注上，除非急需补充F?，融化后保存60 h的冷沉淀仍可输注使用。 [关键词] 冷沉淀;凝血因子;活性;温度;时间 [中图分类号] R457.1[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210(2012)04(b)-0028-03 冷沉淀(cryoprecipitate，CP)是将新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma，FFP)经1,6?解冻再经离心移除血浆后的余留不溶的沉淀物，CP主要含有凝血因子?(F?)、纤维蛋白原(FIB)、血管性血友病因子(von Willebrand factor，vWF)、纤维结合蛋白(Fn)和凝血因子??(F??)，广泛应用于治疗血友病、FIB缺乏、补充Fn等和纠正凝血功能障碍以及外科手术等方面[1]。然而，在临床输注上，时常出现融解后的CP因输注不及时而作为失效血液废弃，对血液资源造成浪费。因此，为准确了解CP使用的时效性，指导临床选择使用CP，减少CP解冻后因放置问题造成血液浪费，本研究对CP融化后于不同温度、不同时间下，检测各凝血因子活性，观察温度和时间对CP凝血因子活性的影响，为临床使用冷沉淀提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 标本来源及处理 随机抽取200 mL规格FFP 12袋，用离心法制备成CP，每袋CP制成后立即充分混匀，按无菌技术要求分装于多支保存管内，每管2 mL，包装标识后放入-50?速冻箱内冻结，冻成后转入-30?低温冰箱保存备用。 1.2 试剂与仪器 凝血酶原时间(PT)检测试剂盒(批号:20100802)，活化部分凝血酶时间(APTT)检测试剂盒(批号:20100802)，凝血酶时间(TT)检测试剂盒(批号:20100701)，FIB检测试剂盒(批号:20100702)，F?检测试剂盒(批号:20100903)，F?检测试剂盒(批号:20100902)，F?检测试剂盒(批号:20100903)，F?检测试剂盒(批号:20100916)，F?检测试剂盒(批号:20100904)，F?检测试剂盒(批号:20100903)，均为成都协和生物技术中心生产。CT-4T.6C血浆低温融化箱(美国CYTOTHERM公司);CA-50血凝仪(日本SYSMEX公司);J6-MI低温血液离心机(美国贝克曼公司);SDJ-20血液速冻机(天津天商冰源科技公司);-30?低温冰箱(日本三洋公司);4?冰箱(日本三洋公司);24?恒温箱(广东省医疗器械厂);HH-W420恒温水箱(江苏金坛医疗仪器厂)。 1.3 方法 取出保存管标本，置37?水浴中融化。每袋CP标本分为两组，第一组融化后置于4?冰 箱保存，第二组融化后置于24?恒温箱保存。用CA-50自动血凝仪，采用散射光法对两组CP血浆标本于0、3、6、12、24、36、48、60 h分别进行PT、APTT、TT、FIB、F?、F?、F?、F?、F?、F?项目测定。 1.4 统计学方法 应用SPSS 17.0统计学软件处理，所测数据用均数?标准差(x?s)表示，采用配对t检验，以P , 0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 各凝血因子检测结果 在两组温度保存48 h后，APTT水平均有明显变化(P , 0.05)，F?在4? 6 h及24? 12 h后有明显的变化(P , 0.01及P , 0.05)，相比24?，F?在4?保存衰减速度更快。其他指标在两种温度下60 h均无明显的改变。见表1。 2.2 不同温度保存下各凝血因子检测值比较 融化后的CP在不同温度保存，其PT、APTT、TT、FIB、F?、F?、F? 水平检测比较差异均无统计学意义(P , 0.05)，F?、F?和F?比较差异有高度统计学意义(P , 0.01)，24?组凝血因子活性高于4?组。见表2。 2.3 部分凝血因子60 h衰减情况 融化后的CP随着时间的延长，F?、F?、F?、F?均有衰减的趋势，F?变化较为明显。见表3。 3 讨论 CP是一种特别的血液制品，它的有效成分较为复杂，在临床应用上具有多重性。CP除传统用于补充F?、FIB、vWF、Fn等之外，近来也有相当多其他方面应用的研究[2-4]，但对CP融化后凝血因子变化文献报道不多。本研究就CP融化后分别放置4?及24?环境60 h，观察各时间点的凝血因子指标变化情况。 表1显示，CP融化后，对PT、TT、FIB、F?、F?、F?、F?和F?不同时间检测，结果差异均无统计学意义，而F?和APTT随时间延长变化有显著性，证明F?具有不稳定性。 本研究中的检测指标PT试验，是反映外源性凝血因子(?、?、?、?、?)水平试验， PT变化不明显，提示凝血因子(?、?、?、?、?)相对稳定或变化小而没有影响到TP改变;APTT是反映内源性凝血因子(?、?、?)水平的实验，APTT变化明显，说明凝血因子(?、?、?)当中有明显活性衰减，这对表1中F?衰减结果得到验证，进一步证明F?不稳定性;TT试验是用于测定FIB转化为纤维蛋白所需的时间，其与FIB检测结果说明FIB是一种稳定凝血因子。由此可见，F?是一种不稳定凝血因子，其他凝血因子(FIB、F?、F?、F?、F?、F?、F?)属稳定凝血因子。 也有文献认为F?和F?是一种不稳定的凝血因子[5-6]，但本实验结果表明，CP经60 h保存后，无论是在4?还是24?条件下，F?和F?活性均没有显著改变，证明F?和F?是稳定凝血因子，很多研究也证明了这一点[7-10]。 由表2可知，不同温度保存下，F?、F?和F?活性变化有所不同，表3显示F?、F?和F?在24?保存优于4?保存，这说明CP在24?环境保存会使F?、F?和F?活性衰减速度变慢，有利于稳定CP凝血因子活性，延长制品融化后保存期。 目前，我国对CP融化后的保存温度没有明确规定，在临床使用上，一般是将融化后暂不输用的CP保存于2,6?冰箱内，认为2,6?环境用利于凝血因子稳定。本研究表明，为保持CP凝血因子活性，2,6?保存不是一个好的选择，而是在室温(24?)保存更利于凝血因子稳定。对解冻CP，美国行业标准就明确规定贮存温度为20,24?[11]，本研究结果进一步 验证了此规定。 由表3结果可知，F?作为一种不稳定凝血因子，其半衰期长短与保存温度 有关。F?在4?保存，其半衰期24 h,保存至60 h，其活性只有0 h的46.1%;而在24?保 存，F?半衰期则大大延长，超过60 h。 由于人体血液中F?活性水平达到正常水平的25%左右即可发挥止血功能[12]，因此，除 非患者F?水平极度低下，可输注室温保存60 h的CP，有研究认为，输注室温保存6 h以上 的CP以补充F?是有效的[13]，从另一方面考虑，临床上绝大多数CP制品并不是用于补充F?， 因此，输注融化后60 h的CP是可行的。 本实验研究结果为临床对融化后CP保存及输注提供了理论依据，笔者认为，临床应优化 使用CP，对融化后暂不输注的CP应保存于室温(20,24?)条件，对有CP使用临床指征患 者(F?缺乏患者除外)，可以使用融化后60 h CP代替输注，减少因CP输注时效而造成的血 液浪费。 [参考文献] [1]何子毅，田兆嵩.冷沉淀的临床应用[J].中国输血杂志，2008，21(12):986-988. [2]杨孝顺，王桂华，朱妹媛，等.冰冻单采血小板与冷沉淀联合输注在消化道大出血中 的应用[J].临床输血与检验，2007，9(4):343-344. [3]Neimark AI，Gatkin ML. Use of cryoprecipitate in cmbined therapy of acute purulent pyelonephritis [J]. Urologiia，2005，(4):42-48. [4]Rock G，Neurath D，Lu M，et al. The contributution of platelets in the production of cryoprecipitates for use in a fibrin glue [J]. Vox Sang，2006，91(3):252-255. [5]王学锋，王鸿利.血栓与止血的检测及应用[M].上海:世界图出版公司，2002:10. [6]李福照.探讨新鲜冰冻血浆融化后不同放置时间凝血因子的变化[J].临床医学，2009， 29(8):31-32. [7]Naghadeh HT，Maghsudloo M，Tabatabaei MR. Coagulation factors ?，?，and ?，prothrombin time and activated partial thromboplastin time test results in thawed plasma stored at 1-6? for 5 days [J]. Blood Transfus，2011，9(1):95-98. [8]Sidu RS，Le T，Brimhall B，et al. Study of coagulation factor activity in apheresed thawed FFP at 1-6? for five days [J]. J Clin Apher，2007，21(4):224-226. [9]赵宏祥，葛健民，郭乃洲，等.温度和时间对?、?凝血因子活性的影响[J].现代检 验医学杂志，2006，21(1):55-56. [10]聂咏梅，廖剑锋，付涌水，等.不同保存温度对血浆部分凝血因子活性的影响[J]. 实用医学杂志，2005，21(9):881-883. [11]徐忠，沈行峰.血站和输血机构标准[M].上海:上海科学技术出版社，2003:69. [12]田兆嵩.临床输血学[M].北京:人民卫生出版社，2002:144. [13]Pesquera Lepdiatric LM，Hernandez FG，Lim RD，et al. Thawed cryorecipitate stored for 6h at room temperature:a potential alternative to factor ? concentrate for continuous infusion [J]. Haemophilia，2004，10(6):684-688.