丹皮酚_环糊精包合物的制备工艺研究_廖正根

A隐丹参酮PVP物理混合物　B隐丹参酮PVP固体分散体C隐丹参酮PEG物理混合物　D隐丹参酮PEG固体分散体AcryptotanshinonPVPphysicalmixtur　BcryptotanshinonPVPsoliddisprsion　CcryptotanshinonPEGphysicalmixtur　DcryptotanshinonPEGsoliddisprsion图4　隐丹参酮固体分散体的显微镜图Fig4　Microgramofcryptotanshinonsoliddisprsion丹参酮PVP固体分散体呈圆整的球状,粒径约为4570μm,隐丹参酮以5μm左右的微细晶体均匀分散在水溶性的PVP载体当中,因此可以显著地提高隐丹参酮的溶出度从图D可见,由于隐丹参酮PEG固体分散体是由熔融法制备后经粉碎而得,因此呈现不规则的块状,其粒径约为100μm,在光学显微镜下可以清楚地看到隐丹参酮的橙色微晶分散在无色透明的载体当中,隐丹参酮晶体的粒径在1020μm,比隐丹参酮PVP固体分散体中的隐丹参酮晶粒略大,可能是造成PEG固体分散体的溶出度比PVP固体分散体的溶出度略低的原因3　讨论31　固体分散技术是20世纪60年代Skiguchi首先提出的制剂技术,其基本原理是利用水溶性或亲水性载体将难溶性药物制成固体分散体,以增加其在水中的溶解度固体分散体可使难溶性药物具有高度分散性和高度润湿性,可以加速药物的溶出和吸收,从而提高药物的生物利用度[4]固体分散体的制备有溶剂法、熔融法、研磨法、喷雾干燥法等本实验选用熔融法的典型载体PEG和溶剂法的典型载体PVP来制备固体分散体,并比较它们对提高隐丹参酮溶出度的效果一般来说,固体分散体中载体(如本实验中的PVP或PEG)的用量增加,药物的溶出度也随之增加,但载体用量过多会给后续的制剂工艺带来不便,且会使得最后的制剂成品重量过大,因此,综合考虑这些因素,确定药物与载体的比例为1∶432　本实验制备的隐丹参酮PVP固体分散体和隐丹参酮PEG固体分散体均能显著提高隐丹参酮的溶出度,通过差热分析确证形成了固体分散体隐丹参酮以微晶形式分散在载体当中,由于隐丹参酮分散在PVP载体和PEG载体中的粒径和状态不同,导致隐丹参酮PVP固体分散体比隐丹参酮PEG固体分散体具有更高的溶出度Rfrncs:[1]　LiangY,YangYM,YuanSL,talProgrssoftanshinon′spharmacologyandclinicalapplication[J]ChinTraditHrbDrugs(中草药),2000,31(4):304307[2]　ShiNY,DongHM,HuangHJ,talPharmacologyandclincalapplicationoftanshinon[J]JChinPhys(中国医师杂志),2001,2(3):150151[3]　KX,PingQN,ShiAM,talThformationandsolubilizationofcfuroximaxtilsoliddisprsion[J]ChinPharmJ(中国药学杂志),2001,36(2):106108[4]　LuBNwTchniqusandNwDosagFormsofDrugs(药物新剂型与新技术)[M]Bijing:Popl′sMdicalPublishingHous,1998丹皮酚β环糊精包合物的制备工艺研究廖正根1,2,平其能1,邹　红2,仲　艳2(1中国药科大学药剂学教研室,江苏南京　210009;2江苏康缘药业股份有限公司,江苏连云港　222001)摘　要:目的　建立丹皮酚β环糊精包合物的制备工艺方法　以包合物收得率和包合率为指标,采用正交试验优选β环糊精包合丹皮酚的条件,在此条件下,采用3种不同的包合工艺制备丹皮酚环糊精包合物,并对pH和HPMC对包合的影响进行了研究结果　1份丹皮酚用6份量的乙醇溶解后,以每小时130V的速度加入45℃10份量β环糊精的饱和溶液中,搅拌包合至包合物形成,包合率可达80%,包合物收率可达75%以上;不同pH、HPMC下,丹皮酚相溶解曲线呈AL型,不同的pH和HPMC条件下包合稳定常数差异较大结论　采用优化的饱·842·中草药　ChinsTraditionalandHrbalDrugs　第36卷第6期2005年6月收稿日期:20041028基金项目:国家高技术产业发展项目(计高技[2001]2170号)作者简介:廖正根(1967—),男,博士研究生,研究方向:药物新剂型与新技术Tl:(0518)5521945　Email:lyzlyg@263nt通讯作者　平其能　Tl:(025)83271299　Email:pingqn@cpuducn和溶液法及工艺条件制备包合物,包合率与收率高、工艺简单、设备要求不高,适用于工业化生产pH25、05%HPMC条件可进一步增强药物与环糊精的包合作用关键词:丹皮酚;β环糊精;包合物中图分类号:R2842　　　文献标识码:B　　　文章编号:02532670(2005)06084205PrparationtchnologyofpaonolβcyclodxtrininclusioncompoundLIAOZhnggn1,2,PINGQinng1,ZOUHong2,ZHONGYan2(1DpartmntofPharmacy,ChinaPharmacuticalUnirsity,Nanjing210009,China;2JiangsuKanionPharmacuticalCo,Ltd,Lianyungang222001,China)Abstract:Objcti　Tostupthprparingtchnologyofpaonolβcyclodxtrin(βCD)inclusioncompoundMthods　ThinclusionconditionswroptimizdbyusingthorthogonaltstforthcompoundformationofpaonolβCD,takingthratofrcoryandinclusionasthcritriaThrdiffrntincludingmthodsorquipmntswradoptdandcompardwiththdocumntarymthodThffctofpHandHPMConthinclusionofpaonolwithβCDwasinstigatdRsults　Thinclusionratandrcoryratwrmorthan80%and75%,rspctilyfollowingthoptimizdsaturatdsolutionmthod,irsoling1partofpaonolin6partsofabsolutalcohol,thnslowlyaddingthsolutionintothsaturatdsolutioncontaining10partsofβCDin130Vhat45℃,kpingstirringuntilthinclusioncompoundformationAnALtypphassolubilitycurwasobtaindThdiffrncofapparntstabilityconstantissignificantundrdiffrntpHalusanddiffrntHPMCcontntsConclusion　Thtchnologyandprocdurarrlatisimplandhighfficint,whicharapplidforthindustrializationHPMC(005%)inpH25isshowntoincrasthinclusionofpaonolwithβCDKywords:paonol;βcyclodxtrin(βCD);inclusioncompound　　丹皮酚为牡丹皮、徐长卿的主要有效成分之一,具有易挥发、水溶性差和对胃肠道黏膜具有刺激性的特性,为了降低其挥发性、增大水溶性、提高稳定性和生物利用度,文献报道将丹皮酚磺化成盐[1],也有报道用超声波法制备丹皮酚βCD包合物[2],但包合率不高为提高包合率和收率,本实验对影响包合的诸因素进行了考察,经筛选优化得到了较佳的包合工艺1　仪器与试药　　HJ—5型多功能搅拌器(常州国华电器有限公司);KQ—250DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);QM—2SP20型球磨机(南京大学仪器厂);Agilnt1100系列高效液相色谱仪:CHA—S恒温振荡器(常州国华电器有限公司);牡丹皮(购于连云港市医药采购供应站,经鉴定为毛茛科植物牡丹PaoniasuffruticosaAndr的干燥根皮;丹皮酚对照品(批号07089003,购于中国药品生物制品检定所,质量分数>99%);β环糊精(广东省郁南县永光味精实业有限公司,质量分数>98%);羟丙基甲基纤维素K4M(进口分装,上海昌为医药辅料技术有限公司赠送),其他试剂均为分析纯2　方法与结果21　丹皮酚的提取:将牡丹皮药材打成粗粉过10目筛,加水润湿15h后,用流通蒸气蒸馏,收集7倍量馏出液,冷藏静置,析出结晶后滤过,滤液重蒸馏,收集3倍量馏出液,冷藏静置,析出结晶后滤过,合并两次结晶为所提丹皮酚结晶,HPLC法测定丹皮酚质量分数为947%22　包合物中丹皮酚的测定221　色谱条件:色谱柱:钻石ODSLichrosphr色谱柱(250mm×46mm,5μm);流动相:55%乙腈溶液;体积流量:10mLmin;柱温:30℃;检测波长:274nm222　曲线的建立:精密称取丹皮酚对照品3mg,置25mL量瓶中,加乙醇溶解并加至刻度,摇匀,作为对照品储备液分别精密吸取上述溶液05、10、20、30、40、60mL置10mL量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,进样,测定以质量浓度对面积作线性归,得归方程为Y=47607X95199,r=09999,线性范围672μgmL223　收率试验:称取βCD约3mg,精密加入丹皮酚对照品储备液2mL,置15mL具塞离心管中,精密加入8mL无水乙醇,混匀,密封,超声20min(250W、40kHz)后放置过夜,次日离心(5000rmin),精密取上清液进样,测定,计算得丹皮酚收率为1011%,RSD为193%(n=3)224　样品的测定:取丹皮酚包合物1g,研成粉末,精密称取5mg,置15mL具塞离心管中,精密加·843·中草药　ChinsTraditionalandHrbalDrugs　第36卷第6期2005年6月入10mL无水乙醇,其余操作同22323　饱和溶液机械搅拌制备丹皮酚包合物231　分散溶剂量对包合的影响:βCD与丹皮酚按10∶1的比例,称取丹皮酚适量,分别按1∶2、1∶4、1∶6、1∶8的质量体积比取无水乙醇分散,以每小时130V(V为配制的饱和βCD溶液的体积,下同)的速度加入到45℃饱和βCD溶液中,固定转速为900rmin,搅拌包合15h,置冰箱内冷藏24h析晶,滤过,并用少量纯化水洗涤后,再用适量醋酸乙酯洗涤3次后,50℃热风吹干,得白色疏松状包合物粉末,测定各项指标结果见1表1　分散溶剂量对包合的影响(x±s,n=5)Tabl1　Influncsofdisprsingsolnt′squantitistoinclusion(x±s,n=5)丹皮酚∶乙醇包合物收率%包合率%包合物中丹皮酚%包合物中丹皮酚∶βCD摩尔比1∶2748±27736±2385±03(064±003)∶11∶4758±23770±1888±02(066±002)∶11∶6787±23814±1189±02(067±002)∶11∶8733±26737±2187±03(065±002)∶1　　所得数据经Excl单因素方差分析表明4个水平总体均数的差别具有统计学意义结果表明乙醇用量为丹皮酚的6倍量时,最利于丹皮酚的包合,过高或过低都对包合有不良影响,故确定丹皮酚与无水乙醇的质量体积比为1∶6232　包合工艺的正交优选:参考文献,选择投料比、反应温度、包合时间3个对结果影响较大的因素为考察对象,每一因素各取3个水平,见表2选用L9(34)正交设计安排试验,以包合物收率和包合率为考察指标,确定最佳制备工艺为在统一标准下加权评分,两项指标最佳的分别定为30分和70分,最差的定为0分,规定包合物收率最好的9号试验8680%为30分,最差的3号试验5929%为0分,每降低1%则减去30(86805929)=109分;同法推出包合率每降低1%则减去224分,故总评分为[30109×(8680Y1)]+[70224×(7840Y2)]最后将两个指标分值之和作为该试验的分值,并进行方差分析,结果见表3、4丹皮酚与βCD的投料比对包合有显著性影响,其余两因素对以包合物收率和包合率为基础的综合考察指标无显著影响以包合物中丹皮酚包合率为指标的方差分析结果表明:丹皮酚与βCD的投料比与反应温度对其有显著影响,综合3个指标分析结果,确定最佳工艺为A1B2C3即丹皮酚与βCD的比例为1∶10,45℃包合15h24　饱和溶液超声法:除电动搅拌改为超声外,其余操作均按231进行包合表2　因素水平表Tabl2　Factorsandlls水平因　　素A反应温度℃B包合时间hCβCD:丹皮酚(g·g1)1451　6∶1260158∶13752　10∶1表3　正交试验设计结果Tabl3　Orthogonaldsignandrsults试验号ABCD(空白)收率Y1包合率Y2包合率评分综合评分Y11111772572522624216212227251768966628104313335929784070　70014212377695946275747645223173097524629277986231276194709　0　1830731328456755663649120832138538552618174662933218680630935716571综合评分K11932181010711858K21439205619441905K32035154023921643包合率评分K1159211384071213K2904147712991301K3117510561966115725　球磨法:将βCD加入球磨缸内,加入2倍量蒸馏水,然后按23项下方法加入丹皮酚无水乙醇溶液,在50rmin转速下,操作15h,50℃真空干燥,其余操作同23126　文献法:按照文献方法[2],取1g丹皮酚,用24mL40%乙醇溶解后,加入8gβCD,超声处理40·844·中草药　ChinsTraditionalandHrbalDrugs　第36卷第6期2005年6月min,其余操作同231以上几种方法制备包合物的结果见表5表4　方差分析Tabl4　Variancanalysis方差来源离差平方和自由度方差F值显著性综合评分A　67642　3382517B　44442　2222340C30092215046230P<005D　13082　654包合率评分A　80252　4013229P<005B　33232　1162　95C407932203861162P<001D　3512　175　　F005(2,2)=190　　F001(2,2)=990表5　4种不同方法制备丹皮酚βCD包合物结果比较(x±s,n=3)Tabl5　ComparisonofpaonolβCDinclusioncompoundsmadbyfourdiffrntmthods(x±s,n=3)制备方法包合物收率%包合率%丹皮酚%包合物丹皮酚与βCD摩尔比搅拌法784±16820±2090±02(068±002)∶1超声法702±18590±1173±03(054±002)∶1球磨法602±1352±01(038±001)∶1文献法[2]922±11367±1634±01(024±001)∶1　　所得数据经Excl单因素方差分析表明4种制备方法总体均数的差别具有统计学意义,运用饱和溶液机械搅拌法制得的包合物包合率和丹皮酚最高,故选择饱和溶液机械搅拌法27　pH与高分子材料对包合的影响271　pH对包合率的影响:取pH25、5、68、8的磷酸盐缓冲液,加入不同量的βCD制成不同浓度的溶液(分别为0、1、2、4、80、10、12mmolL)取上述βCD溶液各10mL于25mL锥形瓶中,均加入过量的丹皮酚,37℃振荡24h(100次min)至达溶出平衡滤过,取续滤液1mL置25mL量瓶中,加无水乙醇至刻度,超声20min,HPLC法测定丹皮酚以βCD浓度为横坐标(X),丹皮酚浓度为纵坐标(Y),进行线性归,根据归方程计算表观稳定常数,结果见表6表6　不同pH下丹皮酚的表观稳定常数Tabl6　StabilityconstantsofpaonolatdiffrntpHaluspH　　线性方程rKC(L·mol1)25Y=0429　X+0002109882357858Y=04021X+0003909873210268Y=03591X+0003309910169878Y=04302X+00033099842288　　KC=斜率S0(1斜率),其中斜率为归方程的斜率,S0为丹皮酚在该pH值下的溶解度272　高分子材料对包合率的影响:分别用0、005%、01%、015%HPMC溶液配制不同浓度的βCD溶液(分别为0、1、2、4、80、10、12mmolL)除37℃振荡48h(100次min)至达溶出平衡外,其余操作同271,进行线性归,根据归方程计算表观稳定常数,结果见表7表7　不同HPMC浓度下丹皮酚的表观稳定常数Tabl7　StabilityconstantsofpaonolatdiffrntHPMCconcntrationsHPMC　　线性方程rKC(L·mol1)0Y=042X+0003809986191005Y=05056X+000390974526201Y=04545X+0003709975225015Y=04888X+00037099722583　讨论31　丹皮酚水溶性较差,如将丹皮酚粉碎后直接加入βCD溶液中,则易析出丹皮酚结晶,使包合难以进行为使包合易于进行,需要将丹皮酚溶于一定的溶剂中使成分子状态存在由于丹皮酚溶于乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、苯和二硫化碳,考虑到乙醚易燃易爆,除乙醇、乙醚外的其余溶剂有一定毒性,为防止将这些溶剂带入成品,故用乙醇作为分散溶剂32　本实验采用丹皮酚的量作为包合率的考核指标,测定方法采用HPLC法,方法简便、灵敏、准确、重现性好按文献报道的方法制备的丹皮酚包合物采用本实验的分析方法测定的丹皮酚包合率与文献报道差异较大,可能是两者分析方法不同,也可能是以较高体积分数乙醇溶液作为包合介质对包合不利,文献报道[3],由于乙醇具有较强的极性,对包合物具有破坏作用本实验中也发现:随着分散丹皮酚的乙醇量的增大,包合率也增大,当分散丹皮酚的乙醇量增大到8倍量丹皮酚的量时(此时乙醇与水的比约为1∶10),包合率出现下降33　在供试品溶液的制备中,以乙醇为溶剂可将包合物完全破坏,从而使丹皮酚完全游离出来,实验证明,超声20min能将丹皮酚完全提出,这与文献报道[4]的须在超声后再浸泡几个小时不一致,其原因可能是不同的包合物对乙醇破坏的抵抗力有差异34　本实验除对包合的一般影响因素投料比、反应温度、包合时间等对丹皮酚包合进行了考察外,也较详细地考察了pH、HPMC对包合的影响,实验结果表明:根据Higuchi等的分类在不同的pH条件、不同的HPMC浓度下,丹皮酚的相溶解度曲线均呈AL型,由此可判定βCD对丹皮酚以1∶1摩尔比例进行包合·845·中草药　ChinsTraditionalandHrbalDrugs　第36卷第6期2005年6月35　在pH2568,稳定常数随pH的升高而降低,在pH68升到pH78时,稳定常数由170Lmol升到229Lmol表明两者在较酸性溶液和偏碱性溶液中包合作用较强,根据实验结果,宜选择pH25的条件进行包合,丹皮酚为弱酸性化合物,随pH的升高,丹皮酸的解离程度越大,因而包合作用越弱pH68升到pH78时,包合作用增加,可能是存在其他包合机制,有待进一探讨36　βCD能与许多化合物进行包合作用,但由于包合少量药物常需使用大量的βCD,包合效率并不高,因此在药物βCD包合物的形成过程中,常使用条件不同的添加剂,本实验考察了水溶性的高聚物HPMC对包合的影响,结果表明:加入005%015%HPMC均能使稳定常数有较大幅度的提高,导致平衡相溶解曲线向左上方移动,表明加入一定量的HPMC可使丹皮酚与βCD的包合作用增强,与文献报道一致[5]005%HPMC能使稳定常数提高37%,且使溶液黏度改变不大,故宜选择加入005%HPMC以增加包合率37　按照优化条件,本实验对常用的3种包合方法进行比较,结果表明:丹皮酚βCD包合物的制备以电动搅拌法为优,其包合率为82%,丹皮酚的质量分数为90%;在pH25、加入005%HPMC条件下,按优化条件制备3批包合物,平均包合率为91%,丹皮酚的质量分数为109%,未完全包合的原因可能是部分丹皮酚在包合过程中挥发损失所致Rfrncs:[1]　ShuJQ,WuCSlctionofoptimumsulfonatingconditionsofpaonolbyorthogonaltst[J]ChinTraditPatMd(中成药),1995,17(9):68[2]　ZangC,GaoJ,LinHW,talStudyonprparationprocdurofincludingcompoundofβcyclodxtrinwithpaonalthorthogonaldsign[J]ChinTraditPatMd(中成药),1996,18(11):13[3]　PithaJ,HoshinoJEffctofyhanolonformationofinclusioncomplxsofhydroxypropylcyclodxtrinswithtstostronorwithmthylorang[J]IntJPharm,1992,80:243251[4]　SongHT,GuoT,YanXT,talStudisonthprparationofcinnamonoilβcylodxtrininclusioncomplx[J]ChinTraditHrbDrugs(中草药)2000,31(11):818820[5]　LoftssonT,FriorisksdottirH,ThorisdottirS,talThffctofhydroxpropylmthylcllulosonthrlasofdxamthasonfromaquous2hydroxpropylβcyclodxrinformulations[J]IntJPharm,1994,104:181184大孔吸附树脂富集小蓟中咖啡酸酯类成分的研究许　浚1,张铁军1,龚苏晓1,黄晓君2,薛　艳1(1天津药物研究院,天津　300193;2天津中医学院,天津　300193)摘　要:目的　通过对23种大孔吸附树脂筛选,寻找适用于纯化小蓟中咖啡酸酯类成分的大孔吸附树脂,为从小蓟中工业化生产咖啡酸酯类成分提供依据方法　采用23种大孔吸附树脂对小蓟提取物进行吸附纯化,以总咖啡酸酯收率和纯度作为指标综合评价结果　23种吸附树脂中,以树脂HPD100吸附洗脱的总咖啡酸酯的收率最高为876%、纯度为522%结论　HPD100树脂综合性能良好,适用于小蓟中咖啡酸酯类成分的纯化关键词:小蓟;咖啡酸酯类;大孔吸附树脂;纯化中图分类号:R2842;R28602　　　文献标识码:B　　　文章编号:02532670(2005)06084603EnrichmntofcaffatinCirsiumstosumbymacroporousadsorptionrsinsXUJun1,ZHANGTijun1,GONGSuxiao1,HUANGXiaojun2,XUEYan1(1TianjinInstitutofPharmacuticalRsarch,Tianjin300193,China;2TianjinUnirsityofTranditionalChinsMdicin,Tianjin300193,China)Abstract:Objcti　TosarchforthmthodusdinnrichingcaffatsinCirsiumstosumbymacroporousadsorptionrsin,23typsofmacroporousadsorptionrsinwroptimizd,whichcouldproidthindustrialproductionofcaffatswithththorybasisMthods　Thadsorptionandlutionratios,productpurityandyild,astotalindics,wrcomprhnsilyaluatudby23typsofmacroporousadsorptionrsininnrichingthxtractsinCstosumRsults　ThproductpurityandyildofcaffatsbythHPD100typmacroporousadsorptionrsinwrthhighstandupto522%and876%Conclusion　ThHPD100typmacroporousadsorptionrsinshowsbttrcomprhnsiadsorption·846·中草药　ChinsTraditionalandHrbalDrugs　第36卷第6期2005年6月收稿日期:20041011作者简介:许　浚(1976—),男,新疆和田人,2001年毕业于沈阳药科大学中药学院,主要从事中药新药开发Tl:(022)23003935