玛咖多糖抗氧化保健作用研究

食品科技 一 目荠硼究 玛咖多糖抗氧化保健作用研究 张永忠，余龙江，金文闻，李 硕 (华中科技大学生命科学与技术学院，武汉 430074) 摘要 ：探讨南美药食两用植物玛咖多糖成分的体外抗氧化保健作用。采用邻苯三酚 自氧化法、H 0 诱 导红细胞氧化溶血以及CCl4致豚鼠肝脏脂质过氧化的．观察体外给予玛咖多糖对这些氧化反应的 影响。结果表明，玛咖多糖对邻苯三酚的自氧化有微弱的抑制作用，对H O 诱导红细胞氧化溶血有显 著的抑制作用，最大抑制率达76．9％，显著减少CC1 所致豚鼠肝脏脂质过氧化代谢产物丙二醛的产生 玛咖多糖体外具有一定的抗氧化保健作用 关键词：玛咖：玛咖多糖；抗氧化 中图分类号：TS201．4 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—9989(2005)08—0097—03 Study on antioxidative activity of pOIySaCCharide frOm maca(1epidium meyenii walp．)in vitro ZHANG Yong—zhong，YU Long-jiang，JING Wen—wen，LI Shuo (School of Life Science and Technology，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430074) Abstract：The antioxidative activity of polysaccharide from Maca (Lepidium meyenii Walp．) was investigated． Scavenging superoxide anion activity was measured by the self oxidation method of pyrogallol， effect of maca polysaccharide on red blood cell hemolysis and lipid peroxidation induced by hydroxyl free radical were analyzed by colorimetric assay．Maca polysaccharide had weak effect of scavenging superoxide anion·Oi，but it exhibited a significant potency in inhibiting murine erythrocyte hemolysis， the maximal rate of inhibition was 76．9％ when its concentration reached 50pg／mL and lipid peroxidation MDA were remarkably decreased in guinea pig liver homogenate．Maca pOlysaccharide has definite effect of antioxidation in vitro． Key words：lepidium meyenii walp．：maca pOlysaccha ride：antioxidation 0 前言 Maca (音译为 “玛咖”)是十字花科植物玛咖独行 菜(Lepidium meyenii Walp．)的形似萝 卜样肥大的根茎． 原产于海拔3500～4500m的南美安第斯山区．现在主 要分布于秘鲁中部的Puna生态区和秘鲁东南部城市 Puno，是当地印加人重要的食物来源之一。它的鲜根 可以和肉或其它蔬菜一起炒熟食用．也可以晒干后 用水或牛奶煮熟食用，当地土著人常把鲜根加蜂蜜 和水果榨汁作为饮料饮用。食用玛咖可以增强精力、 收稿日期：2005—01—16 基金项目：2oo1年湖北省科技攻关项目(2002AA301C04) 作者简介：张永忠(1968一)，女(汉族)，副研究员，博士研究生，主要从事天然产物及中药的药理活性研究工作。 维普资讯 http://www.cqvip.com 目 荠 硼 究 I 消除疲劳、提高生育力 、改善性功能及女性更年期 综合症等Il】，因而有 “南美人参”的美誉。由于玛咖 的适应原样作用，以玛咖为主要原料的保健品风靡 全球 ，有关玛咖的研究和开发也受到了广泛的重视。 玛咖中除含有丰富的蛋 白质 、氨基酸、矿物质等营 养物质外，还含有玛咖烯、玛咖酰胺等活性物质【2]， 其中玛咖多糖也是玛咖中含量较丰富的活性物质。 本实验采用体外氧化实验的方法 ，评价玛咖多糖的 抗氧化作用．为深入认识玛咖、促进其在我 国的开 发利用提供实验依据。 1 材料与方法 1．1 材料及动物 玛咖根干燥粉末 ：玛雅生物有限公司：硫 代巴比妥酸：上海试剂二厂；Vc片：湖北华中药业 有限公司；邻苯三酚、H20 、CC1 、三氯醋酸(TCA)、 乙酸：国产分析纯；WFJ7200型紫外一可见分光光度 仪 ：上海尤尼柯仪器有限公司： 昆明种小 鼠，雄性 ，体重约25g；豚 鼠，雄性 ， 体重约200g，湖北省医学科学院实验动物中心提供。 1．2 玛咖多糖的提取 称取玛咖根干燥粉末 ．按1：20～1：25(w／w)~ll入溶 剂(水和碱)，90~(2提取2h，低速离心 ，残渣重复提取 1次，提取液浓缩 ，加入淀粉酶除淀粉。调节pH6．0． 用糖化酶彻底酶解淀粉酶解物，60％下维持4h。煮沸 10min灭酶 ，离心去沉淀。上清液中缓慢加入95％乙 醇醇析 ，搅拌10min，4~C冰箱中放置 12h后得到土黄 色沉淀，沉淀用Sevage法除蛋 白质 ，多糖液再醇析 1次，沉淀分别用乙醚、丙酮洗涤。真空干燥得到粗 多糖粉末。玛咖多糖为棕褐色粉末，易溶于水，临用 时用生理盐水配制。 1．3 实验方法 1．3．1 对超氧阴离子 自由基的影响 采用邻苯三酚 自氧化法 I。具体操作为 ：2．4mL Tris—HC1缓冲液 (pH8．2)，加O．1mL不同浓度的多糖溶液。混匀后加入 7mmol／L的邻苯三酚0．3mL，混匀后在第4分钟时加入 10mol／L的盐酸1滴中止反应，测A～ 值。吸光度越 低 ，清除·Oj效果越好。 ·Oj清除率(％)=(A0_-Ai)／Aox 1 00 式中：A —一 空白又寸照 ； A厂_某浓度玛咖多糖的吸光值减去其本 底值。 1．3．2 对H O2诱导红细胞氧化溶血的影响 小鼠摘眼 球取血 ，肝素抗凝 ，3000r／min离红细胞 ，冰冷 生理盐水洗3次，制成0．5％悬浮液。取红细胞悬液 食品科技 I FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY lmL，加不 同浓度 的多糖 和vc溶 液501~L，最后 加 100mmol／L HzO 混匀启动反应 ，37℃水浴1h，用生理 盐水稀释4倍．3000r／min离 D5min，取上清液测定吸 光度A ． 值 ，计算抑制率I 5]。以不加玛咖多糖为对照。 抑制率(％)=(A0_-A．)／Aox 100 1．3．3 对CCl4致小鼠肝脏脂质过氧化阻抑实验 豚 鼠 禁食 16h后颈椎脱 臼处死取肝脏 ．加 入冰冷生理盐 水，并在冰浴下制成10％肝匀浆 ，脂质过氧化产物丙 二醛(MDA)测定采用硫代巴比妥酸比色法。每管加入 lmL生理盐水 、lmL肝匀浆 、501~L样品溶液 、501~L 8o％cch乙醇溶液 ，充分混 匀后在37~(2水浴中孵育 40min，立即加10％三氯醋酸混匀离心。取上清液 2mL，加O．5％TBA显色剂2mL，加盖于沸水浴中煮沸 1 5min，冰水速冷后离心，于535nm处测上清液吸光度 值。除样品管外，另设阳性对照和阴性对照：阳性对 照不加样品，加等量生理盐水；阴性对照不加CCld和 样品，加等量生理盐水。比较阳性管与阴性管A值差 异验证阳性模型。按照以下公式计算各管抑制率： 抑制率(％)： 阳』 生 ×100 A 阳性对照 1．4 数据分析 实验组和对照组，各设4个平行管 ，数据用 ±s (平均数±差)表示，组间比较用t检验。 2 结果与分析 2．1 玛咖多糖对超氧阴离子自由基的影响 超氧阴离子 自由基是造成生物体氧化损伤的重 要自由基之一。邻苯三酚在碱性条件下会发生自氧 化 ，生成有色中间产物和超 氧阴离子 自由基，超氧 阴离子 自由基对自氧化有催化作用。 表1 玛咖多糖对超氧阴离子自由基的影响 汪 ：买验绀与对照组柑比 ， P