茶多酚的提取

茶多酚的提取及定量 作者：蒋雪薇 摘要：茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。其中以黄烷醇类物质（儿茶素）最为重要。 茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。目前从茶叶中制备茶多酚常用的方法主要分三类：溶剂提取法，离子沉淀法和柱分离制备法。本实验所用的有机溶剂浸提法，也就是将茶叶用溶剂浸渍，然后把浸取液进行液—液萃取分离，最后浓缩得到产品。 关键词：茶多酚 提取 有机溶剂 萃取 比色法测定 实验原理 茶多酚是茶叶中 30 多种多酚类物质的总称，是一类富含于茶叶中、主要由 表儿茶素、表没食子儿茶素及没食子酸酯类等组成的多羟基化合物，含量约占茶 叶干物质总量的20％～30％。茶多酚分子中带有多个活性羟基(-OH)，可终止人 体中自由基链式反应，清除超氧离子，类似 SOD 之功效。茶多酚对超氧阴离子 与过氧化氢自由基的清除率达 98％以上，呈显著的量效关系，其效果优于维生 素E和维生素C。茶多酚还有抑菌、杀菌作用，能有效降低大肠对胆固醇的吸收， 防治动脉粥样硬化，是艾滋病毒(人类免疫缺陷病毒，HIV)逆转录酶的强抑制物， 有增强机体免疫能力，并具抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、防衰老机理。茶多酚安全、 无毒，是食品、饮料、药品及化妆品的天然添加成分。目前茶多酚已在医药、饮 料、食品、保健等行业中广泛应用。茶多酚的物理性质是：外观为白色晶体， 易溶于水及有机溶液，味苦涩，茶多酚在 PH4-8 稳定。遇强碱、强酸、光照、高热及过渡金属易变质。最高耐热温度在1个半小时内，可达250℃左右，在三 价铁离子下易分解。 由于茶多酚易溶于热水，因此本实验首先用热水在一定温度下将茶多酚从茶叶中提取出来；再利用某些金属离子与茶多酚形成的络合物在一定pH值下溶解度最低的特性，将茶多酚从浸提液中沉淀出来并高效地与咖啡碱等杂质分离；经过稀酸转溶将茶多酚游离出来后，用对茶多酚具有很好选择性的有机溶剂再次对其进行萃取分离；最后将茶多酚萃取液通过真空浓缩、真空干燥得到茶多酚精品。 实验材料和仪器 1、仪器 电动搅拌器 离心机 锥形瓶 真空干燥箱 抽滤装置 烧杯 蒸发皿 容量瓶 酒精灯 移液枪 纱布 滤纸 电子天平 水浴锅 紫外分光光度计 电热恒温干燥箱 细菌过滤器 分液漏斗 2、试剂 蒸馏水 氯仿 乙酸乙酯 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 硫酸亚铁 酒石酸钾钠 硫酸 工艺过程及操作方法 实验步骤 浸提：称取15克的茶叶倒入洁净干燥的烧杯中，加入100ml的70℃的热水，搅拌下恒温浸提45min，过滤得茶叶浸提液。 2、将浸提液用纱布过滤，滤液分装在几个蒸发皿中，水浴浓缩至膏状物，将浓缩液倒入洁净、干燥的分液漏斗中。 3、萃取：向漏斗中倒入等体积的氯仿，沿着漏斗方向轻轻震荡混匀，静置分层。 4、取上层水相，在分液漏斗中加入等体积的乙酸乙酯，轻轻震荡混匀，静置分层。从下端放出水相，再倒出上层有机相。下层再用乙酸乙酯洗，如此反复三次。茶多酚在上层的有机相中，有机相为棕绿色。 5、干燥：将膏状物放入减压抽滤装置中进行干燥，氯仿和乙酸乙酯均可以回收再利用。 6、保存：将干燥好的茶多酚产品转移至蒸发皿中，称重、取样后立即用膜密封，置入棕色玻璃干燥器中于低温下避光保存。产品取样用于分析产品中茶多酚含量，计算出茶多酚的最终得率。 茶多酚含量的分析检测方法 实验原理 在一定pH值条件下，酒石酸铁能与多酚类物质反应形成蓝紫色络合物，该 络合物在 540nm 波长下具有最大吸光度。在适当的浓度范围内，茶多酚的含量 与络合物的吸光度成正比，符合朗伯－比尔定律，因此可用分光光度法对茶多酚 定量分析。 实验步骤 1、酒石酸亚铁溶液：称取1g硫酸亚铁和5g酒石酸钾钠，用水溶解并定容至1L。2、pH＝7.5的磷酸盐缓冲液：a液（1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液）：称取磷 酸氢二钠16.688g，加水溶解并稀释至500ml； b液（1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液）：称取磷酸二氢钾4.539g，加水溶解并稀释至500ml。 取a 液85mL和b液15mL混匀，即得 pH＝7.5磷酸盐缓冲溶液。 3、供试液的制备与测定：取茶多酚粗提物0.5克溶于150ml蒸馏水中，准确吸取待测溶液2mL，再注入 50mL 的容量瓶中，加水16mL 和酒石酸亚铁溶 液 20mL，充分混合，再加 pH＝7.5 的磷酸盐缓冲溶液至刻度，用 1cm 比色杯， 在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度。 实验结果 测得实际值为一、0.583 二、0.555 三、 0.571 平均值为0.570 待测溶液中茶多酚的含量用下式计算： 茶多酚（g/mL）=1.957AX/500 式中 1.957 ——用1cm比色杯，当吸光度等于0.50时，每毫升茶汤中 含茶多酚相当于1.957mg； A ——试样的吸光度 X —— 待测溶液的稀释倍数 3