α-硫辛酸与维生素C和维生素E的抗氧化作用比较20120320

中国药物与临床2005年1月第5卷第1期Chinese Remedies＆clinicsJanu ! ol ! !：! Ot一硫辛酸与维生素C和维生素E的 抗氧化作用比较 山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物教研室(030001) 刘红林 牛 勃 常冰梅 程牛亮 许言午 赵建滨 维生素C和维生素E以及ot一硫辛酸是三种重要的维 生素类物质，必须由食物供给rI-3]。20世纪初，维生素C防治 坏血病成为光辉的一页；20世纪中叶，维生素E又成为防癌 抗衰老的新秀：近年来发现ot一硫辛酸也具有许多重要生理 作用 『“]；但它们三者的共同特点是都具有很强的抗氧化活 性。虽然它们的抗氧化途径各不相同，抗氧化效果也有很大 差别，却都能有效清除体内自由基对细胞的毒性作用，从而 起到保护细胞的作用。本研究是从它们提高细胞抗氧化能力 和协助细胞从氧化损伤状态下恢复这两个方面来研究，旨在 为进一步探讨三种物质的抗氧化机制奠定基础，也为一些需 要长时间暴露在环境空气中进行的细胞实验积累有益资料． 并为需要在高氧环境下进行的临床治疗研究提供参考数据。 1 与 1．1 试剂 达氏修正依氏培养基(DMEM)(美国Gibco公司)，小牛血 清(华美生物工程公司)，Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶(美国Sigma 公司)，四甲基偶氮唑蓝(MrI，r，Fluka公司)，ot一硫辛酸(江苏 吴江市博霖实业有限公司)，维生素c(北京拜尔迪生物技术 有限公司)，维生素E(浙江霍夫曼德有限公司)，其他试剂为 国产分析纯 1．2 仪器 细胞培养箱NAPCO--5410(Chicago,美国)，倒置显微镜 (Olympus,H本)，酶联免疫检测仪DG3022A~(南京电子管厂)。 1．3 实验方法 1．3．1 细胞培养：原代培养成年Wistar大鼠肝细胞．以2xlO4／L 接种于96孑L培养板．一J 37 oC恒温、5％C02及饱和湿度培养箱中 培养，待细胞贴壁后使用。 1．3．2 第一部分实验：分别用含ot一硫辛酸、维生素C和维生素 E的培养基(含10％d~牛血清、5 mg／L抗氧化剂)孵育肝细胞． 设立复孔，于37℃恒温、环境大气及饱和湿度培养箱中培养． 并于1、2、3N后用M1-I’i去检测活性(测定细胞抗氧化能力)。 1．3．3 第二部分实验；先将细胞于37~C恒温、环境大气及饱和 湿度培养箱中培养1、3N(造成细胞氧化损伤)：然后再分别用 含 一硫辛酸或维生素C或维生素E的培养基 (含10％／b牛血 清、5 mg／L~氧化剂)对1、3N两组损伤细胞进行恢复培养实 验：设立复孔，于37℃恒温、5％CO：及饱和湿度培养箱中孵 · 37 · 育，并于1、2、3周后用MrrI怯检测活性。 1．3．4 MrI，r法检测：每孔弃去3O 上清液，~Jn3o 显色液(5 g／L)，继续培养6 h，弃去全部上清液，加入100 Ixl DMSO终止 反应并溶解蓝色结晶，空白孔调零，测吸光度(A伪 )值。细胞 活性用刺激指数示：刺激指数=实验组A 值，对照组A 值。 1．3．5 活细胞观察法：用倒置显微镜观察培养状态下细胞用 药前后生长状况和形态学改变。 1．4 统计学方法 统计学处理采用成组资料检验。 2 结 果 2．1第一部分实验结果：见表1。 表 l 不同抗氧化剂对体外培养细胞活性 (刺激指数)影响( ) 注：’与对照组相比P<0．01； 与维生素C组相比P<0．01； 与维 生素E组相比P<0．01；吐i 1周组相比P<0．O1；▲_与2周组相比P<0．01 以上结果表明：在环境大气培养箱中培养细胞，这三种 抗氧化剂对细胞的保护：维生素c在l周内效果明显．维生素E 和 一硫辛酸在3周内效果仍明显。 2．2 第二部分实验结果：不同抗氧化剂对体外培养损伤l周 细胞活性恢复结果见表2 表2 不同抗氧化剂对体外培养损伤l周细胞活性 (刺激指数)恢复影响( ) 注：’与对照组相比P<0．01； 与维生素Cgl相比P<0．01； 与维生素 E~ I：EP<0．01；吐il周组相I：EP<0．01；▲_与凋 组相l：gP