酚类环境雌激素的分析研究进展

评述与进展 酚类环境雌激素的分析研究进展 赵美萍　李元宗　常文保 3 (北京大学化学与分子工程学院 ,北京 100871) 摘 　要 　环境中分布或残留的化学物质对人类和野生动物的内分泌系统的不良影响已引起广泛关注。在已 发现的数十种环境内分泌干扰物中 ,壬基苯酚、辛基苯酚、双酚 A 和 2 ,42二氯酚等以其相似的结构特征和类 雌激素活性逐渐被划分为一类新的分析研究对象 ,称为酚类环境雌激素。本文综述了这些物质的主要来源和 分布及其分析测定方法的研究进展 ,重点评述了一些新的分析技术如基体固相分散萃取法 (MSPD) 、分子印迹 聚合物法 (MIP) 、荧光分子传感法 (FMS)和生物识别2化学分析联用法等在上述物质的分析测定中的应用。比 较了 GC2MS和 LC2MS等测试手段用于分析此类物质的优势和各自的局限性 ,并展望了这一领域未来的研究 发展趋势。本文引用文献共 54 篇。 关键词 　环境雌激素 ,烷基苯酚 ,双酚 A ,评述 　2001212218 收稿 ;2002206210 接受 本文系科技部2科技基础性工作专项课题 (基 2001215) 1 　引　　言 近 40 多年来的研究结果表明 ,环境中的许多人工合成的化学物质对人体和动物的内分泌系统具有 干扰作用。它们模拟或拮抗内源激素的作用 ,或对内源激素或其受体的合成和代谢过程产生破坏作 用[1～6 ] 。这些环境内分泌干扰物既包括环境雌激素 ,也包括环境雄激素和环境甲状腺激素等。目前的 研究重点一般集中在环境雌激素上。 至今已确定的具有雌激素性质的人工化学品多达数十种 ,其中最典型的两类为氯代有机化合物和 含羟基 ( OH ) 的芳香化合物 ,如 p , p′2二氯二苯基三氯乙烷 ( p , p′2DDT) 、多氯联苯 ( PCBs) 、二　英 (dioxins ,包括多氯二苯并对二　英 ( PCDDs) 和多氯二苯并呋喃 ( PCDFs) ) 、烷基苯酚 (alkylphenols ,简称 APs)和双酚 A(bisphenol2A ,简称 BPA)等。大量环境调查结果和实验室研究表明这些物质对近年来男性 睾丸癌和前列腺癌发病率的上升、精子数量的减少、女性乳腺癌、子宫癌发病率的增加、雄性动物的雌性 化和免疫功能的改变 ,以及鸟类、鱼类和哺乳动物生育率的下降、部分生态系统中动物雌雄比例失调等 具有不容忽视的作用[3 ,7 ,8 ] ,环境雌激素已成为一类新的研究和监测的重要物质。 DDT等有机氯代化合物属于第一代化学合成农药 ,其中一部分已被禁用。二　英主要是垃圾焚烧 及氯酚农药生产过程中的副产物 ,而典型的酚类雌激素的来源则与日常生活关系十分密切。例如 ,APs 大量用于合成非离子表面活性剂烷基苯酚聚氧乙烯醚 (alkylphenol ethoxylates ,简称 APEOs) [9 ] 。APEOs 广 泛用于洗涤用品和工业加工助剂中 ,如金属表面、纺织品加工业和食品加工业的清洗剂和家用洗涤剂及 造纸、印染和农药生产中的分散剂、乳化剂和漂浮剂等[4 ,10 ] 。又如 ,双酚 A 是生产聚碳酸酯和环氧树脂 的重要原料[9 ,11 ] 。在婴儿奶瓶、微波炉饭盒及其它许多食品饮料的包装材料中都用到聚碳酸酯和环氧 树脂。据报道 ,以 BPA 为原料制成的树脂用作牙齿填充物和包封剂时 ,BPA 可从治疗后的牙齿渗漏到 唾液中[12 ,13 ] 。在用聚碳酸酯作衬漆的罐装食物中也检测出了 BPA[14 ,15 ] 。因此 ,自从 Soto [6 ] 和 Krishnan[5 ] 分别报道了 42壬基苯酚 (42Nonylphenol ,简称 42NP)和 BPA 在哺乳动物体内的弱雌激素活性后 ,与其相关 产品的环境和健康影响立即引起人们的普遍关注。 一般认为 ,APs 和BPA 的弱雌激素性质与其在结构、代谢和作用方面与天然的雌激素雌二醇 ( E2)和 第 31 卷 2003 年 1 月 　 　　　　　　　　　　 分析化学 (FENXI HUAXUE) 　评述与进展 Chinese Journal of Analytical Chemistry 　 　　　　　　　　　　 第 1 期 103～109 囄 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 人工合成的类雌激素乙烯雌酚 (DES)之间的相似性有密切的关系[4 ,14 ] 。42NP、BPA、E2 和 DES 的结构式 如图 1 所示。 现阶段 ,GC2MS 技术的推广和LC2MS 的日趋成熟使有机物的分离和结构鉴定工作逐渐简化 ,而样 品的前处理越来越成为分析过程中的关键。环境雌激素涉及的样品种类十分广泛 ,如在环境监测中 ,污 水处理厂的排出水和污泥、自然水体、沉积物、土壤和水生生物等环境样品 ;在临床检测中的人体体液样 品 (包括血液和尿液等)以及与人体摄入直接有关的餐具和食品饮料及其包装材料样品等。本文首先对 各类样品的不同前处理方法进行了比较 ,重点介绍了基体固相分散萃取法 (matrix solid2phase dispersion , 简称 MSPD) 、分子印迹聚合物法 ( molecular imprinted polymer , 简称 MIP) 、荧光分子传感检测法 (fluorescence molecular sensing ,FMS)和受体亲和色谱法 (receptor affinity chromatography ,简称 RAC) 等新发 展起来的分离和提纯方法 ,进而综述了各类测定方法 ,并对测定过程中的一些关键问题进行了讨论 ,最 后对未来的研究方向做了展望。 HO 　 42壬基苯酚 (42nonylphenol) HO MeOH　雌二醇 (estradiol) COH OHCH3CH3　双酚 A (bisphenol A) CHO CH2CH3CCH3CH2 OH　乙烯雌酚 (diethylstilbestrol) 图 1 　42壬基苯酚、双酚 A、雌二醇和乙烯雌酚的结构式 Fig. 1 　Structures of 42nonylphenol , bisphenol2A , estradiol and diethylstilbestrol 2 　各类样品的前处理方法 根据分析质量控制Π质量保证 (QAΠQC)的要求 ,首先在采样时就必须加入已知定量的内标物。分析 烷基苯酚和 BPA 用的内标物有 n2壬基苯[16 ] 、2 ,4 ,62三溴苯酚[17 ] 、2 ,4 ,62三甲基苯酚[18 ] , d82BPA[19 ,20 ] 、 d162BPA[21 ] 、d102蒽[22 ]和 d102荧蒽等[23 ] 。 2. 1 　传统的萃取方法 早期从洗衣粉、污泥、水体沉积物及污灌土壤等样品中提取壬基苯酚用的是索氏提取或蒸汽蒸馏Π 溶剂萃取的方法 ,溶剂用量大 ,提取时间长 ,通常要几个小时甚至几十个小时[18 ,24 ] 。随着固相萃取技术 (SPE)的出现和发展 ,逐渐取代了传统的方法 ,成为最常用的样品前处理手段 ,尤其是在天然水样品[21 ] 、 食品模拟液体样品[25 ]和人体体液样品[26 ]等液体样品的处理过程中显示出强大的优势。常用的固体吸 附剂有 XAD 树脂系列[27～29 ] 、活性炭 ( GAC) [30 ] 、石墨化碳黑 ( GCB) [31 ] 和十八烷基硅烷 (C218) [26 ] 小柱等。 但是对于污泥、沉积物和土壤等环境固体样品及生物组织样品 ,SPE 并不能直接使用。为此 ,一方面选 择一些辅助手段与 SPE结合使用 ,如微波辅助溶剂萃取方法 (MASE) [21 ] 和涡旋提取[25 ] 等方法 ;另一方 面 ,也探索出一些新的分离技术。不过 ,在很多情况下仍离不开经典的索氏提取方法[32 ] 。 2. 2 　基体固相分散萃取法( MSPD) MSPD 法是一种在原有的 SPE方法的基础上加以改进后的分离提纯方法。笔者曾采用 MSPD 法分 离和纯化了鱼肉组织和贻贝体内的 42NP 和 42叔辛基苯酚 (42t2OP) [33 ] 。将生物组织与 C18固定相共同研 磨混匀 ,所得混合物装入下层为 Al2O3 极性吸附剂的柱管内 ,用甲醇淋洗 ,流出液经浓缩后直接进 HPLC 测定。此方法样品用量少、耗时短、且节省溶剂。研磨过程可破坏生物组织的紧密结构 ,提高了提取效 率 ,洗脱液经下层的氧化铝纯化 ,可除去绝大部分类脂类干扰物 ,回收率 > 80 %。在 MSPD 法中 ,样品的 均一化、分离和提纯一步完成 ,非常适于生物组织样品。对比实验表明 ,对于脂肪含量较高的生物组织 样品 ,氧化铝的吸附纯化效果优于硅胶。 2. 3 　分子印迹聚合物法( MIP) Haginaka[34 ,35 ]采用多步溶胀和热聚合的方法制备了均一尺寸的 MIP ,并对其识别 BPA 分子的能力进 行了评估。分别以 42乙烯基吡啶 (42VPy)和二甲基丙烯酸乙二醇酯 ( EDMA) 作为功能单体和交联剂 ,模 板、单体和交联剂的摩尔比为 2∶7∶25。用偶氮二异庚腈作为引发剂 ,在氩气气氛下缓慢蒸馏 ,于 50 ℃下 401　　 分 析 化 学 第 31 卷 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 进行 24 h 热聚合。所得 MIP 用甲醇和四氢呋喃清除模板分子后装入不锈钢柱 (10 cm ×4. 6 mm i. d. ) 。 用 0. 020 molΠL 磷酸Π乙腈 (2∶3)作为流动相 (1 mLΠmin) ,在 200 nm 下检测。对 BPA、乙烯雌酚、苯酚和苯 的保留因子的影响因素的研究结果表明 ,选择因子 ( S ) ,即在 MIP 和非印迹聚合物上的保留因子比 ( K印迹ΠK非印迹 )在不同 pH条件下略有差别。BPA 的 S 为 6. 32 ,而其他 3 种化合物只有 1. 64～2. 30。推 测 BPA 与 42VPy2EDMA 之间的疏水性和氢键等结合力在 BPA 的识别中可能起着重要的作用。 2. 4 　受体亲和色谱法 Oostercamp [36 ]以人体雌激素受体作为亲和蛋白质 ,建立了描述 LC2RAD (受体亲合检测) 系统中高亲 和配体的检测器响应的理论模型。Seifert [37 ] 则利用重组人体雌激素受体建立了酶联受体分析法 (enzyme2linked receptor assay ,简称 ELRA) ,对实际水样品中的天然雌激素和环境雌激素进行了测定。用 ELRA 法测加标的实际水样 ,回收率 90 %～100 % ,17β2雌二醇的检测限为 0. 1μgΠL (未进行预浓缩) 。所 得结果与放射性受体分析试验的结果非常相符 ,样品基体的影响很小。此技术利用了雌激素与雌激素 受体之间形成生物有效配体的亲和作用 ,可作为筛选和分离富集雌激素物质的有效工具。 2. 5 　不同样品处理方法之间的比较 固相萃取技术 (SPE)是较为简便快捷的处理技术 ,在试剂用量上比传统的索氏提取等方法大为减 少 ,操作步骤的简化也减少了样品损失或遭受污染的机会 ,而且 SPE 柱已是商品化产品 ,方法容易标准 化 ,是目前样品处理中的主流技术。但它在非液体样品的处理中体现不出优势 ,而且对于分析物浓度极 低的液体样品 ,富集倍数有限 ,可能达不到测定要求。基体固相分散萃取法 (MSPD) 对生物组织样品较 为有效 ,省时、省溶剂 ,但研磨后的粒度大小和填装技术的差别可能会使淋洗曲线有所改变 ,方法不易标 准化。而且 ,与 SPE法类似 ,很容易将共存的干扰物一起萃取出来。分子印迹聚合物法 (MIP) 和受体亲 和色谱法 (RAC)则分别是利用空间结构及官能团之间非共价的结合作用和激素2受体间的特异性结合 作用进行识别和分离的手段 ,选择性较好 ,基体干扰相对较少 ,但分离柱的制备相对复杂 ,目前还处于探 索和完善阶段。 3 　测定方法 3. 1 　GC2MS 法和 HPLC法 GC2MS 是测定各种环境和生物样品中酚类环境雌激素的主要方法之一 (见表 1) 。为减小分析物的 极性 ,提高分离的柱效和检测的灵敏度 ,需要先进行衍生后再用 GCΠMS 分析。常用的衍生方法有硅烷 化和酯化等 ,衍生剂较常用的如双 (三甲基硅烷基) 三氟乙酰胺 (BSTFA) [38 ] 、乙酸酐[39 ] 、五氟苄基溴 (PFBBr) [40 ] 、N ,O2双 (三甲基甲硅烷) 乙酰胺 ( TMSA) [41 ] 和 N2甲基2N2(2叔丁基二甲基硅烷) 三氟乙酰胺 (MTBSTFA) [7 ]等。其中 MTBSTFA 是目前发现的衍生效果较好一种衍生剂。通常情况下 ,痕量的水分对 硅烷化反应本身和所形成衍生物的稳定性都不利 ,利用 MTBSTFA 衍生得到的叔丁基二甲基硅烷 ( t2 BDMS)衍生物不易水解 ,而且可获得较好的 EI2MS 谱图 (通常可观测到 [M257 ] + 基峰) ,这对降低检出限 是十分有利的。但测定地表水实际样品时发现基体中的腐殖质对衍生反应有明显的干扰 ,衍生产率非 常低。原因之一可能是含羟基的共萃取物与分析物竞争衍生剂的结果。增加衍生剂的用量和反应时间 (约 3 h)可使衍生反应的产率显著提高。目前经过预浓缩和衍生后的 GC2MS 测定的检出限最低可达 014 ngΠL (天然水样品) [22 ] 。 HPLC法也是常用的分析酚类环境雌激素的方法 (见表 2) 。一般采用紫外检测 (UVD) 、荧光检测 (FLD)或电化学检测 ( ED)的方法。其中 FLD 和 ED 的灵敏度较高 ,UVD 灵敏度相对较低。但上述检测 方法都不能鉴定出分析物的结构 ,往往还需要用 GC2MS 确认结构 ,或直接使用 LC2MS 系统。LC2MS 法 的灵敏度不及衍生后的 GC2MS 法 ,目前可达的最低检出限为 0. 5μgΠL。 3. 2 　荧光分子传感法 Del Olmo 等用荧光光度法测定了水中的 BPA[50 ,51 ] 。加入适量β2环糊精使之与 BPA 形成包合物 ,然 后用荧光分光光度计测量。方法适用于 10～200μgΠL BPA 的样品。检出限为 0. 5μgΠL ,回收率为 9616 %～105 %。此后 ,他们又采用一阶导数荧光法对水中的 BPA 进行了测定。水样用 NaCl 饱和 ,经乙 501第 1 期 赵美萍等 :酚类环境雌激素的分析研究进展 　　 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 醚微液液萃取后直接用荧光法测定。发射波长为 306 nm ,在 200～290 nm 间记录激发光谱。根据一级 导数光谱计算测得 BPA 的分析信号为 239 nm。方法适合的浓度范围为 0. 5～10. 0μgΠL BPA ,检出限达 0107μgΠL ,水样回收率为 93 %～112 %。 表 1 　GC2MS法测定酚类环境雌激素 Table 1 　Determination of phenolic environmental estrogens by gas chromatography2mass spectrometry 化合物a Compound 样品类型 Sample type 分离和富集 Extraction & enrichment 色谱柱和检测方法 Column and detection 检出限 Detection limit (μgΠL) , 回收率 Recovery( %)ΠRSD( %) 参考文献Ref . 42t2OP、 42NP、 BPA、2 , 42二氯 酚、五氯酚 地表水 Surface water SPE(solid phase extrac2 tion) , LLE (liquid2liquid extraction) HP252MS ( 30 m ×0125 mm , 0125μm) ;全扫描 MS (full scan mode mass spectrometry) 0. 004～0. 006 ; SPE: 58 ～106Π6～16 ; LLE:109～117Π6～14 7 42NP 污水处理厂的出水和 污泥 Effluent and sludge from sewage treatment plant 出水 Effluents : LLE;污 泥 Sludge : SFE(superc2 ritical fluid extraction) HP252MS ( 30 m ×0125 mm ,0125μm) ;SIM2EI2MS ( selected ion monitoring2 electron impact ionization2 mass spectrometry) 出水 (effluent) : 0. 1 ;污 泥 ( sludge) :0. 1 mgΠkg ; 93～98Π3. 2～5. 3 39 42NP 下水污泥和沉积物 Sewage sludge and sedi2 ments 索氏提取 Soxhlet extraction DB5 (30 m ×0125 mm , 0125μm) ; ECD (electron capture detection) 2. 9 pgΠg 干 重 ( dry weight) ; 70Π10 40 42NP 土壤 Soil 蒸汽蒸馏Π溶剂萃取 Steam distillationΠsolvent extraction OV21 涂层熔融硅胶柱 Fused silica column coated with OV21 (30 m ×0125 mm , 0125μm) ;FID(flame ionization detection) , SIM2 EI2MS 0. 05～0. 1 mgΠkg ;93～102Π7～16 42 BPA 生产和加工厂接收水 体 Receiving waters near manufacturing and proce2 ssing facilities 涡旋提取 Vortex extraction DB5 (30 m ×0125 mm , 0. 5μm) ;SIM2MS 1. 0 ; 70～107 19 ,20 BPA 各类天然水体 Natural water 微液液萃取 Micro LLD HP25MS;SIM 0. 0004 ; 接近 (close to) 100 % 22 BPA 怀孕大鼠的胚胎 Foetus of the pregnant rat SPE CP SIL 19CB ( 25 m × 0125 mm , 0. 2 μm ) ; EIM2MS 30 pg ; 87. 4Π7. 9 23 BPA 水溶性食品模拟剂 Aqueous based food simu2 lants SPME(solid2phase microextraction) HP52MS ( 30 m ×0125 mm , 0125μm) ;SIM2MS 0. 1～2. 0 ngΠg 25 BPA 废塑料 Waste plastics 溶剂萃取 Solvent extraction Supelco PTE25 Column (30 m ×0125 mm ,0125 μm) ;SIM2MS 2 ngΠg 43 BPA、BPF 废水 Wastewater LLD HP12MS(30 m×0125 mm , 0125μm) , SIM mode BPF :0. 02 ;BPA :01006 41 　a. BPA(bisphenol A) , 42t2OP (42tert2octylphenol) , 42NP (42nonylphenol) , 2 ,42二氯酚 (2 ,42dichlorophenol) , 五氯酚 (pentachlorophenol) , BPF (bisphenol F) Narita 等利用双丹磺酰甘氨酸和双邻氨基苯甲酸盐修饰的β2和γ2环糊精对 42NP、BPA、二　英同类 物、2 ,42二氯苯氧乙酸和酞酸二乙酯等内分泌干扰物质进行了荧光分子检测[52 ] 。经双丹磺酰和双邻氨 基苯甲酸盐修饰后的环糊精激发波长分别为 340 nm 和 330 nm。内分泌干扰物的存在引起荧光信号的 显著改变 ,并产生相应的特征响应 ,可用来鉴别单一的内分泌干扰物质。例如 ,用双邻氨基苯甲酸盐修 饰的β2环糊精可用来检测 1μmolΠL 的 42NP。此外 ,Del Olmo 等还建立了荧光光谱2偏最小二乘法的多元 校准模型[53 ] ,用于天然水中 BPA 等酚类化合物的测定。 3. 3 　生物识别2化学分析方法 将生物分子识别过程与化学分析相结合的方法也在酚类环境雌激素的分析中得以应用[37 ] 。由酶 联受体分析法 ( ELRA)获得的信号与生物效应潜势有关 ,代表雌激素结合的当量。若待测物与受体的结 合当量超过了预定水平 ,则化学分析 (例如 LC2MS2MS) 将对其进行结构鉴别。BPA 和 42NP 等工业化学 品均观察到了与受体结合的作用 ,而非雌激素类固醇均未发现交叉反应。这一高选择性技术使复杂混 601　　 分 析 化 学 第 31 卷 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 合物体系中的受体相关物质得以鉴别出 ,而无需进一步纯化 ,已成功用于测定实际水样中的环境雌激素 物质。 表 2 　HPLC法测定酚类环境雌激素 Table 2 　Determination of phenolic environmental estrogens by high performance liquid chromatography 化合物a Compound 样品类型 Sample type 分离富集 Extraction & enrichment 色谱柱、流动相和检测方法 Column , mobile phase and detection 检出限 Detection limit (μgΠL) , 回收率 Recovery( %)ΠRSD( %) 参考文献Ref . AP 非离子表面活性剂混 合 物 Mixtures of nonionic surfactants Nucleosil C18 (250mm × 4mm) ;甲醇 (methanol) ∶ 水 (water) (90∶10) ; 示 差折光计 ( Differential refractometer) 2. 0 mgΠL 44 NP 生活污水、河水和下水 污 泥 Municipal waste water , river water and sewage sludge 蒸汽蒸馏Π溶剂萃取 Steam distillationΠsolvent extraction Lichrosorb2NH2 ( 250mm × 416mm ) ; 己 烷 ( hexane ) ( A )Π己 烷 ( hexane ) : 异 丙 醇 (isopropanol) (1∶1 ,B) ; UVD(ultraviolet detection) (277 nm) 93～105 0. 5 (水 water) ; > 80Π 3～7 45 46 NP 洗衣粉、下水污泥、污 灌土地和河流沉积物 Detergents , sewage slud2 ge , sludge2amended soil and river sediments 索氏提取 Soxhlet extraction Lichrosorb2RP218(100mm × 4mm ) ; 异 丙 醇 ( isopropanol ) ( A )Π水 ( water ) ( B )Π乙 腈 (acetonitrile)∶水 (water) (45∶55) + 0. 02 molΠL NaClO4 (C) ; UVD (225 nm) 95 ng ; 93 ～ 100Π1. 7 ～ 516 24 BPA 体液 ( 血清和尿液 ) Body liquid ( serum and urine) SPE Solid phase extr2 action Shim2Pack VP2ODS 柱 (150 mm ×416 mm) ; 乙 腈2水2磷酸 (acetonitrile2 water2phosphoric acid ) (40∶60∶0. 2) ; 电化学 检 测 Electrochemical detector & ESI (electrospray ionization)2 MS HPLC2ED : 0. 2 ; HPLC2 MS: 0. 1 26 NP BPA 河水 River water MF2Ph 小 柱 Cartridge (1. 0 cm ×2 mm) Capcellpak C18 ( 150 mm ×115 mm) ;含醋酸钠 的 50 % 乙腈水溶液 ( aqueous 50 % acetoni2 trile containing NaAc ) ; ESI2MS BPA : 0. 5 ; 42NP : 10 ;99. 7～138. 5Π2. 2～9. 7 47 42NP 42t2OP 鱼体和贻贝组织 Fishand mussel tissue 基体固相分散萃取Matrix solid2phase disper2 sion Lichrospher 100RP218 (125 mm ×4 mm) ;甲醇 (methanol ) ∶水 (water ) ( 80 ∶20 ) ; UVD ( 278 nm) , FLD ( fluorescence detection) λEx = 225 nm , λEm = 301 nm 42t2OP : 10 ngΠgb 42NP : 30 ngΠgb ; Fish : 98～118 ; Mussel : 100～102 33 42t2OP BPA 水样和虹鳟鱼的肝脏 及 肌 肉 组 织 Water , liver and muscle tissue of rainbow trout 微波辅助溶剂萃取 Microwave2assisted solvent extraction + SPE Zorbax Eclipse XDB2C18 (150 mm×211 mm) ;甲醇 (methanol)Π水 (water) ,常 压化学电离 (atmospheric pressure chem2 ical ionization , APCI)2MS 42t2OP:10ngΠg肌肉(muscle) ,50ngΠg肝脏 (liver) b ;BPA :50ngΠgb ; 水样 ( water ) :0. 1 21 BPA 婴儿食品配方 Infant food formula SPE 柱 , 用 氯 仿 SPE cartridge using chloroform Shandon Hypercarb S (15 cm×4. 6 mm) ;水Π甲醇Π乙 腈 ( waterΠmethanolΠ acetonitrile) ; FLDλEx = 235 nm ,λEm = 317 nm 0. 9 ×10 - 9 gΠg ; 奶制 (milk2based) : 86 % ; 豆 制 (soy2based) : 104 % 48 BPA 矿泉水 Mineral water 固2液萃取 Solid2liquid extraction Turner C18 (150 mm ×416 mm) ;乙腈 (acetonitrile) ∶ 水 (water) (40∶60) ; FLD λEx = 275 nm ,λEm = 300 nm 0. 1～0. 2 ; 81～105Π1. 1～13. 2 49 　a. AP(Alkylphenol) , 42NP(42Nonylphenol) , BPA(Bisphenol A) , 42t2OP(42tert2octylphenol) ;b. 鲜组织 (fresh tissue) 701第 1 期 赵美萍等 :酚类环境雌激素的分析研究进展 　　 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 4 　结论和展望 目前 ,美国、日本和欧洲一些国家已对水体中部分内分泌干扰物的限量作了规定 ,一般在 0. 1μgΠL 甚至更低的量级 ,但最新的研究结果指出 ,某些内分泌干扰物在远低于通常认为的安全剂量水平下就能 引起实验动物的生物效应[54 ] 。低剂量长期暴露和不同环境内分泌干扰物之间的协同作用是此类污染 物的主要特点 ,因此 ,非常有必要测定这些化合物在生物体内的剂量2响应曲线 ,并确定其表现出雌激素 活性的阈值。为此 ,必须尽快建立具有极高灵敏度和选择性的定性和定量分析方法。 就烷基苯酚而言 ,雌激素性质与结构直接相关。现已确定有类雌激素性质的烷基苯酚基本都是对 位取代的 ,而邻位和间位取代的烷基苯酚并未测到有雌激素活性。但现在还无法分离和鉴定出工业品 中所有同系物、低聚物及异构体的结构和含量 ,若能在此方面有所突破 ,则可有效控制产品中的异构体 组成 ,从而减少产品降解产物可能带来的环境影响。双酚 A 在我国正值生产和使用的高峰期 ,对固化 后树脂中残余的双酚 A、生产过程排放到环境中的废水和废料以及可能与人体直接摄入有关的饮食包 装材料等都必须进行严格的控制 ,所有这些都需要尽快建立简便、实用乃至标准化的分析方法。 目前已有的方法绝大多数还是依赖于化学的分离和富集技术 ,操作过程较为复杂 ,样品基体干扰严 重。若能将生物富集、生化识别技术和化学分析方法结合起来 ,不仅可以简化分析步骤 ,提高选择性和 灵敏度 ,而且有助于筛选出其他未知的内分泌干扰物质 ,将是一类前景较好的分析方法。 References 1 　Bitman J , Cecil H C , Harris S J , Fries G F. 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In this paper , the main sources , weak estrogenic property and analytical methods for these substances in the environment were reviewed based on 54 literatures. Some newly developed techniques such as Matrix Solid2Phase Dispersion (MSPD) , molecular imprinted polymer (MIP) , fluorescence molecular sensing ( FMS) and combination of biological recognition and chemical analysis were overviewed for their application in the analysis of above mentioned substances. The advantages and limitations of gas chromatography2mass spectrometry and liquid chromatography2 mass spectrometry used for the determination of phenolic environmental estrogens were summarized. The trend for the future research in this field was also briefly discussed. Keywords 　Environmental estrogens , alkylphenols , bisphenol , review (Received 18 December 2001 ; accepted 10 June 2002) 901第 1 期 赵美萍等 :酚类环境雌激素的分析研究进展 　　 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net