杜仲对去势大鼠股骨重_矿物含量_胫骨抗弯力及血清碱性磷酸酶的影响

表 3 无患子提取物对硫代乙酰胺致小鼠肝损伤的影响 (€x ? s) 组别 剂量 C /mg# kg- 1 AST /U# d l- 1 ALT /U# dl- 1 空白对照 - 75. 5 ? 13. 4* * 195. 6 ? 20. 2 模型 0. 001 1738. 5 ? 126. 7 1441. 8 ? 121. 4 中药低剂量 2500 1375. 5 ? 111. 6* 1029. 7 ? 103. 1* 中药高剂量 5000 1252. 3 ? 106. 9* * 773. 6 ? 97. 2* * 与模型组比较, * P < 0. 05, * * P < 0. 01; n= 8 3 讨论 四氯化碳、扑热息痛、硫代乙酰胺损伤肝脏的生化机制不同。 一般认为, 四氯化碳损伤肝组织机制是四氯化碳经肝细胞色素 P450代谢激活后生成三氯甲基 ( # CC l3 )自由基, 可引起生物膜脂 质过氧化, 造成膜结构和功能损伤, 蛋白质等物质合成代谢发生 障碍。而硫代乙酰胺损伤肝细胞机制可能是损害了细胞膜结构 和功能。大剂量扑热息痛经肝细胞色素 P450代谢后, 生成的半醌 自由基过多使肝内 SGH 消耗,并与肝细胞蛋白质进行共价结合, 引起肝细胞坏死。以上实验结果提示, 无患子提取物对四氯化 碳、扑热息痛、硫代乙酰胺所致小鼠急性肝损伤均有明显的保护 作用, 能使急性肝损伤小鼠血清 AST、ALT活性均明显降低 ,具有 明显的保肝作用。说明无患子提取物对三氯甲基 ( # CC l3 )、半 醌自由基, 引起生物膜脂质过氧化, 造成膜结构和功能损伤,蛋白 质等物质合成代谢所引起的障碍及肝细胞坏死具保护作用。 参考文献: [ 1 ] 江苏新医学院.中药大辞典 (上册 ) [M ] .上海:上海科学技术出版 社, 1985: 343. [ 2 ] 时京珍, 刘耕陶. A-常春藤皂甙和无患子皂甙 B对小鼠肝微粒 体细胞色素 P450的作用 [ J] .中国药理学报, 1996, 17 ( 3) : 264. [ 3 ] 王维胜,龙子江,张 玲,等.无患子皂苷对肾性高血压大鼠血压及 左心室血流动力学的影响 [ J].现代中医药, 2007, 27( 3 ): 63. [ 4 ] 王维胜,龙子江,张 玲,等.无患子皂苷对肾性高血压大鼠血压及 血管活性物质的影响 [ J].中国中药杂志, 2007, 32( 16) : 163. [ 5 ] 祁 雪, 刘秀梅, 陈晓光,等.鹿茸口服液对小鼠实验性肝损伤的 保护作用 [ J] .中药药理与临床, 2004, 20 ( 1) : 42. [ 6 ] 王晓东, 赵军宁, 彭龙玲,等.关幼波验方制剂肝炎康颗粒剂对实 验性肝损伤的作用研究 [ J].中药药理与临床, 2004, 20( 1) : 38. [ 7 ] 赵 鹏, 姚思宇, 李 彬,等. 皂甙对乙醇性肝损伤的保护作用 [ J] .中国临床康复, 2004, 8( 30) : 6686. 收稿日期: 2008-08-13; 修订日期: 2008-12-10 基金项目:江苏省无锡市科技局 2007年社会发展项目 (N o. C SE00713) 作者简介:蔡建平 ( 1958-) ,男 (汉族 ) ,江苏无锡人,现任江苏省无锡市中医医院主任医师,南京中医药大学在读博士研究生,硕士学位,主要从事骨伤 科临床与研究工作. * 通讯作者简介:谢焕松 ( 1963-) ,男 (汉族 ) ,江苏常州人,现任南通大学生命科学学院副教授,主要从事植物学研究工作. 杜仲对去势大鼠股骨重、矿物含量、胫骨抗弯力 及血清碱性磷酸酶的影响 蔡建平 1, 张 贤 2, 夏树林3, 谢焕松 3* ( 1.南京中医大学,江苏 南京 210029; 2. 江苏省无锡市中医医院, 江苏 南京 214001; 3.江苏省南通大学生命科学学院,江苏 南通 226007) 摘要:目的 观察中药杜仲对去势大鼠股骨重、矿物含量、胫骨抗弯力及血清 ALP的影响。方法 80只 4月龄雌性 SD大 鼠随机分成 4组: 假手术组、模型组 (阴性对照组 )、阿尔法骨化醇 ( ALF )组 (阳性对照组 )和杜仲组 (实验组 )。除假手术 组打开腹腔, 暴露卵巢后即缝合外, 其他 3组均摘除双侧卵巢。手术后饲喂 10 d,阳性对照组和实验组分别用 ALF软胶 囊或盐杜仲冲剂灌胃, 1次 /d,另外 2组正常饲养。3个月后, 取各组股骨测定股骨重、矿物含量,取胫骨测定抗弯力, 取血 清测定碱性磷酸酶 ( ALP )活性。结果 与假手术组比较 ,模型组的股骨重显著降低 (P < 0. 05),而阳性对照组和实验组股 骨重无明显变化 (P > 0. 05); 实验组股骨矿物含量、ALP活性和胫骨抗弯力显著高于模型组 (P < 0. 05), 阳性对照组 ALP 活性显著低于模型组 (P < 0. 05)和假手术组 (P < 0. 01)。结论 盐杜仲可抑制骨吸收,提高骨的强度, 对去势大鼠骨质疏 松具有一定的防治作用。 关键词:去势大鼠; 杜仲; 抗弯力; 碱性磷酸酶 中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 1008-0805( 2009) 08-1967-02 E ffect of Eucomm ia Bark onW eight of Femur, M ineralContent, Anti- bend Strength of T ib iae and Serum ALP in Ovariectom ized Rats CA I J ian-ping 1 , ZHANG X ian 2 , XIA Shu-lin 3 , XIE H uan-song 3* ( 1. N anjing University of ChineseM edicine, 210029, China; 2. W ux iH o sp ital of TCM, Wux i 214001, China, 3. L if e Science Shool of Nantong University, Nantong 226007, China ) Abstract: Objective To obse rve the e ffect of Eucomm ia Bark on w e ight of femur, m inera l con tent, anti- bend streng th o f tibiae and serum ALP in ovar iectom ized ( ovx ) rats. Methods 80 fem al SD rats w ere d iv ided into 4 g roups: sham, negatire, positive, and experim ental groups. The rats in each g roup w ere ovar iec tom ized except sham operation g roup. 10 days after ope ra tion, intra- gastr ic adm in istration was used to rats in positive and expe rim en tal groups w ith A lfaca lc ido l ( ALF ) and Eucomm ia B ark respec- tive ly once a day. A fter 3 m onths, fem urs were separated and we ight and m ine ra l content we re determ ined, and anti- bend streng th o f tib iae and serum a lka line phosphatase ( ALP ) we re m easured in each g roup. Resu lts The we ight of fem ur in exper-i m enta l g roup w as dec reased obv iously (P < 0. 05), and positive and experim ental g roups had no significant change (P > 0. 05) as #1967# L ISH IZHEN MED IC INE AND MATER IA MEDICA RESEARCH 2009 VOL. 20 NO. 8 时珍国医国药 2009年第 20卷第 8期 compared w ith sham group. In experim enta l g roup, m ine ra l content, ac tiv ity o f se rum ALP and anti- bend streng th of tibiaew ere increased compared to negativ e g roup (P < 0. 05), m eanwhile activ ity o f ALP in positive group w as low er than nega tive(P < 0. 05) and sham g roups (P < 0. 01). Conclu sion Eucomm ia Bark can inhibit bone absorption and elevate the bone streng th, and has pro tetiv e and therapeutic e ffects on osteoporosis o f ovariectom ized ra ts. Key words: Ovx rat; Eucomm ia Bark; Anti- bend strength; ALP 骨质疏松是一个世界范围的、日趋严重的影响健康的重要问 题。因骨质疏松引起的严重后果 ) ) ) 骨折和巨额的医疗费用受 到了社会的高度重视 [ 1]。十多年来, 国内外开展了中医中药及 中西医结合防治骨质疏松症的研究, 取得了一定的进展, 但大多 数研究是成方及复方对骨质疏松症的防治作用,单味中药对骨质 疏松症 ( OP )的研究不多。本实验通过观察补肾中药杜仲对去势 大鼠骨质疏松部分指标的影响,探讨目前临床防治骨质疏松症最 常用中药杜仲对骨质疏松的防治作用。 1 1. 1 动物 健康 4月龄 SD雌性大鼠,体重 250~ 290 g,由南通大 学实验动物中心提供 [实验动物使用许可证号: SYXK (苏 ) 2007 - 0021]。 1. 2 药物 阿尔法骨化醇 ( A lfacalc ido,l ALF )软胶囊 (江苏南通 华山药业有限公司出品, 0. 25 Lg /粒,生产批号: 070403), 盐杜仲 (江苏江阴天江药业有限公司出品, 1 g /包, 生产批号: 070316)。 1. 3 试剂与仪器 血清碱性磷酸酶 ( ALP)活力测定试剂盒 (南京 建成生物工程研究所第一分所 )。 IMADA(依梦达 ) DPS- 0. 5型 数显推拉力计 (规格: 0. 1N - 500N, 日本 ) ; UV1200紫外 /可见光 分光光度计 (上海 MAPADA仪器有限公司 );台式离心机 ( Eppen- dor,f 5418型, 德国 )。 2 方法 2. 1 动物分组 SD大鼠随机分成 4组, 每组 20只, 即假手术组、 模型组 (阴性对照组 )、阿尔法骨化醇 ( ALF )组 (阳性对照组 )和 杜仲组 (实验组 )。 2. 2 动物手术处理 腹腔注射戊巴比妥钠麻醉大鼠, 阴性对照、 阳性对照和实验组大鼠在无菌环境下打开腹腔, 摘除卵巢, 腹腔 分层缝合, 肌注青霉素 ( 2万单位 /只 )。假手术组大鼠除不摘除 卵巢外, 手术操作均与其他组相同。 2. 3 药物灌胃 手术大鼠饲喂 10 d后, 阳性对照和实验组开始 进行药物灌胃。阳性对照组行 ALF灌胃, 按照每 3粒 ( 0. 25 Lg / 粒 )灌 10只大鼠的计量,蒸馏水加热融化后灌胃; 实验组行盐杜 仲灌胃, 按照每包 ( 1 g /包 )灌 10只大鼠的计量, 蒸馏水冲溶灌 胃, 两组大鼠灌胃均 1次 /d,连续 3个月, 其他组大鼠正常饲养。 2. 4 股骨重测定 各组大鼠称重,然后取左侧股骨, 剔除骨表面 软组织 ,称重。 2. 5 骨矿物含量测定 取各组大鼠股骨, 剔除骨表面软组织, 于 三氯甲烷B甲醇 = 2B 1溶液中脱脂 72 h, 置 M uffe r炉中 600e 加 热 30 m in,冷却至 200 e 时取出, 置干燥器中冷却至室温,精密称 重直至恒重。再次置 M uffer炉中 700~ 800 e 下灰化 12 h, 降温 后取出置干燥器中 30 m in,称重, 重复灰化至恒重, 记灰分重。 2. 6 抗弯力测定 取各组大鼠胫骨, 剔除骨表面软组织, 置推拉 力计模具上, 模具支架间距 3 cm, 自中点处下压, 胫骨断裂 时压力 ( N )。 2. 7 血清碱性磷酸酶 ( ALP )活力测定 取各组大鼠外周血,凝固 后 10 000 r /m in离心分离血清。ALP测定采用试剂盒进行,具体 步骤: 血清 10 L ,l加入试剂一 (缓冲液 ) 100 L ,l试剂二 (基质液 ) 100 L ,l混匀 , 37e 水浴 15 m in, 加入试剂三 (显色液 ) 300 L ,l混匀 后 520 nm比色,得 ALP活性单位值 (金氏单位 )。 2. 8 统计 采用 Excel软件 t检验方法统计,所有数据均以 €x ? s表示,检验水准 A= 0. 05。 3 结果 3. 1 杜仲对股骨重及矿物含量的影响 与假手术组大鼠比较, 模 型组大鼠的股骨重显著下降 (P < 0. 05) , 说明骨量丧失较为明 显, 而阳性对照组大鼠和实验组大鼠的股骨重与假手术组没有显 著差别。矿物含量的数据显示模型组大鼠与假手术组无显著区 别, 而实验组与模型组比较,矿物含量显著上升 (P < 0. 05), 而阳 性对照组的变化则不显著 (见表 1及图 1)。 3. 2 杜仲对胫骨抗弯力的影响 测定数据表明, 杜仲对实验组大 鼠胫骨抗弯力具有显著增强作用 (P < 0. 05), 这种增强作用甚至 超过了假手术组 (P < 0. 05) , 说明杜仲对骨强度具有显著影响 (见表 1及图 1)。 3. 3 杜仲对血清 ALP的影响 测定数据显示 ,实验组大鼠血清 ALP活性明显高于模型组 (P < 0. 05),而阳性对照组则明显低于 模型组 (P < 0. 05)和假手术组 (P < 0. 01), 模型组与假手术组无 显著差别 (见表 1,图 1)。 表 1 各组大鼠测定值 (€x ? s) 组别 体重 m /g 股骨重 m / g 矿物灰分 m /mg 抗弯力 /N ALP /金氏单位 假手术 324 ? 30. 4 1. 13 ? 0. 13 44. 4 ? 5. 6 71. 1 ? 11. 1 16. 5 ? 5. 9 模型 388 ? 39. 8v v 1. 04 ? 0. 05v 42. 1 ? 2. 2 72. 0 ? 10. 2 13. 6 ? 4. 0 阳性对照 353 ? 22. 7* v 1. 08 ? 0. 06 44. 8 ? 3. 4 78. 6 ? 13. 5 10. 3 ? 4. 6* v v 实验 362 ? 31. 5v 1. 07 ? 0. 07 44. 9 ? 3. 4* 84. 9 ? 16. 0* v 19. 4 ? 7. 6* 与模型组比较, * P < 0. 05;与假手术组比较, v P < 0. 05, v v P < 0. 01 4 讨论 使用去势大鼠模拟人类中女性卵巢功能降低所引起的骨质 疏松症已成为学术界应用最多的动物模型 [ 2]。利用模型动物,不 仅有助于研究 OP发生发展的分子机理, 还有助于进行药物干预 和治疗的机理探讨 [ 3]。因此本实验选择了去势大鼠动物模型,以 临床上治疗骨质疏松的药物阿尔法骨化醇 ( ALF )为阳性对照 组 [ 4, 5], 观察了杜仲对 OP的干预效果。 从测定的几项指标来看,杜仲对骨质疏松具有一定的防治作 用, 但与 ALF的作用比较, 有几点不同: ¹ 数据显示, 去势大鼠体 重明显高于假手术组 (P < 0. 01), 这一点与田茂友等 [ 6]报道有所 不同而与 Y in J等 [ 3]报道相同, 说明雌激素变化对体重的影响较 大。比较 ALF和杜仲, ALF对去势大鼠体重增加的作用有较为 明显的抑制作用 (P < 0. 05 ), 但盐杜仲却没有显著影响 (P > 0. 05)。º 研究发现,去势动物股骨重显著降低,而骨矿物含量没 有显著差异, 说明去势大鼠的骨量丧失主要为有机物的丧失, 丧 失的有机物为何种物质有待于进一步分析研究。杜仲对骨矿物 含量的提升具有较明显的作用 ,而 ALF却没有。» 骨生物力学 中的抗弯力是一项客观反映骨强度的综合指标, 是各种抗骨 丢失措施的重要指标之一 [ 7]。大多数学者认为对骨质疏松的干 预不但要重视骨量, 更应该关注骨的质量, 因为骨质疏松最终的 后果是因为骨的脆性增加而导致骨折。本文研究发现, 假手术组 和模型组的抗弯力无差别, ALF对抗弯力的影响也无显著性, 而 杜仲制剂却能够显著提高骨抗弯力 (P < 0. 05), 这不仅表现在与 模型组的比较上,也表现在与假手术组的比较上。由于本文杜仲 实验是在去势大鼠组进行的, 因此该结果暗示杜仲对非去势大鼠 骨强度可能具有更为显著的增强作用, 当然这还有待于进一步实 #1968# 时珍国医国药 2009年第 20卷第 8期 L ISH IZHEN MED IC INE AND MATER IA MEDICA RESEARCH 2009 VOL. 20 NO. 8 验加以证实。¼大量研究证实 ,碱性磷酸酶 ( ALP)由成骨细胞产 生, 富含于胞浆中, 部分 ALP分泌至血液中使血清 ALP明显增 加。ALP是骨重建活跃性和成骨细胞活动性的指征,它既可做为 成骨细胞的功能标记物, 又可反映其分化成熟程度 [ 8, 9]。本文实 验观察到, ALF明显降低了模型组的血清 ALP, 而杜仲却显著提 高了血清 ALP活性。 图 1 各组大鼠测定值的比较 上述 4点提示, 杜仲对去势大鼠骨质疏松的作用机理与 ALF 存在着差异。 作为单味中药, 杜仲对机体骨代谢的调节作用可能仅仅作用 于某些环节,因此对防治骨质疏松症仍有局限性。杜仲发挥作用 的有效组分或部位, 及对骨代谢调节的分子机制还有待于进一步 研究。 参考文献: [ 1 ] 邱明才.骨质疏松研究的现状与展望 [ J] .中华医学杂志, 2001, 81 ( 14) : 833. 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[ 9 ] 董 华,胡乃武,董清平. 骨痛仙胶囊对家兔骨折血清碱性磷酸酶、 钙、磷影响的实验研究 [ J] . 中医药学报, 2003, 31 ( 2) : 51. 收稿日期: 2008-08-29; 修订日期: 2008-12-02 基金项目:江西省卫生厅中医科研 (No. 2007A019; 2007A114) 作者简介:汤 菲 ( 1968-) ,女 (汉族 ) ,江西九江人,现任江西中医学院附 属医院副主任医师,学士学位,主要从事中西医结合临床研究工作. * 通讯作者简介:刘端勇 ( 1975-), 男 (汉族 ) ,江西南昌人, 现任江西中医 学院讲师,硕士学位,主要从事溃疡性结肠炎与中药免疫药理研究工作. 四神丸化裁治疗溃疡性结肠炎的对比性实验研究 汤 菲 1, 赵海梅2,潘琦虹 2,刘端勇2* ,左志琴 3 ( 1.江西中医学院附属医院,江西 南昌 330006; 2. 江西中医学院,江西 南昌 330025; 3.江西中医学院,江西 南昌 330004) 摘要:目的 探讨四神丸化裁前后治疗实验性溃疡性结肠炎的效果及作用机制异同。方法 50只小鼠分成 5组: 即正常 组、模型组、四神丸组、加味四神丸组和阳性对照组, 采用传统的 DSS法复制小鼠溃疡性结肠炎模型, 给药 10 d后, 观察其 病理组织学变化, 并采用流式细胞术检测其结肠上皮细胞凋亡率, 用 ELISA测定其外周血 PAF及其结肠组织匀浆 TNF- A, IL- 10, TGF- B表达水平。结果 各治疗组结肠指数、结肠损伤评分、病理组织学评分及细胞凋亡率较模型组明显下 降 (P < 0. 01或 P < 0. 05)。同时四神丸明显升高 TGF- B表达水平 (P < 0. 05), 而对 TNF- A, IL- 10, PAF表达水平作用 不明显。而加味四神丸则可显著降低 TNF- A及 PAF表达、升高 TGF- B水平较明显 (P < 0. 01或 P < 0. 05), 同时,两治 疗组之间比较, 可见加味四神丸降低 TNF- A, PAF表达, 升高 IL- 10水平明显优于四神丸组。结论 四神丸和加味四神 丸二者均可有效缓解实验性溃疡性结肠炎的炎症损伤,其作用机制的差异性可能在于加味四神丸可以通过抑制血小板 活化因子, 调节结肠局部促 /抗炎因子之间的平衡来实现,而四神丸可能是通过升高 TGF- B表达水平, 促进上皮损伤后 修复, 溃疡愈合。 关键词:四神丸化裁; 溃疡性结肠炎; 疗效; 机制 中图分类号: R289. 5 文献标识码: B 文章编号: 1008-0805( 2009) 08-1969-03 溃疡性结肠炎 ( U lce ra tive C o litis, UC )是以直肠、结肠黏 膜及黏膜下层的炎症和溃疡形成为病理特点的慢性非特异性 肠道疾病 [ 1]。其属于中医0泄泻 0 /久痢 0 /肠癖 0 /滞下 0 /肠 风 0 /脏毒 0等范畴 , 其病机多认为是以脾肾亏虚为本 , 以湿热 为标, 同时也有很多医家认为溃疡性结肠炎反复发作、缠绵难 愈 , 血瘀是 UC发病过程中的一个中心环节 [ 2]。因此治疗时 常见常用治法和活血化瘀法联合使用, 疗效显著 [ 3]。尽管两 #1969# L ISH IZHEN MED IC INE AND MATER IA MEDICA RESEARCH 2009 VOL. 20 NO. 8 时珍国医国药 2009年第 20卷第 8期