特发性血小板减少性紫癜患儿Th亚群细胞因子的检测

© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net ·论 　　著 · 特发性血小板减少性紫癜患儿 Th亚群细胞因子的检测 阮积晨 　赵 　芹 　周海霞 　钱江潮 　沈树红 　张庆华 作者单位 : 325027温州医学院附属育英儿童医院血液科 (阮积 晨 ,周海霞 ,钱江潮 ) ;生物芯片上海国家工程研究中心 (赵芹 ,张庆 华 ) ;上海儿童医学中心血液科 (沈树红 ) 通讯作者 :阮积晨 【摘要 】目的 　探讨 Th亚群细胞因子在儿童特发性血小板减少性紫癜 ( ITP)发病中的变化及作 用。 　采用 B io2Plex系统和悬浮阵列技术通过荧光编码检测 43例 ITP患儿血清中的 Th1型细 胞因子 TNF2α、IFN2γ、IL22、GM 2CSF和 Th2相关细胞因子 IL24、IL25、IL26、IL210的变化 ,并与 20例正 常儿童作对照。结果　与正常健康儿童相比 , ITP患儿 Th1型细胞因子显著升高 ( P < 0. 01) ,而 Th2 型细胞因子显著降低 ( P < 0. 01)。结论 　儿童 ITP发病中存在异常的淋巴细胞极化状态 ,是一种 Th1 优势的疾病。 【关键词 】　紫癜 ,血小板减少性 ; 　Th亚群细胞因子 ; 　儿童 Th1 /Th2 cytok ines in ch ildren w ith ITP 　R uan J ichen, Zhou Haix ia, Q ian J iangchao, S hen S huhong, Zhang Q inghua. Department of Hematonosis, Yuying Children′s Hosp ital Affiliated to W enzhou Medical College, W enzhou 325027, China 【Abstract】O bjective　To understand roles of the pathogenesis of idiopathic thrombocytopenic purpu2 ra ( ITP) in children. M ethods　The serum levels of Th1 type cytokines TNF2α、INF2γ、 IL22、GM 2CSF and Th2 type cytokines IL24、IL25、IL26、 IL210 in 43 patients and 20 healthy chiliren were measured using quantitative B io2p lex cytokines assays with fluorescently labeled m icrospheres. Results 　 The results showed: TNF2α、INF2γ、IL22、GM 2CSF were significantly increased than that in health controls( P < 0101). By contrast, The serum levels of IL24、IL25、IL26、IL210 were significantly decreased ( P < 0101). Conclu2 sion　The results suggest that polarized Th1 and Th2 responses in ITP may have a role in the pathogenesis of ITP. 【Key words】　Purpura, thrombocytopenic; 　Th1 /Th2 cytokines; 　Chidren 　　特发性血小板减少性紫癜 ( Idiopathic thrombo2 cytopenic purpura, ITP)是一种自身免疫性疾病 ,其 特征是未成熟的血小板在单核巨噬系统被吞噬细胞 破坏引起血小板减少症 ,临床上尚无早期判断 ITP 激素疗效及预后的指标。而且发病机制尚未完全清 楚。以往 ,国内外的研究大多认为 , ITP的发病机制 是由于体液免疫紊乱所致。而现在研究者发现不同 T细胞亚群和亚类之间及其产生的细胞因子之间的 平衡紊乱也在发病中起了重要作用。目前认为其发 生与患者机体 Thl/Th2细胞的平衡失调有关。近一 年来我院也利用 B io2Plex系统和悬浮阵列技术通过 荧光编码对部分 ITP患儿进行了血清 IL22、IL24、IL2 5、IL26、IL210、GM 2CSF、IFN2γ、TNF2α等 8种细胞因 子的检测。现将结果如下 : 对象与方法 1　对象 　2004年 9月～2005年 8月我院儿科确诊 的住院及门诊 ITP患者 43名 (诊断均符合《血液病 诊断与疗效标准 》[ 1 ] ,男 28名 ,女 15名 ,年龄 2月～ ·022· 中国小儿血液与肿瘤杂志 2006年 8月第 11卷第 4期 J China Pediatr B lood Cancer, August 2006, Vol 11, No. 4 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 15岁 ,中位年龄 6岁。对照为门诊正常体检儿童 20 例 ,男 13例 , 7例 ,年龄 5月～13岁 ,中位年龄 7岁。 2　研究方法 2. 1　血清标本采集 : ITP病人治疗前取外周血 2 m l,分离血清 , - 80℃冰箱中保存。对照组取血及保 存方法同 ITP病人。 2. 2　仪器及测定 : B io2Plex系统和悬浮阵列技术平 台由上海生物芯片中心建立并提供。检测由专人 负责。 3　统计学处理方法 : t检验。 结 　　果 ITP患儿的 Thl相关细胞因子 TNF2α、IFN2γ、 IL22、GM 2CSF的表达明显高于正常儿童 , Th2相关 细胞因子 IL24、IL25、IL26、IL210的表达明显低于正 常儿 童 , 结 果 如 表 1 所 示 , 均 有 显 著 性 差 异 ( P < 0101)。 表 1　 ITP患儿和正常儿童血清中 Th1型和 Th2型细胞因子浓度比较 ( €x ±s) 细胞因子 正常对照 ( n = 20) (pg/m l) ITP ( n = 43) pg/m l) t P值 IL22 56. 2 ±5. 34 91. 3 ±8. 5 16. 63 < 0. 01 IL24 28. 6 ±3. 58 14. 7 ±2. 07 18. 17 < 0. 01 IL25 2. 52 ±0. 46 1. 37 ±0. 28 11. 49 < 0. 01 IL26 332 ±30. 5 87. 1 ±4. 61 46. 19 < 0. 01 IL210 17. 5 ±2. 39 9. 57 ±3. 66 8. 70 < 0. 01 GM2CSF 163 ±26. 9 294 ±36. 2 14. 05 < 0. 01 IFN2γ 157 ±14　 210 ±19. 3 10. 68 < 0. 01 TNF2α 18. 5 ±2. 46 30. 7 ±3. 54 13. 63 < 0. 01 讨 　　论 正常机体的 CD4 + T淋巴细胞根据其分泌细胞 因子的不同可分别称为 Th1和 Th2细胞 , Th1细胞 主要分泌 TNF、IFN2γ、IL22、GM 2CSF, Th2细胞主要 分泌 IL24、IL25、IL26、IL210等 ,它们发挥着不同的功 能 [ 2, 3 ]。Th细胞之间的失衡与自身免疫病、过敏性 疾病、肿瘤、移植排斥反应以及感染性疾病的发生与 发展有密切的关系。 B io2Plex系统和悬浮阵列技术通过荧光编码可 以同时检测 100种指标 ,高效、灵敏、准确、标本用量 少。利用商业化的试剂盒同时检测 IL22、IL24、IL25、 IL26、IL210、GM 2CSF、IFN2γ、TNF2α等数种细胞 因子。 我们的研究结果显示 , ITP患儿的 Th1相关细 胞因子 TNF2α、IFN2γ、IL22、GM 2CSF的表达明显高 于正常儿童 , Th2相关细胞因子 IL24、IL25、IL26、IL2 10的表达明显低于正常儿童 ,进一步证实了 ITP患 儿存在异常的淋巴细胞极化状态 ,是一种 Th1优势 的疾病 ,与王宁玲等的报道一致 [ 4 ]。 儿童急性 ITP是造血系统的免疫性疾病 ,目前 认为它是病毒感染后一种天然免疫防卫反应引起的 免疫复合物病。有学者认为急性 ITP患儿开始时首 先是 IFN2α/β合成减少 ,因此导致病毒大量复制 , 并随之产生可形成免疫复合物的大量抗体 ,高病毒 负荷可引起 Th1型反应 (高 IL22, IFN2γ和 TNF)。 ITP患儿 Th1相关的细胞因子分泌增加 ,能促进 Th0 细胞向 Th1细胞分化 ,并抑制 Th0细胞向 Th2细胞 分化 ,形成正反馈 ,同时 IFN2γ分泌大量增加 ,促使 B淋巴细胞分化为浆细胞 ,分泌免疫球蛋白 ,从而血 浆中抗血小板抗体增加 ,提示 Th1 /Th2的失衡在 ITP患儿的发病机制中起着重要作用。Th1型反应 可诱导巨噬细胞的激活、补体的形成和细胞毒细胞 活性的增加 ,还促进合成 IGg1和 IGg3两种亚型的 抗体 [ 5 ]。而有学者分析了 ITP病人的抗血小板 IgG 抗体亚型成分后发现大部分是 IGg1 ( 94% )常伴有 IGg3 (46% ) 或 IGg4 ( 29% ) ,少数为 IGg2 ( 2% ) [ 6 ]。 因此可设想 Th1优势的状况诱导 IGg1和 IGg3的产 生 ,而其正是 ITP患儿破坏血小板的自身抗体。 IL210是由 Th2细胞、巨噬细胞、肥大细胞及 B 细胞产生的免疫抑制因子 ,能抑制巨噬细胞产生前 炎症细胞因子 ,抵抗 Th1细胞和单核细胞的激活而 ·122·中国小儿血液与肿瘤杂志 2006年 8月第 11卷第 4期 J China Pediatr B lood Cancer, August 2006, Vol 11, No. 4 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 起负反馈调节 ,因此 ,外周血 IL210下降有助于增强 自身反应性 T细胞合成 Th1细胞因子 ,随之 ,亦抑制 IL24的合成 [ 7 ]。 我们发现 , GM 2CSF在 ITP病人中均有增高 ,此 与 Elham A. R i2k等的 [ 8 ]报道一致 ,他们还发现 GM 2 CSF与病人 PA IgG成正比 ,而且与外周血血小板记 数成反比。GM 2CSF是在受到细胞因子如 IL21和 TNF的刺激后 ,由巨噬细胞、激活的 T淋巴细胞、纤 维母细胞和内皮细胞释放的。在 ITP中 ,抗体包裹 的血小板是从循环中通过巨噬细胞的 Fc受体结合 而被单核巨噬系统清除的。因此 , ITP病人的血小 板减少可能与由细胞因子导致的巨噬细胞的激活有 关 , GM 2CSF可能导致了 IgG包裹的血小板与巨噬 细胞的 Fc受体的结合 ,并被网状内皮系统隔离并破 坏。此外 , GM 2CSF的升高亦反映了 T淋巴细胞的 异常激活 ,其又依次激活单核细胞和巨噬细胞。 由此我们推断 , Th1 /Th2的失衡在 ITP的发病 机制中起重要作用。 参 考 文 献 1. 张之南. 血液病诊断及疗效标准. 天津 :天津科学技术出版社 , 1991; 245. 2. Mosmann RT, Sad D. The expanding universe of T2cell subsets: Th1, Th2 and more. Immunol Today, 1996; 17: 138 - 46. 3. Romangnani S. Th1 and Th2 subsets m human diseases. Clin Immu2 nol Immunopath, 1996; 80: 225 - 35. 4. 王宁玲 ,戴海明 ,祝怀平 ,等. 特发性血小板减少性紫癜患儿 Th1 /Th2 相关细胞因子的检测. 中华血液学杂志 , 2002; 23 (9) : 486 - 487. 5. Monoz2FernandezMA, FernandezMA, Fresno M. 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