复方红豆杉胶囊对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

时珍国医国药 20 20年第 21卷第5期 复方红豆杉胶囊对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响 杨爱珍 ，刘向荣 ，王 蕊 ，厉璐帆 ，马世平 (1．中国人民解放军第 81医院全军肿瘤中心实验科，江苏 南京 210002； 2．江西省人民医院，江西 南昌 330006； 3．中国药科大学，江苏 南京 210009) 摘要 ：目的 采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法观察复方红豆杉胶囊对血管生成的影响。方法 种蛋在孵育7d后制备CAM 模型，复方红豆杉胶囊低、高剂量合药血清、生理盐水、硫酸鱼精蛋白、空白血清滴加于CAM面载体上，作用48h后观察 胚胎存活情况，显微镜下计数 CAM栽体周围的一、二级血管数 目。结果 复方红豆杉胶囊低、高剂量组均有抑制 CAM血 管生成作用，一、二级血管数 目明显 少于生理盐水和空白血清组(P<0．01)。结论 复方红豆杉胶囊具有明显的抑制 CAM血管生成的作用。 关键词 ：复方红豆杉胶囊； 鸡胚绒毛尿囊膜 中图分类号：R285．5 文献标识码：B 血管生成 文章编号：1008-0805(2010)05—1261-01 复方红豆杉胶囊是中药复方制剂，由红豆杉 、红参、甘草 3味 中药组成，适用于肺癌、胃癌、大肠癌 、肝癌、口腔癌等中晚期癌症 的治疗 ～ ，对放化疗有增效作用。复方红豆杉胶囊临床上抗肿 瘤作用疗效确切，但是否具有抑制肿瘤血管生成的作用，目前尚 未见报道。本研究利用鸡胚绒毛尿囊膜法观察复方红豆杉胶囊 对血管生成的影响。 l 材料与仪器 1．1 药品与试剂 复方红豆杉胶囊(重庆赛诺生物药业股份有 限公司，批号：090301)；硫酸鱼精蛋 白注射液(上海第一生化药 业有限公司，批号 ：080102)；新洁尔灭(南昌白云药业有限公司， 批号：080501)；水合氯醛(国药集团化学试剂有限公 司，批 号 041210)；丙酮(南京化学试剂厂，批号：990407)；甲醇(江苏汉邦 科技有限公司)： 1．2 动物 清洁级雄性 SD大鼠，体质量(200±20)g，由浙江省 实验动物中心提供(许可证号：20080033)。新鲜种蛋，产出两天 内用于实验，蛋重 50～60 g，由南京市六合区黄木桥孵化场提供。 1．3 仪器 AIR TECH超净工作台(苏净集团安泰公司)；Forma se~esⅡCO 培养箱(美国Thermo公司)；光学显微镜(重庆光学 仪器厂)。 2 方法 2．1 含药血清的制备 清洁级雄性 SD大鼠，常规饲养。复方红 豆杉胶囊低剂量和高剂量分别按成人(60 kg)体重的6倍(180 rag／kg)和 I2倍(320 m kg)灌胃给药，空白血清组大鼠每天灌 胃相同体积的蒸馏水。以上各组灌 胃 1次／d，连续灌胃7 d。于 末次灌胃2h后 ，水合氯醛麻醉(35 mg／kg)，腹主动脉取血，3 000 r／min，10 min离心 ，取上层血清。无菌滤器(直径 0．2 btm)过滤 除菌，密封 ，一20 保存。 2．2 CAM模型的制备 、 2．2．1 种蛋的孵育 选择产出2d内的新鲜种蛋，先用温水清洗 2次，再用 1：1000的新洁尔灭清洗表面，最后在超净台内用 75％酒精擦拭表面，放入无菌培养箱孵育，设定温度在 37~C，湿 度在40％ ～60％。种蛋大头朝上 ，45。倾斜。为促进羊膜运动， 防止胚胎发生粘连，每天翻蛋 4次。 2．2．2 鸡胚的检查 使用聚光灯源，自制照蛋灯。每天观察胚胎 发育情况，随时淘汰未受精 、死胎及胚胎发育不良的种蛋： 收稿日期：2009-05-08； 修订日期：2010-02—28 作者简介：杨爱珍(1965．)，女(汉族)，浙江上虞人，现任中国人民解放军 第81医院副主任技师，硕士学位，主要从事实验肿瘤学研究工作． 2．2．3 假气室的制备 种蛋孵育至第 7天，无菌条件下，在种蛋 气室端打一个 1～2／'niT／的小孔，滴加 5O l生理盐水使鸡胚绒毛 尿囊膜下陷，洗耳球从小孑L处吸气，使鸡胚绒毛尿囊膜与壳膜分 离，用弯头镊剥去蛋壳开窗(约 1．0 ClI]×1．0 cn1)，去除壳膜，制 成假气室。用灭菌透明胶密封开窗处，继续孵育 24 h。 2．3 药物对 CAM的作用 随机分为生理盐水组，硫酸鱼精蛋白 组，空 白血清组，复方红豆杉胶囊低高剂量组 5组。开窗 24 h 后，超净台内揭去透明胶 ，将灭菌好的擦镜纸片作为载体放在 CAM的血管最少处，每枚种蛋加药量为 10 l，将其轻轻加到载 体上。加药后 ，用透明胶封闭窗口，标记后继续孵育。48 h后 ，记 录鸡胚存活率，揭去透明胶，固定液(乙醇：丙酮 i：1)固定 15 rain，以载体为中心 ，剪下 CAM，水中展开后，铺于滤纸上，拍照， 显微镜下观察血管数。以载体为中心，1 mill以内为一级血管，5 mm内为二级血管，一、二级血管分别观察分析。 2．4 统计学方法 数据以丘±s表示，进行组间 t检验。 3 结果 3．1 复方红豆杉胶囊对鸡胚存活率的影响 复方红豆杉低、高剂 量组血清作用于 CAM后 ，对鸡胚的存活率未见明显影响。结果 见表 1 表 1 复方红豆杉胶囊对 CAM模型存活率的影响( ± ) 3．2 复方红豆杉胶囊对 CAM血管形态的影响 实验结果见图 1，生理盐水组和空白血清组血管生长正常，硫酸鱼精蛋白组、复 方红豆杉胶囊低、高剂量组血管计数明显减少，血管颜色苍白、变 浅，载体放置部位无血管生成。 3．3 复方红豆杉胶囊对 CAM血管生成的影响 结果见表2。硫 酸鱼精蛋白组 、复方红豆杉胶囊低 、高剂量组明显抑制血管的生 成，与生理盐水组、空白血清组相 比，有显著性差异(P<0．01)。 4 讨论 血管生成是指从已存在的血管中长出新的毛细血管的过程。 肿瘤的生长和转移都依赖于新生血管的形成。新生血管为肿瘤 的生长提供营养和排出废物，刺激肿瘤生长，促使肿瘤向其他组 织器官转移。原发灶血管数量的增多，增加了肿瘤转移的可能 · 1 261· 时珍国医国药2010年第 21卷第 5期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL．21 NO．5 性，即新生血管形成与肿瘤的转移倾向呈正相关。因此，抑制肿 瘤血管生成已成为近年来控制肿瘤生长和抗肿瘤转移研究中的 热点之一。 ■■■ 空白血清组 硫酸鱼精簧自迥 ■■ 复方红豆杉胶囊高剂量组 复方红豆杉腔囊低刘量翅 阻止肿瘤细胞的增殖。红参是人参的加工品之一，其主要抗肿瘤 成分是人参皂苷。人参皂苷R 可以对CAM血管生成有显著的 抑制作用 。人参皂苷 Rg3联合紫杉醇为主化疗具有协同抗肿 瘤作用，尤其在稳定肿瘤方面优势明显 。人参皂苷 Rg3可能 通过抑制碱性成纤维细胞生长因子的产生，以抑制肿瘤血管的生 成，也可诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长 。甘草性平，味甘， 归十二经，有解毒、祛痰、止痛、抗癌等药理作用。现代研究表明， 甘草酸、甘草黄酮对宫颈癌、乳腺癌、胃癌、肝癌有抑制其增殖作 用 。其抗肿瘤的可能机制为通过增加免疫细胞数量来抑制肿 瘤的生长，但未见有抑制血管生成的报道。三药联合应用，抑制 血管生成，增强免疫力。本实验研究通过观察复方红豆杉胶囊对 CAM模型血管生成的影响，了复方红豆杉胶囊具有明显的 抑制新生血管的生成，间接证明了其对恶性肿瘤的治疗作用，相 关机制尚有待进一步探讨。 参考文献 ： [1] 谭永忠，李 静，李忠友 ，等．复方红豆杉胶囊治疗中晚期恶性肿瘤 临床观察[J]重庆医学，2002，31(6)：525． 图1 复方红豆杉胶囊对 CAM血管形态的影响 表2 复方红豆杉胶囊对CAM血管生成的影响(i±s) [3] 塑型 ! 二堡 笪塑 堡 三堡 笪塑 堡 生理盐水 1o 24．2 23 77 49．8±4．66 [4] 空白血清 11 27 9±4 44 52 6±3．83 硫酸鱼精蛋白 10 14 8±4．44⋯ △△△ 25 5±3 37⋯ △△△ ⋯ 复方红豆杉胶囊低剂量 lO 17．5±4 82 △△△ 33 7±5．52⋯ △△△ L。 星直丝星丝堕塞直型量 ! ： ：墼：：：竺 !： ： !：：：： 与生理盐水组比较， P<0．01，⋯ P<0 001；与空白血清组比较，△Ap< [6] 0．01．△△△P<0 ． 001 r 7] 复方红豆杉胶囊由红豆杉、红参、甘草三味中药组成。红豆 杉的提取物紫杉醇是治疗转移性卯巢癌和乳腺癌的有效药物之 一 。 研究表明紫杉醇对血管生成有很强的抑制效应 ，证实紫杉醇 是一种血管生成抑制因子 。紫杉醇能够明显抑制裸鼠肝癌的 血管生成，是一种极其有效 的化疗药物 J。其作用机理可能是 『9] 通过与微量蛋白结合，促进其聚合，抑制细胞的有丝分裂，有效地 刘琳琳，胡志敏 复方红豆杉胶囊配合肺积消 1号方治疗老年晚期 肺癌32例[J]．实用中医内科杂志，2008，22(3)：23． 嗪红丽，李畦，钟 鸣．等．复方红豆杉胶囊治疗肝癌6o例临床研 究[J]．中医杂志，2006，47(4)：277． 阎家族，王 悦．紫杉醇抑制血管生成的研究[J]．药物生物技术， 2001，8(1)：30． 许 俊，刘志苏，张中林．紫杉醇对裸鼠人肝癌血管生成和肿瘤生 长、转移作用[J]武汉大学学报，2005，26(4)：449． 耿怀成，陈龙帮，楮晓源．人参皂苷 Rg3抗血管形成作用的实验研 究[J]．医学研究生学报，2001，14(4)：193． 袁国荣，叶再元．中药血管抑制剂人参皂苷 Rs3联合紫杉醇治疗胃 癌术后肝转移的研究[J]．中华中医药学刊，2008，26(4)：884． 张 荣，赵 翌，刘基巍，等．人参皂苷R 诱导小鼠肝癌细胞凋亡 及抑制肿瘤血管内皮生长因子生成的研究 [J]．时珍国医国药， 2007，18(1)：130． 马 淼，周旭莉，户元林，等．乌拉甘草有效成分对人体4种肿瘤细 胞增殖与凋亡的影响[J]．时珍国医国药，2008，19(1)：9． 蹄叶橐吾乙醇提取物对肝细胞色素 P450的影响 李丽波，孙 超，王玉春 (齐齐哈尔医学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006) 摘要：目的研究蹄叶橐吾乙醇提取物对大鼠和小鼠肝细胞色素P450(CYP450)的影响。方法 蹄叶橐吾乙醇提取物13' 服给药后，观察其对小鼠戊巴比妥钠催眠作用的影响、对大鼠肝微粒体 CYP450含量、肝脏指数的影响，采用 HPLC测定 探针药的代谢率观察其对大鼠肝 CYP450的7种亚型酶活性的影响。结果 蹄叶橐吾乙醇提取物对戊巴比妥钠诱导小鼠 的睡眠时间无影响，大鼠肝 CYP450含量及肝脏指数无显著变化，对大鼠肝 CYP450的7种亚型探针药的代谢率亦无影 响。结论 蹄叶橐吾乙醇提取物对肝药酶无诱导作用。 关键词：蹄叶橐吾；肝细胞色素P450； 诱导作用 中图分类号：R962 文献标识码：B 文章编号：1008-0805(2010)05—1262-03 细胞色素 P450(cytochrome P450，CYP450)是生物体内参与 各类外源性及内源性物质代谢的主要酶系，负责 90％以上药物 的生物转化。CYP450的活性可受到多种因素的影响。近年来， 收稿Et期：2009—12-25； 修订151期：2010-02-08 作者简介：李丽波(1975一)，女(汉族)，吉林敦化人，现任齐齐哈尔医学院 讲师，博士学位，主要从事药物代谢研究工作． · 1262· 由于药物代谢性相互作用诱发的不良反应日渐引起人们的重视。 但有关中草药对 CYP450影响作用的报道尚不多见。蹄叶橐吾 (Ligulariafischeri)为菊科(Compasitae)橐吾属(Ligularia)多年生 草本植物，又名。肾叶橐吾(《中药志》)、马蹄叶(东北)等，其根和 根茎收入吉林省药材，名山紫菀⋯。药理研究表明，其根和 根茎具有镇咳祛痰作用 ，叶的提取物具有抗氧化作用 -4 J，地 上部分乙醇提取物具有抗炎免疫 。。 和抗溃疡作用 。且蹄叶 111 高亮 111 高亮