CIK细胞过继免疫治疗中晚期恶性肿瘤的临床研究

CIK细胞过继免疫治疗中晚期恶性肿瘤的临床研究 辽宁三早肿瘤医学研究院( 110042) 鲍 锋 徐 岩 尹富华 梁 辉 黄雁南 =摘 要> 目的 系统观察和 CIK 细胞过继免疫疗法对多种中晚期恶性肿瘤的临床疗效。方法 用淋巴细胞 分离液分离外周血单个核细胞,后加入 IFNr、IL22和 CD3 单抗等在 5%CO2 条件下定向诱导扩增 CIK 细胞。培养 15 天后分次回输给患者,随访观察患者治疗前后瘤体变化、T 淋巴细胞 rDNA 转录活性的改善、临床症状改善、生活质 量、卡氏评分及体重变化等, 同时记录生存期。结果 在 256 例接受 CIK 细胞治疗患者中, PR+ MR 为 207 例, 总缓 解率为 80. 86% , 随访 1 年生存期为 96. 09% , 2年生存期为 92. 96%和 3 年生存期为 88. 28%。临床症状治疗前、后有 明显改善,V2= 68. 17 , P < 0. 001,有显著性差异;生存质量卡氏评分提高率为 88. 28% ;治疗前后 T 淋巴细胞 rDNA 转录活性,差异非常显著, P < 0. 01;体重多数有增加。结论 CIK 细胞过继免疫合用中药疗法对多种中晚期恶性肿 瘤具有广谱高效杀抑瘤作用,能明显地提高患者免疫功能,减轻临床症状, 提高生活质量,延长生存期。 =关键词> 恶性肿瘤 过继免疫治疗 细胞因子诱导的杀伤细胞 本研究将我院 1999年 9月至 2001年 3月应用 CIK 细胞过继免疫治疗的 256 例中、晚期恶性肿瘤 的临床疗效进行了系统的随访观察, 现将临床观察 结果如下。 1 资料和方法 1. 1临床资料 本组 256 例患者均经 B超、X 线、 CT、细胞学及病理学或核磁共振等方法检查确诊为 恶性肿瘤者,并根据国际抗癌联盟(U ICC)分期 进行临床分期, 其中 Ñ - Ò 期患者占 17. 6%, Ó - Ô 期患者占 82. 4% ,其中男 119例,女 137例,年龄 19 ~ 83岁,平均 57. 39岁, 40~ 60岁占 64. 45%。病程 最短 7 天, 最长 3 年。其中乳腺癌 67 例, 肺癌 56 例,肠癌 37例, 胃癌 28例,淋巴瘤 20例, 其他肾癌、 恶性黑色素瘤、食管癌、肝癌、脑瘤、卵巢癌等 48例。 256例中接受 CIK过继免疫治疗 4 个疗程的患者 1 例, 3个疗程 17例, 2个疗程 30例,余者 1个疗程。 1. 2 CIK细胞制备及回输 抽取外周血用Ficol分离 并收集单个核细胞, 用 RPMI- 1640洗涤 3 次, 将细 胞按 1@106/ ml悬浮于 RPMI21640完全培养基中。 第 1天加入 IFN2r1000u/ ml, 24 小时后加入 rhIL22 1000u/ ml, ant i2CD3McAb 50ng/ ml、IL21 200u/ ml,在 37 e 、5% CO2 孵箱中培养。以后每 3天换液并调整 细胞数为 1 @106/ ml, 同时补加 rhIL22 1000u/ ml。 CIK 细胞培养 14~ 28天,取少许培养细胞做流式细 胞仪检测, 当 CD3+ CD56+ 细胞数 \ 50%, CD3+ CD8 + 细胞 \ 30% ,且细菌及真菌培养阴性时即收集 细胞。经生理盐水洗 3次,加入 1%人血白蛋白生理 盐水中回输。一般分批回输, 1疗程输注的细胞总数 为1. 6 @1010以上。以后第 2年输注 2个疗程, 第 3 年输注 1个疗程。 1. 3 观测指标及疗效判定 观测指标包括瘤体变 化、生存期、临床症状、生存质量、体重及免疫功能、 不良反应等。肿瘤瘤体变化评价, 参照实体瘤疗效 标准,以患者治疗前及治疗后 1个月 CT 及B超进行 对照比较,以完全缓解(CR) , 部分缓解( PR) ,轻度缓 解(MR) ,稳定( SD) ,进展( PD)进行疗效评定,缓解 率= CR+ PR+ MR, 并观察治疗前、后对心、肝、肾及 消化道的影响。 2 结 果 2. 1 瘤体变化 本组 256 例恶性肿瘤患者, 经 CIK 细胞治疗后瘤体变化情况见表 1。 2. 2 生存期 存活率: 1年生存期为 96. 09%, 2年生 存期为 92. 96%, 3年生存期为 88. 28%。对经治的 256例患者随访 3年, 生存期情况见表 2。 2. 3 临床症状改善情况 按临床症状积分值下降 \ 2/ 3为显著改善,积分下降 1/ 3 为部分改善, 积分下 降< 1/ 3为无改善。结果见表 3。 表 1 治疗后肿瘤变化情况 总例数 CR PR MR SD PD 总缓解率(% ) 256 0 10 197 46 3 80. 86 表 2 治疗后生存期情况 时间(年) 随访例数 存活例数 治疗后生存率( %) 1 256 246 96. 09 2 256 238 92. 96 3 256 226 88. 28 #187#辽宁医学杂志 2003年第 17卷第 4期 表 3 治疗后症状分析( n= 256) 症状 治疗前( n) 治疗后( n) 缓解率( % ) V2 P 倦怠乏力 60 2 96. 67 61. 73 0. 01 少气懒言 0. 01 自汗失眠 126 2 98. 41 160. 21 0. 01 食欲不振 98 54 75. 86 18. 11 0. 01 动则气短 56 4 92. 85 51. 05 0. 01 治疗前、治疗后相比, V2= 68. 17, P < 0. 01 2. 4 生存质量改善 对 256 例患者用 Karnofsky评 分及体重的改变来评估生存质量的改善。治疗后 Karnofsky评分平均提高 10~ 20 分, 其中提高 226 例,稳定 25 例, 下降 5例,提高率为 88. 28%。治疗 后患者平均体重增加 1~ 2kg,其中提高 196例,稳定 55例,下降 5例, 提高率为 76. 56%。 2. 5免疫功能情况 对256例患者治疗前、后免疫功 能的评估,除常规测定 CD3、CD4、CD8 和 CD56外,结 合本院条件, 用 SZ2Ag2NoRs检测仪观察了 T 淋巴 细胞 rDNA转录活性,分析 I/ S值,以评估治疗后免 疫功能的改善。治疗前、后比较, 治疗后免疫功能提 高,差异非常显著, P < 0. 01。见表 4。 表 6 SZ2Ag2NoRs检测 I / S值 结果 (…x ? s) 病例 治疗前 治疗后 256 5. 41 ? 0. 33 6. 29 ? 0. 41 P< 0. 01 2. 6不良反应 本组 256例恶性肿瘤患者经CIK过 继免疫治疗后, 对心、肝、肾功能均未引起不良反应, 仅有数例患者, 输入 CIK 细胞后有一过性发热反应 (温度 [ 38. 5 e ) , 24小时内即降至正常。 3 讨 论 CIK(Cytokine2Induced Killer)细胞最初是指在 正常人体外周血中仅占 1~ 5的 CD3+ CD56+ 的 T 淋 巴细胞。该细胞在细胞因子及某些单克隆抗体 (Ant i2CD3McAb)刺激下,可戏剧性增殖( 1000倍以 上) , 并有广泛的非组织相关性抗原(MHC)限制的极 强溶瘤活性[1]。但目前国内外制备的用于过继免疫 治疗的 CIK 细胞, 实际是体外扩增出的 CD3+ CD56+、CD3+ CD8+ 为主的一异质性细胞群[ 2, 3]。其 可通过三种途径发挥杀瘤、溶瘤的作用,即: ( 1)CIK 细胞对肿瘤细胞的直接杀伤, 在体内受某些淋巴因 子作用后 CIK细胞大量释放具有细胞毒性的胞浆颗 粒到胞外,这些颗粒直接破坏瘤细胞; ( 2)进入体内 活化的 CIK 细胞可分泌多种细胞因子如干扰素 r ( IFNr)、肿瘤坏死因子( TNF2a)和白介素22 等, 不仅 对肿瘤细胞有直接抑制作用,而且还可通过调节免 疫系统间接杀伤瘤细胞; ( 3)CIK细胞表达 Fasl可诱 导肿瘤细胞凋亡, 但 CIK 细胞由于有抗凋亡基因表 达,因此在体内能抵抗 Fasl阳性肿瘤细胞对 CIK的 反作用,故 CIK 能对肿瘤细胞持久的发挥溶瘤作用。 本研究采用 Schmidt- wolf 等所述方法[1]略加修改, 制备出的 CIK 异质细胞群中 CD3+ CD56+ 细胞> 50% , CD3+ CD8+ 细胞> 30% , 是一种高溶瘤活性的 CIK 细胞,因此对 256例恶性肿瘤的过继免疫治疗 获得了极佳疗效。 本研究对我院 1999年 9月至 2001年 3月收治 的 256例恶性肿瘤患者采用 CIK细胞过继免疫治疗 的详尽临床资料进行了初步分析。结果显示,在 256 例医治的恶性肿瘤患者中, 绝大多数经我院综合治 疗后瘤体有不同程度的缩小( PR: 10/ 256, MR: 197/ 256)总缓解率达 80. 86%, 见表 1。该组患者经治疗 后 3年生存期为 88. 28% ( 226/ 256) ,且临床症状如 倦怠乏力、失眠、食欲不振等均有十分明显的改善 (见表 2、3)。本研究还采用 Karnofsky评定法和治 疗前后体重的改变两项指标评估了患者的生存质 量,结果显示, 治疗后 Karnfsky评分平均提高 15分 左右,体重平均增加 1. 5 d。表明, 经本院系统综合 治疗后患者生存质量有了明显好转。与其他 CIK 细 胞治疗恶性肿瘤的结果一致[ 4, 5]。 4 参考文献 1 Schmidt2Wolf IG.H. , Negrin RS, Kiem HP, et al. Use of a SCID Mouse/Human lymphoma model to evaluate cytokine2induced killer cells with potent ant itumor cell act ivity. J Exp Med, 1991; 174: 139 2 Margolin KA, Negrin RS, Forman SJ , etal. Cellular immunotherapy and autologous t ransplantation for hematologic mallgnan cy [ J ] . Immunol Rev, 1997; 157: 231 3 LU PH, Negrin RS. A novel population of expan ded human CD3+ CD56+ cell derived from T cells with potent in vivo antitumor act ivity in mice with severe combined immunodeficiency J Immunol, 199; 153:1687 4 陈复兴,刘军权,张南征,等. 自身细胞因子诱导的杀伤细胞过继 免疫治疗恶性肿瘤的临床观察 1 癌症, 2002; 21( 7) ; 797 5 Finke J, Frrone S , Fuey A, et al. Where have all the T cells gon e? Mechan isms of immuno evasion by tumors [ J ] . Immune Today, 1999; 20( 4) : 158 (本文编辑 佟 昕) #188# 辽宁医学杂志 2003年第 17卷第 4期