红花活络酒薄层鉴别实验

红花活络酒薄层鉴别实验 　　　　红花活络酒为贵州民间治疗跌打损伤引起的各种疼痛的验方，方中主要由续断、红花、灵芝、虫草等中药组成，具有活血祛瘀、消肿止痛的功效。本实验对该制剂进行薄层鉴别，用以控制其质量。 　　1 仪器与试药 　　ZF 型薄层三用紫外仪（ 上海将来实验设备有限公司） ,硅胶 G、H、GF254 板（ 青岛海洋化工有限公司） . 　　续断、红花、灵芝、虫草对照药材（ 均购自中国食品药品检定 研 究 院，批 号 分 别 为： 121033 - 201110,120907 -201111,120968 - 201107,121201 - 200502） ,其余试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2. 1 灵芝 　　取本品 25 ml,蒸干，残渣加乙醇 30 ml 溶解，超声处理10 min,滤过，滤液浓缩至 5 ml,过中性氧化铝柱（ 100 ~ 200目，2 g,内径 1. 5 cm） ,用乙醇洗至无色，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇 2 ml 溶解，作为供试品溶液。另取灵芝对照药材 1 g,加乙醇 30 ml,超声提取 30 min,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 2 ml 溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 2 μl,分别点于同一块硅胶 G 板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸（ 10∶ 5∶ 1） 的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（ 365 nm） 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照色谱无干扰。 　　2. 2 虫草 　　取本品 50 ml,蒸干，残渣加乙醇 50 ml 溶解，超声处理10 min,滤过，滤液浓缩至 5 ml,蒸干，残渣用甲醇 2 ml 溶解，作为供试品溶液。另取冬虫夏草虫草对照药材 1 g,加乙醇30 ml,超声提取 30 min,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 2 ml 使其溶解，作为对照药材溶液。以氯仿-乙酸乙酯-异丙醇-水-氨水（ 8∶ 2∶ 6∶ 0. 4 -0. 8∶ 0. 12） 为展开系统[1],硅胶GF254 板展开，并在 254 nm 紫外光灯下检视。结果，在展开剂的顶点供试品溶液与对照药材溶液相应位置处隐约有对应的斑点。但经反复试验后发现，该方法的重新性差，达不到薄层鉴别的效果。 　　2. 3 续断 　　按照 2010 版药典中续断的薄层鉴别方法，对制剂中的续断进行研究。供试品色谱在与对照药材及对照品色谱相应的位置上无对应斑点。后经改变展开剂的比例及提取方法均无对应的斑点。查阅相关文献，采用乙酸乙酯-甲醇-甲酸（ 5∶ 2∶ 1）[2]、正丁醇-乙酸乙酯-稀氨水（ 4∶ 1∶ 5,上层溶液）[3]等为展开系统，经反复摸索，供试品色谱在与对照药材及川续断皂苷Ⅵ对照品色谱相应的位置上无对应的斑点。 　　2. 4 红花 　　按照 2010 版药典中红花的薄层鉴别方法，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（ 7∶ 2∶ 3∶ 0. 4）[4]为展开剂，在硅胶H 板上进行展开，结果，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置无对应的斑点，因此，又参考了大量文献，以乙酸乙酯、水饱和正丁醇等为提取溶剂，分别以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（ 5∶ 4∶ 1）[5]、乙酸乙酯[6]等溶剂系统为展开剂进行展开。经反复摸索，薄层层析的效果均不理想。之后又采用 AB -8 大孔吸附树脂对样品进行纯化，但供试品色谱在与红花对照药材色谱相应的位置无对应的斑点。 　　3 结论与讨论 　　采用以上方法对红花活络酒进行了薄层鉴别，其中灵芝薄层斑点清晰，重现性好，为该制剂质量的制定提供了参考。虫草、续断、红花经反复试验，均得不到理想结果，故不再考虑将其薄层列入质量标准。 　　灵芝薄层鉴别中，经参考文献采用了石油醚-甲酸乙酯-甲酸（ 15∶ 5∶ 1,）[7]、环己烷-甲酸乙酯-甲酸（ 15∶ 5∶ 1）[8]、石油醚-乙酸乙酯-甲酸（ 6∶ 4∶ 0. 5）[9]分离效果均不明显，重现性差。 　　红花活络酒组方较复杂，采用单一化学对照品难以鉴别，因此以上 4 味药均采用其对照药材做参照，其中灵芝的薄层鉴别专属性强，重现性好，能够用于该制剂的质量控制。 　　参考文献： 　　[1] 马 艳，汪 宇，杨光照，等。 双波长薄层扫描法测定虫草类制剂中核苷类化合物的含量[J]. 中国药房，2008,19（ 30） : 2376. 　　[2] 吴知行，周胜辉。 川续断中挥发油的分析[J]. 中国药科大学学报，1994,25（ 4） :202 -204. 　　[3] 陈雪婷，李素梅，李养学。 祛风健骨片的质量标准研究[J]. 今日药学，2012,22（ 11） :690 -692. 　　[4] 国家药典委员会。 中华人民共和国药典 2010 年版（ 一部） [S]. 北京： 中国医药科技出版社，2010. 141 -142. 　　[5] 余淑珍，常星洁，严 冬，等。 麦贞花颗粒的薄层鉴别[J]. 云南中医中药杂志，2012,33（ 7） :47 -48. 　　[5] 苏 强，倪 艳，王瑞明，等。 祛斑洁颜胶囊的薄层鉴别和黄芩苷的含量测定[J]. 中成药，2003,25（ 1） : 30 -32. 　　[7] 国家药典委员会。 中华人民共和国药典（ 2010 年版） 一部[S]. 北京： 中国医药科技出版社，174 -175. 　　[8] 赵晓立，严国鸿，毛德春，等。 灵芝孢子胶囊薄层色谱鉴别[J]. 福建分析测试，2005,（ 14） 4:2316 -2317. 　　[9] 李勇军，何 迅，郑 林，等。 蒲薏颗粒的定性定量研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2010,16（ 4） :24 -27.