新药甲磺酸帕珠沙星的手性拆分

第 l0卷 天津医科大学学报 Vo1．10 第 4期 JTMU 2004 No．4 571 新药甲磺酸帕珠沙星的手性拆分 李晓宁，张敏如，史 翔 (上海医药工业研究院，上海 200040) 【摘 要】日的：建立新药甲磺酸帕珠沙星手性拆分的。方法：运用 AD手性柱法和流动相添加剂法，考察了不同 条件下对分离的影响。结善：运用这两种方法，甲磺酸帕珠沙星都可以达到基线分离，相同条件下，柱温越低，拆分 因子越大。结论：在分离甲磺酸帕珠沙星时，流动相添加剂法要优于手性柱法。 【关键词】甲磺酸帕珠沙星；高效液相；手性柱法；流动相添加剂法 【中图分类号】R965．2 【文献标识码】A 【文章编号】1006—8147(2004)04—0571—03 Separation of pazufloxacin mesylate by HPLC with chiral stationary phase and chiral motion phase LI Xiao—ning，ZHANG Min—ru，SHI Xiang (Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry，Shanghai 200040，China) ABSTRACT objective：To evaluate the enantiomeric chiral separation methods for pazufloxacin mesylate．Methods：Enantiomeric separation of racemates of pazufloxacin mesylate was per— formed using CSPs and CMPs．Results：W hen using two methods to separating pazufloxacin mesylate，pazufloxacin mesylate was achieved to baseline or near baseline separation and lower temperatures were associnated with higher resolutions．Conclusion： W hen separating pazu— floxacin mesylate，CMPs iS better than CSPs． KEY W oRDS Pazufloxacin mesylate；HPLC；CSPs：CMPs 甲磺酸帕珠沙星 (pazufloxacin mesylate)是由 日本富山化学公司等联合开发的喹诺酮类药物的第 4代产品。该产品具有广谱抗菌活性，对革兰氏阳 性，革兰氏阴性细菌均敏感，抗菌效力强；尤其对呼 吸道感染，外科手术感染，尿路感染等疗效好，由于 分子结构中引入了氨基环丙基，副作用比同类品种 大大降低。我国现在已有单位研制开发【ll。现临床所 批准使用的是其左旋异构体，而不是外消旋体。因 为人体中受体和酶一般都是手性的，它只选择外消 旋药物中的某一对应体与之结合，发挥疗效，剩余的 另一对应体往往是非活性的或是有害的。因此不同 的对应体显示出不同的疗效和毒理学性能【2Io由此 可见帕珠沙星的手性拆分对安全用药，质量监控及 新药研发有重要意义，我们采用手性流动相法和手 作者简介：李晓宁(1980一)，女，硕士研究生，研究方向：药物分析； 张敏如(1946-)，男，教授，研究方向：药物分析。 性色谱柱法对帕珠沙星对映体进行拆分测定。其中 流动相添加剂法分离效果好，方法简便、快速、重现 性好，样品溶液 24 h内稳定，适合常规分析。 1 材料与方法 1．1 仪 器 HP1100 高 效 液 相 色 谱 仪 ， HP1100VWD紫外可见检测器，HP化学工作站。 1．2 试剂与药品 磺酸帕珠沙星(上海医药工业研 究院)，异丙醇，乙醇和正己烷均为HPLC级，无水 硫酸铜和L一苯丙氨酸均为分析纯，水为蒸馏水(见 图 1)。 0 H2N 图 1 甲磺酸帕珠沙星的结构式 维普资讯 http://www.cqvip.com 572 1．3 色谱条件 1．3．1 手性 柱 法 CHIRALPAK AD—H 250 mm×4．6 mm，5 t~m(DAICEL，日本)前接一根预 柱，与分析柱相同，长 30 mm，流动相：0．1％三，乙 酸异丙醇一正己烷 (10：90)；柱温：20℃，流速： 1．000 ml／min，检测波长：254 nm。 1．3．2 流动相添加剂法 色谱柱：Symmetry C8， 150 mm×4．6 mm，5 t~m(HP，美国)；流动相：手性 液(0．004 mol／L一苯丙氨酸：0．002 mol／L硫酸铜， 用氢氧化钠调节到pH3．5)一甲醇(85：15)；柱温：40 ℃，流速：1．000 ml／min，检测波长：324 nm。 1．4 供试品溶液的制备 1．4．1 手性柱法 取甲磺酸帕珠沙星适量，用 0．1％三氟乙酸无水乙醇溶解，配成约 1 mg／ml的 供试品的溶液，进样 20 l。 1．4．2 流动相添加剂法 取甲磺酸帕珠沙星适量， 用流动相溶解，加入微量醋酸，配成约 1 mg／ml的 供试品的溶液，进样 20 l。 2 结果与讨论 2．1 手性柱法 2．1．1 异丙醇含量对分离的影响 改变正己烷和 异丙醇的相对含量，测定甲磺酸帕珠沙星 R、S异构 体的保留值，并计算相应的相对保留值 a及分离度 R。结果见 1。由表 1可见，随着异丙醇含量的增 加，流动相极性增强，洗脱速度逐渐加快，削弱了溶 质与固定相间的作用，a值与R值随之降低。当异丙 醇含量高于 20％时，分离不能达到基线分离。 表 1 异丙醇含量的影响 2．1．2 温度对分离的影响 考察 15℃～40℃之 间，温度对手性柱分离帕珠沙星的影响。测定帕珠 沙星 R、S异构体的保留值，并计算相应的相对保留 值 a及分离度 R。结果见表2。由表 2可见，当温度 逐渐升高时，分离因子和分离度逐渐减小。这是由 于流动相的粘度降低，洗脱速度逐渐加快。 2．1．3 流速对分离的影响 在色谱条件为 0．1％三 表 2 温度对分离的影响 氟乙酸异丙醇一正己烷 (10：90)、柱温 20℃的条件 下，考察流速从 0．700 ml／min--1．000 ml／min，对 分离效能的影响，当流速从 1．000 ml／min--0．800 ml／min之间，随着流速的降低，分离因子及分离度 逐渐增大，到流速为 0．800 ml／min时，分离度达到 最大，为4．288，但是当流速降低到 0．700 ml／min 时，则不能分离，主要原因是流速太低，峰展宽增大， 使得不能分离。 2．2 流动相添加剂法 2．2．1 手性液含量对分离的影响 随着手性液含 量的增加，L一苯丙氨酸和硫酸铜的含量也相应的 增加。因为在配体交换色谱中，手性配体与金属离子 形成络合物并与对映体发生交换作用。对映体 R和 S型与手性配体固定相所形成的络合物稳定性不 同，K1≠K2，决定了它们在洗脱液作用下的保留时 间或保留体积也不同，越稳定者，其保留时间越长， 后洗脱，因而可以进行 R、S对映异构体的拆分【3I。 并且由于甲醇含量的降低，会促进溶质与固定相之 间的疏水作用，延长保留时间和提高异构体的分 离度。 2．2．2 金属络合物的浓度对分离的影响 提高流 动相中二元络合物的浓度，可使色谱系统中产生更 多的混合络合物用于固定相上的分配，并且可提高 容量因子，分离因子a和分离度 R。但当浓度提高到 一 定程度，变化趋于平坦，R值也达到最大值，此时 手性分离的决定因素是络合物的离解度和疏水性。 2．2．3 温度对分离的影响 在色谱条件为手性液 (0．004 mol／L一苯丙氨酸，0．002 mol／L硫酸铜，用 氢氧化钠调节到 pH值 3．5)一甲醇(15：85)，流速为 1．000 ml／min时，考察温度从 20℃～40℃之间对 分离的影响(见表 3)。但是温度升高，可缩短分离对 象出峰时间并有利于缓解峰拖尾现象，但是温度过 高会缩短色谱柱的寿命。 维普资讯 http://www.cqvip.com 573 表 3 温度对分离的影响 3 结论 经用手性柱法和流动相添加剂法分离新药甲 磺酸帕珠沙星的比较，从分离因子和分离度的表象 来说，流动相添加剂的分离效能好于手性柱法，并 且峰形较好(见图2，3)。流动相添加剂法采用普通 的色谱柱，即可进行对映体的拆分及含量测定。并 且实验中采用水和甲醇作为流动相，从经济和安全 性考虑优于手性柱法。因而，从以上多方面优选考 虑对甲磺酸帕珠沙星进行质量的研究中，采用 流动相添加剂法可作为该项目检测方法。 mAU VWDIA．Wavelength=254I1mII x＼ BLF00034 D 20 4 t~ 尊 l 80 ． ‘ 160 。- l40 l20～ 0 图 手性柱法 i t·^ ·-_ ‘ 肼 j ：_： 一一～一 u j tt1■∞ m 一 ^ j ． ； 』 r i i ＼ I J f ＼ i 一 一 — — — — — — 、 —一 ⋯ i、、 — — 2 4 6 8 l0 l2 l 4 l^ l 8m1n 图 3 流动相添加剂法 参考文献： 【1】孙秀燕。李文．宋爱华 ．新药甲磺酸帕珠沙星的有机波谱分析 【J】．分析测试学报，2003，22(6)：22 【2】ZHU Xiao—feng．L1N Bin—cheng．Chiral resolution by capil- lary electrophoresis chromatography[J】．Chin J chromatogy。 1997，17(2)：153 【3】祝馨怡。刘淑娟。肖小华。等 ．L一苯丙氨酸键合手性配体交换色 谱固定相的制备及手性拆分【J】．分析测试学报。2002，21(6)：62 (2004—06—29收稿) ⋯ 一 ’ ’ ’ ’ ， ⋯ 一 欢迎各届校友踊跃投稿 ⋯ ⋯ 一 ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ 加"=2 维普资讯 http://www.cqvip.com