黄杨叶中

黄杨叶中(-胡萝卜素的柱色谱分离和鉴定 一、实验目的 1、 通过实验了解经典的液相柱色谱的基本原理。 2、 掌握经典液相柱色谱法的设备安装和操作方法。 二、实验原理 柱色谱法按分离机理可分为液-固吸附柱色谱法和液-液分配柱色谱法。本实验采用液-固吸附柱色谱法是利用各组分在吸附剂和洗脱剂之间的吸附和溶解（解吸）能力的差异而达到分离。其方法是将混合物溶于适当溶剂中，然后加入装有吸附剂（固定相）的色谱柱，用一定极性的洗脱剂（流动相）洗脱，当组分分子达到吸附剂面时，由于吸附剂表面与组分分子相互作用，而被吸附。当洗脱剂连续通过吸附剂表面时，由于洗脱剂与组分分子的作用力，组分分子会被洗脱剂溶解下来，在一定温度下，吸附和溶解达到平衡。由于洗脱剂不断地移动，这种吸附与溶解的过程反复发生并形成新的平衡，组分分子就随洗脱剂移动，移动的速度与组分分子的平衡常数即组分在两相的分配系数和洗脱剂的流速有关，当控制洗速一定时，各组分就依据其平衡常数的不同而得到分离。 黄杨叶中含有(-胡萝卜素、叶绿素A、叶绿素B、叶黄素等多种组分，对黄杨叶的提取液，通过柱色谱进行分离，并对分离所得第一组分进行分光光度测定，以该组分为(-胡萝卜素。 三、试剂及仪器 1、试剂 层析氧化铝（150-160目），石油醚（60-90℃）乙醇，乙酸乙酯，无水硫酸钠，石英砂，(-胡萝卜素（纯） 2、仪器 色谱柱，1m×15mm玻璃柱或用50 mL酸式滴定管代替，烧杯（200ml、500ml各一个），磁研钵一个，剪刀，72型分光光度计一台 四、实验步骤 1、黄杨叶的提取 称取3g洗净后用滤纸吸干的新鲜黄杨树叶，用剪刀细细剪碎并用5mL乙醇搅拌均匀，在研钵中研细。用一次10mL和两次5mL石油醚（60-90℃）提取(研磨)，每次提取液经过塞有少量脱脂棉的三角漏斗过滤，转移到50mL分液漏斗中。合并的提取液在分液漏斗中，用20mL蒸馏水，分两次洗涤，水层弃去，醚层用少量无水硫酸钠干燥约15分钟，再把醚层经塞有棉花的三角漏斗过滤，转移到25mL的园底烧瓶中，减压浓缩至0.5ml左右，备用。 3、 装柱 如图所示，将色谱柱垂直夹于铁架台上。推一小团脱脂棉至柱底部，加洗净的石英砂于棉花上，约0.5cm厚。关闭柱下面活塞（不要涂油脂），加石油醚约至色谱柱一半高。取12g层析氧化铝倒入烧杯，加石油醚25ml，轻搅拌均匀，再打开柱活塞使柱内石油醚不断流出的同时，把烧杯内的氧化铝缓缓加入，边加边用套有橡皮塞的玻璃棒轻轻敲打，使填充均匀，无气泡。当色谱柱顶部液面下降到距氧化铝层高1cm时，关闭活塞。于上面加入0.5cm厚的石英砂，并使溶剂液面刚好浸住石英砂面。 4、 加样 将上述提取的黄杨叶浓缩液，用滴管小心地加到色谱柱的顶部，打开色谱柱下面活塞，待样品溶液的液面接近色谱柱顶面时，关闭活塞，加入适量石油醚，打开活塞，让液面接近色谱柱顶面。重复几次，使样品全部进入色谱柱的顶部。 5、 淋洗 用体积比为3:2的石油醚（60-90℃）和乙酸乙酯的混合溶剂作淋洗液，向色谱柱顶部加入淋洗液(加满)，同时打开色谱柱下部活塞，使淋洗液逐滴流出，用小试管收集淋洗液，当第一组分（黄色的色带）开始滴出时，换另一干净的小试管收集全部黄色色带；其余色带用同样的方法收集（共4个）。 6、 (-胡萝卜素的薄层色谱鉴定 用(-胡萝卜素的溶液作对照样，用薄层色谱[a]确定上述得到的多个组分哪个是(-胡萝卜素？计算出(-胡萝卜素的Rf值。 备注： [a] 薄层板为硅胶薄层板（自制）：在50mL烧杯中，加入3g硅胶，用0.5%的CMC 8 mL调制成均匀的糊状，将此糊状物涂于干净的玻片上，制成4块薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，在室温下放置0.5小时后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5小时，冷却后备用。薄层色谱时用体积比为3:2的石油醚（60-90℃）和乙酸乙酯的混合溶剂作展开剂。 � EMBED ChemDraw.Document.6.0 ��� _1383648506.cdx