米那斯牌蜂胶液急性毒性和致突变性研究

[作者简介 ] � 查捷 ( 1958- ), 女,学士,副主任技师,主要从事卫 生毒理学研究。 �卫生与毒理 米那斯牌蜂胶液急性毒性和致突变性研究 查 � 捷, 孙建荣,章晓玲,项 � 华 (杭州市疾病预防控制中心, 杭州 � 310006) [摘要 ] � 目的: 探讨米那斯牌蜂胶液的急性毒性和致突变性作用。方法: 按 !保健食品检验与评价技术规范∀对其进行 急性毒性和致突变试验研究。结果:米那斯牌蜂胶液雌、雄大小鼠急性毒性 LD50均大于 20�0 g /kg体重 ,属无毒级; Am es 试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性。结论:在本实验剂量范围内 ,该产品属安全性保健品。 [关键词 ] � 米那斯牌蜂胶液; 急性毒性; Am es试验; 小鼠骨髓微核试验;小鼠精子畸形试验 [中图分类号 ] � R329�24� � � � [文献标识码 ] � B� � � � [文章编号 ] � 1004- 8685( 2006) 07- 0862- 02 � � 米那斯牌蜂胶液以进口蜂胶为原料经食用酒精提取制 成, 具有增强机体免疫力的功能。蜂胶是一种多功能的物质, 人类使用蜂胶已有很长的历史, 现在已使用到饮食和保健品 中。蜂胶具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤和抗氧化的特性, 还可抑 制自由基的形成。为了解米那斯牌蜂胶液的毒性作用, 我们 对该产品进行了急性毒性和致突变性实验研究, 现将结果报 告如下: 1� 材料与方法 1� 1� 材料 1� 1�1� 受试物 � 米那斯牌蜂胶液呈黄色, 酒精度为 14�2% , 由杭州亚马逊生物技术有限公司提供。 1� 1�2� 试验动物 � 清洁级 ICR种小鼠、SD大鼠。均由浙江省 实验动物中心提供。 1� 1�3� TA97、TA 98、TA100、TA102菌株和 S9均由上海复旦大学医 学院提供, 各菌株均经生物学性状鉴定合格后进行试验。 1� 2� 实验方法 1� 2�1� 急性毒性试验 � 选用体重 18~ 22 g的 ICR种小鼠和 体重 180~ 220 g的 SD种大鼠各 20只, 雌雄各半。采用最大 耐受量试验法, 选用 20�0 g /kg体重一个剂量组, 受试物经口 灌胃染毒, 观察 7~ 14 d。 1� 2�2� Am es试验 � 采用平皿渗入法, 在加和不加 S9 混合液 的条件下进行试验, 试验设 5000、1000、200、40、8�g /皿 5个剂 量组, 另设 DMSO 阴性和 9AA、2�7AF、N aN 3 、MMC、2AF、 1� 8HAQ阳性对照,每剂量做三皿, 试验重复二次。 1� 2�3� 小鼠骨髓微核试验 � 选用 ICR种健康小鼠, 体重 25 ~ 30 g, 雌雄各半, 动物随机分组, 每组 10只。设 10�0、5�0、 2� 5 g /kg体重 3个剂量组, 另设 14� 2% 食用乙醇对照及阴性 和环磷酰胺阳性对照,采用间隔 24 h二次经口灌胃法,第二次 灌胃后 6 h处死动物, 取股骨骨髓制片,每只动物计数1 000个 嗜多染红细胞, 计数含微核的嗜多染红细胞数, 结果经 �2检验 进行统计。 1�2�4� 小鼠精子畸形试验 � 选用 ICR种健康雄性小鼠, 体重 25~ 35 g,随机分为 6组,设 10�0、5� 0、2� 5 g /kg体重 3个剂量 组, 另设 14�2% 食用乙醇对照及环磷酰胺阳性对照和阴性对 照。各组动物连续灌胃 5 d, 于首次灌胃后第 35天处死动物, 取双侧附睾, 置于生理盐水中, 剪碎 , 经血滤网过滤后取滤液 涂片, 2% 伊红染色后, 每只动物镜检 1 000个完整精子, 计录 精子畸形数, 计算畸形率,结果经秩和检验统计分析。 2� 结果 2�1� 急性毒性试验 采用最大耐受量试验法, 大、小鼠经口灌胃给予受试物 后, 在观察期内未出现任何中毒症状亦无一动物死亡, 故米那 斯牌蜂胶液雌雄大、小鼠急性毒性 LD50均大于 20� 0 g /kg体 重, 按毒性分级判定属无毒级 (见 1)。 表 1� 米那斯牌蜂胶液对大、小鼠急性经口毒性试验结果 性别 剂量 ( g/kg) 动物数 (只 ) 死亡动物数 (只 ) 死亡率 (% ) 雌 20�0 10 0 0 雄 20�0 10 0 0 2�2� Am es试验 米那斯牌蜂胶液在加和不加 S9 条件下剂量达 5 m g /皿 时, 回变菌落数未超过阴性对照组的两倍, 且各剂量组间无剂 量反应关系, 故判定在本实验条件下,该产品对 Ames试验各 菌株无致突变作用 (见表 2)。 2�3� 小鼠骨髓微核试验 米那斯牌蜂胶液各剂量组微核率与对照组比较,经 �2检 验统计差异无显著性 (P > 0�05),阳性对照组微核率与阴性组 比较, 差异有显著性 (P < 0� 01)。判定该检品骨髓微核试验结 果为阴性 (见表 3)。 862 中国卫生检验杂志 2006年 7月 第 16卷第 7期 � Ch in ese Journ al ofH ealth Laboratory Techno logy, Ju l 2006; V ol 16� No 7 表 2� 米那斯牌蜂胶液 Am es试验结果 剂量 (�g /皿 ) 回变菌落数 ( x # s) TA97 - S9 + S9 TA 98 - S9 + S9 TA 100 - S9 + S9 TA102 - S9 + S9 米那斯牌蜂胶液 5000 106�7 # 12�9 120�0 # 9�2 30�0 # 1�0 34�3 # 3�5 129�3 # 10�1 123�7 # 3�2 289�3 # 16�2 302�7 # 5�0 1000 108�0 # 4�0 130�7 # 8�3 31�3 # 0�6 33�3 # 2�5 128�0 # 8�0 123�0 # 3�6 254�7 # 15�0 297�3 # 8�3 200 108�0 # 4�0 136�0 # 9�2 30�3 # 2�5 31�0 # 2�6 128�0 # 7�2 125�0 # 7�0 260�0 # 23�1 283�0 # 10�4 40 104�0 # 8�9 116�7 # 16�7 30�3 # 1�5 31�7 # 3�1 123�0 # 4�9 127�0 # 6�2 263�0 # 8�0 288�7 # 11�2 8 104�3 # 4�7 114�0 # 7�0 31�0 # 2�6 31�0 # 2�6 126�3 # 4�7 125�0 # 5�6 275�3 # 14�0 293�7 # 7�5 阴性 ( DMSO) 110�0 # 8�7 113�3 # 8�3 32�3 # 3�2 32�3 # 2�5 121�3 # 3�1 132�7 # 13�6 265�3 # 28�7 276�0 # 14�4 9- AA( 50 ) 2670�0 # 268�7 2, 7- AF( 20) 1095�0 # 190�0 N aN 3 ( 1�5) 2155�0 # 77�8 MMC ( 0�5) 2200�0 # 141�4 2AF( 10) 2980 # 169�7 2540�0 # 155�6 2635�0 # 91�9 1, 8-二羟基蒽醌 ( 50) 2165�0 # 91�9 表 3� 米那斯牌蜂胶液小鼠骨髓微核试验结果 性别 剂量 ( g /kg) 动物数 PCE MN /PCE MN(∃ ) PCE /NCE 雄性 2�5 5 5000 6 1�2 0� 97 5�0 5 5000 8 1�6 1� 01 10�0 5 5000 8 1�6 0� 94 14�2%乙醇 5 5000 8 1�6 1� 04 阴性 5 5000 5 1�0 1� 12 环磷酰胺 0�05 5 5000 101 20� 2* 1� 10 雌性 2�5 5 5000 10 2�0 0� 98 5�0 5 5000 10 2�0 0� 98 10�0 5 5000 9 1�8 1� 0 14�2%乙醇 5 5000 7 1�4 0� 99 阴性 5 5000 7 1�4 1� 03 环磷酰胺 0�05 5 5000 84 16� 8* 1� 03 � � * 与阴性组比较,经 �2 检验 P < 0�01 2� 4� 小鼠精子畸形试验 米那斯牌蜂胶液各剂量组精子畸形率与溶剂对照组比 较, 经秩和检验统计无显著性差异 (P > 0� 05), 表明该检品在 本实验条件下小鼠精子畸形试验结果为阴性 (见表 4)。 3� 讨论 鉴于新研制的保健食品在食用前必须进行毒理安全性实 表 4� 米那斯牌蜂胶液小鼠精子畸形试验结果 剂量 ( g/kg) 动物数 观察精子数 畸形数 畸形率 (% ) 2�5 5 5000 69 1�38 5�0 5 5000 68 1�36 10�0 5 5000 79 1�58 14�2%乙醇 5 5000 81 1�62 阴性 5 5000 79 1�58 环磷酰胺 0�05 5 5000 183 3�66* � � * 与阴性组比较,经秩和检验统计 P < 0�05 验, 故按!保健食品检验与评价技术规范∀对米那斯牌蜂胶液 进行了急性毒性和致突变性试验研究, 试验结果表明, 该检品 急性毒性属无毒级, Am es试验、骨髓微核试验和小鼠精子畸形 试验结果均为阴性。提示在体内体外条件下, 该受试物对哺 乳动物体细胞、雄性生殖细胞无致突变作用, 故判定该检品无 致突变作用。 [参考文献 ] [ 1 ] 保健食品检验与评价规范 [ Z]�2003� [ 2 ] 黄幸纾,陈星若 �环境化学物致突变、致畸、致癌试验方法 [ M ] � 杭州:浙江科学技术出版社, 1983�13- 41� [ 3 ] 董捷,闫继红,苏忆兰,等 �蜂胶复合胶囊毒理学的动物实验观察 [ J]�食品科学, 2005, 26( 4) : 247- 253� [ 4 ] 中药、天然药物一般药理学研究技术指导原则 [ Z] � (收稿日期: 2006- 02- 27) 863中国卫生检验杂志 2006年 7月第 16卷 第 7期 � C h inese Jou rnal ofH ea lth Laboratory Technology, Ju l 2006; Vol 16� No 7