小白鼠肝马尔尼菲青霉菌肉芽肿的细胞构成

小白鼠肝马尔尼菲青霉菌肉芽肿的细胞构成 病 理 学 教 研 室 韩桂萍 牛春峰 王立峰 崔 进 大兴安岭地区医院妇产科 王 哲 摘要 利用电镜 、免疫组化及特殊染色 Grocot t 方法分析播散性马尔尼菲青霉菌感染小白鼠肝的病理改变 。结果表明 ,小白鼠肝马尔尼菲青霉菌感染主要形成肉芽肿性病变 ,肉芽肿主要由枯 否细胞组成 。说明正常免疫状态的 BALB/ C 鼠的枯否细胞在形成马尔尼菲青霉菌感染引起的肉 芽肿中起主要作用 。 关键词 马尔尼菲青霉菌 ;枯否细胞 ;肉芽肿 将肝取下分别进行电镜 、免疫组化 、光镜组织学检查 。 马尔尼菲青霉菌为东南亚及中国广西一带3 方法 所特有 。近年来 ,随着 H IV 感染在东南亚和中 3 311 电镜检查 : 取 1mm肝组织于含 5 %蔗糖的 国南方的蔓延 ,播散性马尔尼菲青霉菌感染明 3 %戊二醛 011mol/ L 磷酸缓冲液固定 2 h ,1 %OSO磷 4 显增加 ,并且成为 A IDS 患者继肺外结核病 、隐 酸缓冲液 4 ?后固定 1 h ,常规制备超薄切片 ,醋酸铀和 球菌性脑膜炎后第三个常见机会性感染 ,该菌 醋酸铅染色后 ,透射电镜观察 。 成为影响未来 公 众 健 康 的 潜 在 机 会 性 致 病 312 免疫组化法 : 取 5mm ×2mm ×1mm 肝组织 用 OC T 包埋 , 在液氮内速冻 , 冷冻切片机连续切片 1 菌 。但是 ,该菌感染的致病机制 、流行病学 、μ4m 厚 ,切片在冷丙酮中固定 30min ,1 %过碘酸室温下 免疫学的许多重要特点仍不清楚 ,需进一步阐作用 10min ,加正常山羊血清封闭 30min ,滴加一抗 F4/ ) ( 80 、BM8 大鼠抗小鼠稀释液 4 ?孵育 12 h ,滴加二抗明 。小白鼠播散性马尔尼菲青霉菌感染在单核 () 生物素化山羊抗大鼠抗体稀释液室温下孵育 20min , 巨噬细胞系统形成肉芽肿 ,在人类最常受累的 () 滴加三抗 链霉素抗生物素 HR P 标记抗体稀释液室 器官是肺 、肝 、脾 。但肉芽肿内构成细胞 、巨噬 温下孵育 20min ,DAB 显色液室温下显色 3,5min ,分 别用甲基绿 、苏木素复染核 , 脱水透明 , 树胶封固 。用 细胞的起源 、分布及分化都不很清楚 。许多学 免疫组化阳性切片做阳性对照 , TBS 代替一抗作阴性 者用不同实验方法证明鼠巨噬细胞的来源 、分 对照 。 化和活化 ,但得出不同结果 。而目前未见以马 313 光镜标本制备 : 肝组织用 4 %多聚甲醛固定 尔尼菲青霉菌诱导形成的肉芽肿为模型 ,用免 24 h 后 , 按常规进行脱水 、透明 、浸蜡 、包埋 、切片 , 行 HE、Grocot t 染色 。 疫组化方法识别巨噬细胞分化抗原 ,分析研究 肝肉芽肿细胞构成 、分布及来源的资料 。 材料和方法 结 果 试 剂 1 单 克 隆 抗 体 F4/ 80 、BM8 从 BMA. () Bio medicals A GAugst ,Switzer购买 ,工作浓度为 1?50 ; 1 H E 及 Grocot t 染色SABC 试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供 ,工 A 组 : 肝小叶结构破坏 ,见大量肉芽肿 ,肉 作浓度为 1?100 。 芽肿中央可见上皮样细胞及多核巨细胞 ,周围 2 动物模型 选择 8 周龄 BALB/ C 小鼠 16 只 , () (雌雄各 8 只 ,体重 21 ?2g 由中国科学院哈尔滨兽医 大量巨噬细胞 , 边缘灶状淋巴细胞 、浆细胞浸 ) 研究所提供,随机分成 2 组 : A 组 8 只鼠 ,尾静脉接种 润 。大肉芽肿中心可见坏死 、多形核白细胞浸 ( 马尔尼菲青霉菌 IFM41708 菌株由北京医科大学王端 润 。Grocot t 染色见肉芽肿内大量马尔尼菲青 ) 礼教授提供分生孢子悬液 012ml/ 只 ; B 组 8 只鼠 , 尾 静脉接种无菌生理盐水 012ml/ 只 。3 周后处死小鼠 , 霉菌 ,形状为圆形 、椭圆形 ,有的呈腊肠状 ,有时 见横隔 。 B 组 :肝未见病理改变 。,BM8 在单核细胞以上成熟固定巨噬细胞表胞 2 免疫组化达 ,尤其枯否细胞 , 单核细胞不表达 ; F4/ 80 在 A 组 : ?F4/ 80 分布 :肉芽肿内绝大多数细 成熟固定巨噬细胞及单核细胞皆表达 。在肝肉 胞阳性 , 分布弥漫 , 少数细胞阴性 。 ?BM8 分 芽肿中央主要是 BM8 阳性的枯否细胞 ,只在肉 布 :阳性细胞主要分布在肉芽肿中心部 ,而外周 芽肿周围可见少量 F4/ 80 阳性而 BM8 阴性的 单核细胞 ,说明在马尔尼菲青霉菌引起的肝肉 阳性细胞少见 。B 组 : 肝窦内少量 F4/ 80 、BM8 阳性的细胞 。芽肿性病变中巨噬细胞主要是枯否细胞 ,外周 3 电镜 少部分是单核细胞 ,表明正常肝内马尔尼菲青 A 组 :肝肉芽肿中央少量指状突起的上皮 霉菌主要被枯否细胞吞噬清除 ,外周单核细胞 样细胞 、大量枯否细胞及巨噬细胞 ,巨噬细胞胞 可能逐渐分化成熟为巨噬细胞 ,构成其来源的 浆内外及吞噬空泡内有大量马尔尼菲青霉菌 , 一部分 。至于肝肉芽肿中未被 BM8 、F4/ 80 标 菌形态各异 ,圆形 、椭圆形 、腊肠状 ,中间有分隔 记上的巨噬细胞可能是来自骨髓中单核细胞前 10 () 的酵母样细胞 图 1。部分肉芽肿多形核白细 体或巨噬细胞亚群或上皮样细胞,因为根据 胞浸润 ,可见其胞浆内吞噬的马尔尼菲青霉菌 内源性过氧化物酶分布巨噬细胞可被分为 3, 4 ,5 ,7() 图 2。 5 种,具体是何种巨噬细胞有待于今后联 B 组 :肝未见病理改变 。 合细胞化学方法和标记巨噬细胞分化抗原的免 疫组化方法来明确这些细胞 。 讨 论()本文图 1,2 见封 4 页 肝肉芽肿内的单核巨噬细胞来源一直争论 参考文献不休 ,因为仅从形态学角度很难识别不同来源 的单核巨噬细胞 。当机体受马尔尼菲青霉菌刺 Supparatpinto K ,et al . Disseminated Penicillium Marneffei in2 1 激后 ,细胞免疫被激活 ,在此过程中单核巨噬细 fectio n in so ut heast Asia . L ancet ,1994 ;344 :110 胞系统的细胞形态 、膜分子表达 、细胞代谢及功 Baba T. Elect ro n micro scopic cytochemical analysis of hepatic 2 能 、基因型都发生一系列变化 。许多学者应用 granulo ma induced by Cryptococcus neofo r mans. Myco2 (不同刺激物 葡聚糖 、酵母多糖 、新型隐球菌 、杜 ( ) pat hologia ,1988 ;104 1:37 2 ,4 Bo uwens L , Wisse E. Proliferatio n ,kinetics ,and fate of mo no2 ) 3 凡利什曼原虫等分别诱导大鼠 、小鼠肝 5 cytes in rat liver during a zymo san2induced imflammatio n . J 肉芽肿形成及人类肝炎等模型 ,通过细胞化 L eukoc Biol ,1985 ;37 :531 学方法即内源性过氧化物酶分布及免疫组化方 Mcelrat h By ,Murray HW ,Co hn ZA. The dynamics of granu2 4 法来 分 析 肝 肉 芽 肿 组 成 成 分 及 形 成 机 制 。 lo ma fo r matio n in experimental Visceral L eishmaniasis. J Exp Masahiko 、Naito 等学者利用巨噬细胞内源性过 Med ,1988 ;167 :1927 氧化物酶分布区分巨噬细胞 ,提出 3 种不同观 Takashi Ueda ,et al . Elect ro n micro scopic st udy of endogeno us 5 点 。传统观点认为 ,枯否细胞是不能分裂的终 pero xidase activiy in human liver macrop hage . Histochem2 末细胞 ,由骨髓前单核细胞变成单核细胞然后 ist ry ,1995 ;193 :11 再定居于肝 。一些学者认为 ,肝肉芽肿内枯否 6 Masahiko Y ,Naito M , Kiyo shi Takahashi . Kupffer cell p rolif2 6 细胞可在肝局部自我分裂而补充更新; 而另 eratio n and glucan2induced granulo ma fo r matio n in mice de2 外一些学者认为枯否细胞具有双重来源 ,主要 pleted of bloo d mo nocytes by st ro ntium289 . J L eu Koc Biol , 是枯否细胞在肝局部分裂增生而补充更新 ,同 1990 ;47 :195 时部分单核细 胞 可 进 入 肝 转 变 成 为 枯 否 细 Bo uwens L . Local p roliferatio n and ext rahepatic recruit ment of 7 ( ) liver macrop hages kupffer cells in partial2bo dy irradiated rat s. J leukoc Biol ,1986 ;39 :687 Nibbering P H ,L eijh PCJ ,Van Furt h R. Quantitative immuno2 8 7 胞。本实验利用巨噬细胞分化抗原的相应cytochemical characterizatio n of mo no nuclear p hagocytes I I. 8 ,9 单克隆抗体 BM8 、F4/ 80 标记成熟巨噬细mo nocytes and tissue macrop hages. Immunology , 1987 ; 62 : 10 L eenen PJ M , et al . Mar kers of mo use macrop hage develop2 171 ment detected by mo noclo nal antibo dies. J Immunol Met h2 9 Malo ry U , Michels E , So rg C. A mo noclo nal antibo dy against an antigen p resent o n mo use macrop hages and absent f ro m o ds ,1994 ;174 :5 ( ) mo nocytes. Cell Tissue Res ,1986 ;243 2:421 ( ) 1998 —10 —06 收稿 Composit ion of Hepat ic Granul oma Format ion In duced by Penici l l i u m M a r nef f ei in Mice Ha n Gui pi n g et al )(Depart ment of Pat hology () Abstract Hepatic granulo ma were st udied by light micro scop y L Mco mbined wit h H E , Grocot t ( ) staining ,immuno histochemical met ho ds and elect ro n micro scop y EM . The result s showed t hat t he pat hological lesio n induced by P. m a r nef f ei in mice was granulo ma fo r matio n in t he liver , and t he granulo mas mainly co nsisted of kupffer cells. Key Words Penici l l i u m m a r nef f ei ; Kupffer cell ; Granulo ma CO激光治疗口腔乳头状瘤 74 例 2 理 疗 科王桂凤 一 院夏永华 口 腔 科 马晓楠 哈尔滨铁路中心医院 口腔乳头状瘤是较常见的良性肿瘤 ,无明,右手持激光刀气者伸舌或用压舌板暴露病灶 显不适 ,损伤后易出血 ,且有恶变倾向 。我科自化病灶或从蒂根部切割 , 气化范围超出病灶 2 1992 年以来与口腔科联合治疗 74 例 , 报告如 ,3 mm 。疑有恶变时应超出边界 015cm ,彻底 下 。 气化病灶 。术后应用口腔炎喷雾剂预防感染 。 临床资料 74 例中 ,男 44 例 ,女 30 例 ,年术后前两天进流食 。 结果与讨论 74 例均于 1 周内 1 次性治 龄 21 岁,79 岁 ,病程 2 年至 1 年半不等 ,病灶 愈 ,术后反应轻 ,无血肿及感染 ,病检为乳头状 面积 012,112cm ,大部分在舌体 ,共 42 例 ,约 瘤 ,无 1 例恶变 。口腔乳头状瘤是来自上皮组 占 57 % ,其他有在颊部 、扁桃体等 ,10 例伴寻常 织的良性肿瘤 ,一般认为由病毒诱发 ,以前曾采 疣 。乳头瘤呈外生性生长 ,高出粘膜 ,外观呈菜 用手术切除 ,术中出血多 ,损伤重 ,术后病人痛 苦大 。而采用 CO激光治疗 , 不出血 , 术野特 花样 ,表面粗糙 、发白或淡红色 ,有蒂或无蒂 ,个 2 别清晰 , 仅破坏病变组织 , 不损伤周围正常组 别人有异物感 。 治疗方法 常规 1 ‰新洁尔灭消毒 ,1 %利 多卡因局麻 , 将 CO激光输出功率调至 25 W 织 ,术后病人反应轻 ,不留疤痕 ,值得推广应用 。2 ( ) 1998 —05 —25 收稿 左右 ,光斑直径 012 mm ,用左手固定病灶 ,嘱患